魏彩彩，李雪利，郝 磊，馮玉康，張風(fēng)林，霍保軍，李軍山，陳 鐘（神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，石家莊 051430）

正交試驗(yàn)優(yōu)化余甘子配方顆粒的提取工藝研究Δ

魏彩彩＊，李雪利，郝 磊，馮玉康，張風(fēng)林，霍保軍，李軍山，陳 鐘（神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，石家莊 051430）

目的：優(yōu)化余甘子配方顆粒的提取工藝。方法：以沒食子酸含量、出膏率的綜合評(píng)價(jià)結(jié)果為指標(biāo)，以加水倍數(shù)、提取次數(shù)和提取時(shí)間為因素，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)優(yōu)化余甘子配方顆粒的提取條件并進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果：余甘子配方顆粒最優(yōu)提取工藝為飲片加12倍水，提取2次，每次提取1 h。驗(yàn)證試驗(yàn)中出膏率平均值為30.44%（RSD＝2.07%，n＝3）、沒食子酸含量平均值為8.12%（RSD＝0.86%，n＝3）。結(jié)論：優(yōu)化的提取工藝穩(wěn)定，可為余甘子配方顆粒的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化生產(chǎn)提供依據(jù)。

余甘子；配方顆粒；正交試驗(yàn)；提取工藝

余甘子是大戟科植物Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果實(shí)，是維吾爾醫(yī)藥中一味重要的治療胃肝病的常用藥材，主要產(chǎn)于印度、中國、緬甸、馬來西亞、巴基斯坦等地，在我國的廣東、云南、江西、廣西、福建、貴州、海南等?。▍^(qū)）均有分布[1-2]。余甘子富含多酚類、多糖、萜類、維生素、蛋白質(zhì)、氨基酸和生物堿等成分[3-8]，具有清熱涼血、消食健胃、生津止渴、保肝解毒之功，用于血熱血瘀、消化不良、腸胃炎、腹瀉、腹脹、咳嗽、喉痛、肝病、口干等的治療[9]。

中藥配方顆粒以療效穩(wěn)定、攜帶方便及服用簡便等優(yōu)點(diǎn)備受歡迎[10]。本課題組擬將余甘子制成配方顆粒，在本試驗(yàn)中采用正交試驗(yàn)法，以沒食子酸含量、出膏率的綜合評(píng)價(jià)結(jié)果作為主要考察指標(biāo)，優(yōu)化余甘子的提取工藝條件，為余甘子配方顆粒的生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

LC 20AT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；CPA225D型電子天平[德國賽多利斯（上海）貿(mào)易有限公司]；DHG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；HH-S8型電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）。

1.2 藥材、對(duì)照品與試劑

余甘子飲片（河北安國中藥材市場(chǎng)，批號(hào)：151101，經(jīng)河北省藥品檢驗(yàn)所孫寶惠主任中藥師鑒定為大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果實(shí)）；沒食子酸對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110831-201204，純度：89.9%）；甲醇、磷酸均為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取方法

取余甘子飲片100 g，加水浸泡一定時(shí)間，加熱回流提取一定時(shí)間，得提取液。

2.2 出膏率的測(cè)定

精密吸取余甘子提取液25 mL，置于干燥至恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干；于105℃干燥3 h后置于干燥器中冷卻1 h，迅速稱質(zhì)量，計(jì)算出膏率[（m1－m2）×V1/V2×m×100%]，其中m1為蒸發(fā)皿恒質(zhì)量與干膏質(zhì)量之和，m2為蒸發(fā)皿恒質(zhì)量，m為藥材質(zhì)量，V1為提取液總體積，V2為量取的提取液體積。

2.3 沒食子酸含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件確定 參考文獻(xiàn)[9]確定色譜條件。色譜柱：Gemini C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸溶液（5∶95）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長：273 nm；進(jìn)樣體積：10 μL。理論板數(shù)按沒食子酸峰計(jì)應(yīng)不低于2 000。

2.3.2 對(duì)照品溶液制備 取沒食子酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.25 mg的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液制備 精密吸取余甘子提取液1 mL至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 專屬性考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液（正交試驗(yàn)9號(hào)）及溶劑甲醇各10 μL，注入色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果其他物質(zhì)對(duì)主成分測(cè)定未見干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.3.5 線性關(guān)系考察 精密稱取沒食子酸對(duì)照品適量，加甲醇溶解并定容至25 mL，得對(duì)照品貯備液（0.43 mg/mL）；分別精密量取貯備液1、2、4、6、8 mL，用甲醇定容至10 mL，取包括貯備液在內(nèi)的6個(gè)質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10 μL，注入色譜儀測(cè)定。以沒食子酸質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為y＝3 018.0x+22.4（r＝0.999 9，n＝6）。結(jié)果表明，沒食子酸檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.043～0.344 mg/mL。

2.3.6 精密度考察 取“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定5次，計(jì)算得沒食子酸峰面積的RSD為0.24%（n＝5）。

2.3.7 重復(fù)性考察 精密吸取同一余甘子提取液1 mL共6份，按“2.3.3”項(xiàng)下操作，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得沒食子酸峰面積的RSD為1.73%（n＝6）。

2.3.8 定量限與檢測(cè)限考察 將沒食子酸對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋成不同質(zhì)量濃度的溶液進(jìn)樣分析，測(cè)得其信噪比為10時(shí)的定量限為4.23μg/mL，信噪比為3時(shí)的檢測(cè)限為1.27μg/mL。

2.3.9 穩(wěn)定性考察 精密吸取同一余甘子提取液1 mL，按“2.3.3”項(xiàng)下操作，分別于放置0、1、8、24、48、72 h后進(jìn)樣10 μL，計(jì)算得沒食子酸峰面積的RSD為0.49%（n＝6），表明供試品溶液在72 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.10 回收率考察 精密量取已知含量的余甘子提取液1 mL，分別加入沒食子酸對(duì)照品溶液2 mL，混勻，定容至10 mL，平行操作6份。分別進(jìn)樣10 μL測(cè)定，結(jié)果平均回收率為100.04%（RSD＝0.57%，n＝6），表明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.3.11 樣品含量測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液10 μL，注入色譜儀測(cè)定，計(jì)算沒食子酸的含量。

2.4 正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，確定飲片浸泡時(shí)間為0.5 h；另選擇可影響提取效果的加水倍數(shù)（A）、提取次數(shù)（B）和提取時(shí)間（C）為考察因素，以出膏率（W）和沒食子酸的含量（c）為考察指標(biāo)（二者組成的綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)計(jì)算公式為Wi/Wmax×40%+ci/cmax×60%），采用L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)。因素與水平見表1，試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表1 因素與水平Tab 1 Factors and levels

由表3可以看出，提取次數(shù)對(duì)綜合評(píng)價(jià)結(jié)果有顯著影響，對(duì)出膏率影響不顯著，而加水倍數(shù)和提取時(shí)間對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)影響均不顯著。提取次數(shù)是該提取工藝的重要影響因素，根據(jù)直觀分析得出提取2次最合適；另再結(jié)合直觀分析和成本選擇A3C2。故優(yōu)化后工藝為A3B2C2，即加入12倍水量提取2次，每次提取1 h。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

按照優(yōu)化后的提取工藝，分別取500 g余甘子飲片進(jìn)行3次試驗(yàn)，結(jié)果出膏率平均值為30.44%（RSD＝2.07%，n＝3）、沒食子酸含量平均值為8.12%（RSD＝0.86%，n＝3），表明優(yōu)化工藝穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。

3 討論

表2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Tab 2 Design and results of test

表3 方差分析結(jié)果Tab 3 Results of variance analysis

沒食子酸為余甘子主要活性成分之一，其含量為2015年版《中國藥典》（一部）中余甘子藥材的評(píng)價(jià)指標(biāo)之一[9]，故本試驗(yàn)以沒食子酸含量作為質(zhì)量控制指標(biāo)優(yōu)選提取工藝的依據(jù)合理。

由正交試驗(yàn)所得提取工藝經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)表明，該方法穩(wěn)定、重現(xiàn)性較好，故該工藝可為余甘子配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化生產(chǎn)工藝提供依據(jù)。

目前關(guān)于余甘子提取工藝的研究多為針對(duì)多糖類、多酚類等某一類成分的提取工藝的研究[11-13]，暫無關(guān)于余甘子配方顆粒提取工藝的研究報(bào)道。中藥配方顆粒是由單味中藥飲片經(jīng)水提、濃縮、干燥、制粒而成的免煎煮、直接沖服的純中藥制劑，其是對(duì)傳統(tǒng)中藥飲片的補(bǔ)充，并可通過中藥現(xiàn)代化實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)[14]。余甘子配方顆粒提取液中含有多糖、沒食子酸、多酚類等多種成分，本次工藝優(yōu)選研究主要以出膏率和特征成分沒食子酸含量為指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化，暫時(shí)未設(shè)計(jì)能闡明提取條件變化對(duì)余甘子提取液其他成分影響的相關(guān)試驗(yàn)。故本課題組下一步將繼續(xù)開展針對(duì)余甘子配方顆粒與標(biāo)準(zhǔn)煎劑相應(yīng)指標(biāo)的對(duì)比研究。

[1] 徐國鈞，何宏賢，徐珞珊，等.中國藥材學(xué)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1996：1105-1106.

[2] 楊順楷，楊亞力，楊維力.余甘子資源植物的研究與開發(fā)進(jìn)展[J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2008，14（6）：846-854.

[3] 鄧才彬，謝慶娟，曲中堂.余甘子化學(xué)成分研究[J].中國藥房，2009，20（27）：2120-2121.

[4] 茹克婭，胡加阿不都拉，帕提古力，等.余甘子的維吾爾醫(yī)應(yīng)用及研究進(jìn)展[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2011，12（12）：61-63.

[5] 王輝.余甘子的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代中藥，2011，13（11）：52-56.

[6] 許嶸，郭幼紅，黃清茹.余甘子研究概況[J].海峽藥學(xué)，2012，24（1）：45-46.

[7] 劉延澤，李海霞，許利嘉，等.藥食兼用余甘子的現(xiàn)代研究概述及應(yīng)用前景分析[J].中草藥，2013，44（12）：1700-1706.

[8] 李兵，黃貴慶，盧汝梅，等.余甘子化學(xué)成分研究[J].中藥材，2015，38（2）：290-293.

[9] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：179.

[10] 李芹.淺析中藥配方顆粒的優(yōu)越性[J].醫(yī)學(xué)信息，2015，28（38）：282.

[11] 趙謀明，劉曉麗，崔春，等.余甘子多酚響應(yīng)面法優(yōu)化提取及其抗氧化活性研究[J].食品工業(yè)科技，2007，28（6）：117-119.

[12] 張?jiān)评ぃ李?，孟憲生，?藏藥余甘子抗腫瘤活性成分的提取工藝優(yōu)化和含量測(cè)定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2012，43（11）：905-908.

[13] 曹維，朱建梅，文潔，等.余甘子有效成分提取工藝研究[J].中藥材，2013，36（5）：812-815.

[14] 馬良珠.中藥配方顆粒的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥指南，2013，11（18）：81-82.

Study on Optimization of the Extraction Technology for Phyllanthus emblica Formula Granule by Orthogonal Test

WEI Caicai，LI Xueli，HAO Lei，F(xiàn)ENG Yukang，ZHANG Fenglin，HUO Baojun，LI Junshan，CHEN Zhong（Shineway Pharmaceutical Group Ltd.，Shijiazhuang 051430，China）

OBJECTIVE：To optimize the extraction technology for Phyllanthus emblica formula granules.METHODS：Using the comprehensive evaluation result of the content of gallic acid and paste rate as index，water amount，extraction times，extracting time as factors，orthogonal test was designed to optimize the extraction conditions of P.emblica formula granules.Validation test was conducted.RESULTS：The optimal extraction technology of P.emblica formula granule was as follows as 12-fold water，extracting for 2 times，1 hour each time.The validation results showed that the average paste rate was 30.44%（RSD＝2.07%，n＝3），and the average content of gallic acid was 8.12%（RSD＝0.86%，n＝3）.CONCLUSIONS：The optimized extraction technology is stable and can provide the basis for standardized production technology of P.emblica formula granule.

Phyllanthus emblica；Formula granules；Orthogonal test；Extraction process

R283；R284.2

A

1001-0408（2017）01-0061-03

2016-04-15

2016-06-08）

（編輯：劉 萍）

國家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究專項(xiàng)課題（No.國中醫(yī)藥科2013ZX07）；河北省科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.14272504D）

＊助理工程師。研究方向：藥物工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。電話：0311-88030066。E-mail：13831119281@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.01.16