趙江濤

(甘肅省中醫(yī)院耳鼻喉科，甘肅 蘭州 730050)

·臨床研究·

通竅鼻炎丸對復(fù)發(fā)性鼻息肉患者TLR-2和HO-1的影響*

趙江濤

(甘肅省中醫(yī)院耳鼻喉科，甘肅 蘭州 730050)

目的：觀察通竅鼻炎丸對復(fù)發(fā)性鼻息肉患者Toll樣受體-2(TLR-2) 、血紅素加氧酶-1(HO-1)的影響。方法：選擇復(fù)發(fā)性鼻息肉40例患者作為治療組，并隨機選擇健康志愿者30例作為對照組。治療組口服通竅鼻炎丸，3粒/次，3次/d。連續(xù)治療1個月后判定療效。結(jié)果：治療組治療前、后TLR-2、HO-1蛋白含量均明顯高于對照組(P<0.05)，且治療組治療后TLR-2、HO-1蛋白含量明顯低于治療前(P<0.01)。結(jié)論：通竅鼻炎丸能夠有效降低復(fù)發(fā)性鼻息肉患者鼻息肉組織中TLR-2、HO-1含量，對復(fù)發(fā)性鼻息肉的治療有重要的臨床意義。

復(fù)發(fā)性鼻息肉/中醫(yī)藥療法；通竅鼻炎丸/治療應(yīng)用；Toll樣受體-2；血紅素加氧酶-1；臨床觀察

鼻息肉是臨床鼻科常見的慢性疾病，在中醫(yī)學中歸為“鼻淵”“鼻痔”范疇，主要表現(xiàn)為鼻塞，嚴重時會堵塞鼻腔。臨床研究[1]指出：耳鼻喉科門診中，鼻息肉患者占1%～3%，發(fā)病以中年人居多，其中男性略高于女性。近年來，該病有明顯增高趨勢。本病發(fā)病機制與多種因素有關(guān)，其中遺傳因素、免疫缺陷、纖毛功能障礙、Young綜合征等均可導(dǎo)致本病發(fā)生。研究[2-3]顯示：先天性免疫具有重要的特異性分辨病原體和自身的能力，這可能是導(dǎo)致鼻息肉發(fā)病重要原因，其中具有代表性的是Toll樣受體(toll-like receptors，TLRs)及血紅素加氧酶(heme oxygenase, HO)。2015年12月—2016年8月，筆者采用蛋白質(zhì)印跡法檢測通竅鼻炎丸治療復(fù)發(fā)性鼻息肉前后及正常鼻黏膜中TLR-2、HO-1蛋白的表達情況，總結(jié)報道如下。

1 臨床資料

選擇本院耳鼻喉科就診的復(fù)發(fā)性鼻息肉患者40例作為治療組，并隨機選擇健康志愿者30例作為對照組。治療組40例，其中男24例，女16例；年齡平均(43.42±8.75)歲；病程平均(16.4±7.5)個月。對照組30例，其中男15例，女15例；年齡平均(40.26±9.53)歲。兩組一般資料對比，差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

2 診斷標準

按照《慢性鼻竇炎鼻息肉臨床分型分期及內(nèi)窺鏡鼻竇手術(shù)療效評定標準(1997年,海口)》[4]中復(fù)發(fā)性鼻息肉的診斷標準。

3 試驗病例標準

3.1 納入病例標準

①符合復(fù)發(fā)性鼻息肉的診斷標準；②年齡20～65歲；③知情同意，并簽署知情同意書等相關(guān)文件者。

3.2 排除病例標準

①不符合復(fù)發(fā)性鼻息肉的診斷標準者；②妊娠、哺乳(母乳喂養(yǎng))期婦女；③已知或懷疑對本試驗藥物過敏，或?qū)δ承┦澄铩⑺幬镞^敏體質(zhì)者；④入選前3個月內(nèi)正在參加另一個臨床試驗者；⑤患有其他疾病不適合繼續(xù)本研究者。

3.3 剔除病例標準

①試驗因故中斷改用其他方法者；②資料不完善，無法判斷療效者；③不按照設(shè)計方案治療，或同時進行其他治療者。

3.4 脫落病例標準

①治療未完全結(jié)束而自停治療者；②治療結(jié)束，未按要求隨訪檢查者。

4 治療方法

治療組口服通竅鼻炎丸(由甘肅省中醫(yī)院藥房制備，制劑批號150814，0.5 g/粒)，3粒/次，3次/d。連續(xù)治療1個月后判定療效。

5 檢測方法

5.1 組織提取

提取治療組治療前、后和對照組的鼻黏膜、鼻息肉組織，用生理鹽水清洗，去除血液和黏液，迅速將樣本切成3～5 mm3小塊，置入凍存管中，置于-80 ℃冰箱冷凍保存。

5.2 蛋白質(zhì)印跡法

聚偏二氟乙烯(PVDF)膜購自樂清騰祥膜技術(shù)有限公司，批號GVWP025001；一抗購自Genscript公司，批號A01830-40；羊抗兔二抗IgG-HRP購自Invitrogen公司，批號A00131；ECL顯色試劑盒購自YEASEN 公司，批號P0018。按照說明書指示操作，在膜成像系統(tǒng)下顯色成像并拍照，用 Image J分析軟件分析圖片上特異條帶的灰度值變化，記錄吸光度值，除以相同來源的總蛋白質(zhì)中β-actin條帶的吸光度值，進行半定量測定。吸光度比值越大，說明蛋白表達量越高。

6 統(tǒng)計學方法

7 結(jié) 果

7.1 治療組治療前、后和對照組TLR-2 和 HO-1蛋白含量灰度值對比

見表1。

組 別例數(shù)時間TLR-2HO-1治療組40治療前1.56±0.25**1.78±0.32**治療后0.84±0.47**##0.95±0.51**##對照組300.27±0.08 0.21±0.12

注：與對照組對比，** P<0.05；與同組治療前對比，## P<0.01。

7.2 治療組治療前、后和對照組TLR-2蛋白含量表達情況

見圖1。

a.對照組；b.治療組治療前；c.治療組治療后圖1 治療組治療前、后和對照組TLR-2蛋白含量表達情況

7.3 治療組治療前、后和對照組HO-1蛋白含量表達情況

見圖2。

a.對照組；b.治療組治療前；c.治療組治療后圖2 治療組治療前、后和對照組HO-1蛋白含量表達情況

8 討 論

鼻淵首次見于《素問·氣厥論》，曰：“膽移熱于腦，則辛頞鼻淵。鼻淵者，濁涕下不止也?！薄夺t(yī)學正傳》曰：“觸冒風寒，始則傷于皮毛，而成鼻塞不通之候，或為濁涕，或流清汁……鼻淵此為外寒束內(nèi)熱之證也?！薄侗静菥V目》曰：“鼻淵，流濁涕，是腦受風熱?！薄秹凼辣Ｔ吩唬骸胺虮钦叻沃?。時常和則吸飲香臭矣?！薄夺t(yī)醇義》曰：“腦漏者，鼻如淵泉，涓涓流涕，致病有三，曰風也，火也，寒也?！币陨霞汝U述了鼻淵的發(fā)病原因，又說明了鼻淵的發(fā)病機制。

TLR-2是TLRs家族中表達范圍最廣的革蘭陽性菌的天然識別受體[5]。TLR-2在活化后可以通過TLRs-MyD88-IRAK-NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)黏膜，激活NF-κB產(chǎn)生疫反應(yīng)。NF-κB是炎癥反應(yīng)的核心調(diào)節(jié)因子之一，在機體內(nèi)能夠參與多種炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答及細胞生長的表達調(diào)控[6]。研究[7]顯示：在鼻息肉發(fā)病過程中，NF-κB起關(guān)鍵作用。機體的NF-κB過表達是鼻息肉發(fā)病的重要標志[8-9]。本研究發(fā)現(xiàn)：復(fù)發(fā)性鼻息肉組織中TLR-2蛋白的表達顯著高于正常鼻黏膜組織，但經(jīng)通竅鼻炎丸治療TLR-2蛋白的表達量明顯降低(P<0.05)。此表明：通竅鼻炎丸能夠有效降低鼻息肉患者TLR-2含量，促進疾病的治療。

HO是調(diào)節(jié)血紅素代謝的一種限速酶。HO-1是其中的誘導(dǎo)型酶，是人體最容易被誘導(dǎo)的抗氧化內(nèi)源性的保護蛋白質(zhì)即熱休克蛋白32，在機體內(nèi)主要承擔組織的抗氧化、抗細胞增殖與凋亡、維持循環(huán)及調(diào)節(jié)免疫等。正常情況下，HO-l在網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞系統(tǒng)和骨髓中產(chǎn)生，在肝、脾、心血管等部位發(fā)生高表達現(xiàn)象，其他部位表達水平較低[10]。HO-1能夠與多種物質(zhì)或因素結(jié)合表達，對機體的應(yīng)激反應(yīng)有重要作用[11]。研究[12-13]指出：HO-l適量表達能夠減輕細胞損傷；而過表達時，會激發(fā)乳酸脫氫酶的大量釋放，抑制谷胱苷肽轉(zhuǎn)移酶的產(chǎn)生，破壞細胞膜完整性。結(jié)合本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：HO-1在復(fù)發(fā)性鼻息肉患者的組織中出現(xiàn)過表達，進而導(dǎo)致鼻息肉發(fā)生。本研究結(jié)果顯示：復(fù)發(fā)性鼻息肉患者組織中的HO-1蛋白的表達量顯著高于正常鼻黏膜組織(P<0.05)；口服通竅鼻炎丸治療后，患者鼻息肉組織中TLR-2的表達量較治療前顯著降低(P<0.05)。此表明：通竅鼻炎丸能夠有效降低復(fù)發(fā)性鼻息肉患者組織中TLR-2含量。

通竅鼻炎方是甘肅省中醫(yī)院院內(nèi)制劑，主要由黃芩、梔子、辛夷、白芷、蒼耳子、薄荷、甘草等組成，具有清郁除熱、補肺脾之氣、宣通鼻竅的作用。方中重用黃芩，因黃芩苦寒,清熱燥濕、瀉火解毒，善清膽、肺之熱，故為君藥。梔子苦寒，清熱利濕，瀉火解毒，善清肺、三焦之熱，為臣藥。黃芩與梔子合用，以黃芩清肺、膽之熱，借梔子輕清上行之效，瀉肺火，祛膽熱，瀉熱利濕。辛夷散風寒，通鼻竅；白芷除濕通竅，消腫排膿；蒼耳子散風除濕，通鼻竅；薄荷清目透疹，宣散風熱。以上藥物共為佐藥。甘草調(diào)和諸藥，為使藥。諸藥相伍，寒熱并用，苦辛并進，補瀉兼施，使補而不滯、瀉不傷正。綜觀全方，用藥配伍有三重特點：一是上、下焦熱同除，升降并行；二是邪正兼顧，清熱補氣兼施；三是氣血并調(diào)，標本兼顧。

本研究表明：通竅鼻炎丸能夠明顯改善復(fù)發(fā)性鼻息肉患者TLR-2 和HO-1蛋白含量。此體現(xiàn)了中醫(yī)藥治療慢性疾病的積極意義，但其具體機制仍是今后實驗及臨床需要探究的問題。

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(編輯 顏 冬)

1001-6910(2017)01-0016-03

R765.25

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10.3969/j.issn.1001-6910.2017.01.07

甘肅省中醫(yī)藥管理局科研課題項目(GZK-2016-38)

2016-09-13；

2016-12-19