李敏 馬玉峰/金宇保靈生物藥品有限公司

楊振/揚州優(yōu)邦生物藥品有限公司

Ⅰ型禽腺病毒在我國雞群中的流行情況和防控措施

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腺病毒是全世界家禽和野禽常見的傳染病原。許多腺病毒可在健康禽體內(nèi)復(fù)制，癥狀非常輕微或不表現(xiàn)感染癥狀，但有一些因素，特別是并發(fā)感染時，腺病毒可成為條件性病原。根據(jù)血清學(xué)關(guān)系，禽腺病毒可以分為12個血清型 (FAdV 1-12)。而國際病毒分類委員會（ICTV）將禽腺病毒的12個血清型分為5個亞群(FAdV A-E)。I群禽腺病毒在中國雞群中發(fā)病率非常之高，且呈逐年上升趨勢，且在水禽中也有發(fā)病的報道。主要造成雞群的包涵體肝炎和心包積液兩種臨床類型，給養(yǎng)雞企業(yè)造成較大的經(jīng)濟損失。筆者通過對流行地區(qū)腺病毒的跟蹤監(jiān)測和對病毒的分離鑒定，以了解I型禽腺病毒在我國的流行特點和現(xiàn)狀，同時對該病的防控提供一定的措施。

一、I群禽腺病毒的流行特點

根據(jù)筆者統(tǒng)計，目前在全國多個地區(qū)均有該病毒的發(fā)生（表1），該病可感染1～6周齡任何品種雞。發(fā)病日病程短的4～8 d逐漸恢復(fù)，一般7～10 d，也可以持續(xù)2～3周甚至更長的時間。發(fā)病雞群死亡高峰多持續(xù)期4～8 d，病程8～15 d，死亡率10%～60%不等。禽腺病毒可引起包括包涵體肝炎 (IBH) 、安卡拉病/肝炎和心包積液綜合征 (HHS) 、以及肌胃糜爛或潰瘍(GEU)。目前我們檢測發(fā)現(xiàn)兩種常見癥狀：包涵體肝炎(IBH)和安卡拉病/肝炎和心包積液綜合征 (HHS)。

雞心包積液肝炎綜合征病可以感染2～7周齡雞（白羽、黃羽、蛋雞、817肉雞）。蛋雞從30日齡起至產(chǎn)蛋高峰期均可發(fā)病。該病2014開始在我國多地區(qū)呈普發(fā)態(tài)勢，已經(jīng)成為一種嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的傳染病。致病病原已經(jīng)確定為Ⅰ群4血清型腺病毒（基因型C）。病雞出現(xiàn)精神沉郁，食欲減退或廢絕，翅膀下垂，羽毛蓬亂，曲腿蹲立、伏臥不起，雞冠和肉髯發(fā)白癥狀，臨死前鳴叫、撲騰、掙扎，并出現(xiàn)角弓反張等神經(jīng)癥狀。解剖可見肝臟出血、心包積液，腎臟腫大壞死，肺充血水腫，胸腺充血腫大等癥狀（圖1）。據(jù)報道，病毒在健康雞群和發(fā)病雞群普遍存在，條件致病。多與其它病毒混合感染，如CAV，IBDV等。

包涵體肝炎發(fā)病率不高，目前在白羽肉雞零星發(fā)生。7 d～20W雞均可發(fā)生， 3～7W多發(fā)，主要發(fā)生于雛雞，病雛生長受阻、羽毛蓬亂、蹲伏。多于48 h內(nèi)死亡或逐漸康復(fù)。雞群發(fā)病后會突現(xiàn)3～5 d的死亡高峰。死亡率低，可能至10%，個別可達(dá)30%。有時病程也可持續(xù)2～3w。解剖可見肝腫大，邊緣鈍厚，表面有大小不等出血點、條、斑，黃白色點狀、斑狀壞死灶，色澤變淡。腎臟腫大，胸腺充血，也可見少量心包積液（圖2）。

表1 不同地區(qū)發(fā)生禽腺病毒類型統(tǒng)計

圖1 心包積水肝炎綜合征病雞解剖癥狀

禽腺病毒可以垂直傳播和水平傳播。腺病毒通過孵化的蛋垂直傳播，雛雞1日齡就可能分離到病毒，但正常情況下3周齡后開始排毒，4～6周齡排毒高峰。蛋雞轉(zhuǎn)群時排毒量最大在5～9周齡，但在14周后仍可排泄70%，在一只雞上經(jīng)常可分離到2～3個血清型的病毒。當(dāng)腺病毒常在時，約在產(chǎn)蛋高峰前后有兩次排毒期，大概由于高峰產(chǎn)蛋作為一種應(yīng)激或高水平激素引起病毒活化，這可通過種蛋最大限度的傳給下一代。

病毒還可在糞便、氣管、鼻粘膜以及腎臟中存在，因此病毒可通過各種排泄物水平傳播傳播，其中糞便中病毒的滴度最高。主要是通過接觸帶毒的糞便傳播本病，水平傳播速度比較緩慢。

圖2 包涵體肝炎病雞解剖癥狀

二、實驗室診斷

（一）病毒分離培養(yǎng)

分別取心包積液肝炎綜合征和包涵體肝炎癥狀的病死雞的肝臟研磨，反復(fù)冷凍3次，高速離心，取上清液，通過絨毛尿囊膜途徑接種7日齡SPF雞胚，37℃培養(yǎng)觀察5～8 d，雞胚死亡，剖檢可見雞胚體發(fā)生明顯病變（圖3）。

圖3 病毒分離接種雞胚病變圖

（二）分子生物學(xué)檢測

1.目的基因的擴增。

從收集的樣品中，采用試劑盒提取DNA，使用設(shè)計的針對禽腺病毒Hexon基因的特異性引物，進(jìn)行PCR檢測，1%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果顯示樣品中均可以擴增出830bp左右的I型禽腺病毒Hexon基因目的性基因片段(圖4)。

圖4 禽腺病毒核酸電泳結(jié)果

2.目的基因測序分析。

對待檢樣品的PCR產(chǎn)物送金斯瑞生物技術(shù)有限公司進(jìn)行基因測序分析，進(jìn)化樹顯示，樣本中分離的禽腺病毒屬于兩個基因型(圖5)。

圖5 各分離株Hexon基因序列與參考基因序列進(jìn)化樹分析

三、防治

加強雞場生物安全的控制是防治該病關(guān)鍵。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，發(fā)病雞群多數(shù)發(fā)生在養(yǎng)殖密度大的地區(qū)和飼養(yǎng)時間長的養(yǎng)殖場，這些雞場無有效的生物安全措施，環(huán)境污染嚴(yán)重。雞群應(yīng)做好免疫抑制性疾病的防控，如法氏囊病、傳染性貧血、網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥、霉菌毒素等誘因均可與腺病毒發(fā)生協(xié)同感染。建議從腺病毒檢測陰性的種雞場進(jìn)雛雞。在活疫苗的選擇方面要慎重，避免使用污染其它病原的活疫苗，選用活疫苗一定要確保外源病毒包括禽腺病毒陰性。發(fā)病雞群無特效藥物，可增加營養(yǎng)以增強體質(zhì)，添加適量抗生素防繼發(fā)感染。死亡率高的雞群可以注射特異性卵黃抗體或血清。

因本病目前無明確的致病機理，建議使用疫苗進(jìn)行防控，使用發(fā)病地區(qū)分離的樣本做成滅活疫苗給健康雞群進(jìn)行防控能達(dá)到90%以上保護(hù)。在肉雞上，7～9日齡和35日齡左右進(jìn)行滅活疫苗的接種，蛋雞或者肉種雞在開產(chǎn)前進(jìn)行疫苗接種，可很好控制本病的發(fā)生。

四、分析和討論

禽腺病毒發(fā)病原因較為復(fù)雜。如1987年在巴基斯坦的肉雞發(fā)生心包積液綜合征的原因是活疫苗污染。很多學(xué)者證實腺病毒在健康雞群中的感染和分離較為普遍，但與其它疾病混合感染時才會導(dǎo)致雞群發(fā)病，如感染了法氏囊病、傳染性貧血或飼喂了霉變飼料。雞群感染禽腺病毒目前還沒有有力證據(jù)證明該病的發(fā)病規(guī)律和原因，還需要在流行病學(xué)和病原檢測方面進(jìn)一步努力。應(yīng)對發(fā)病雞場和該病流行地區(qū)使用的活疫苗進(jìn)行調(diào)查和檢測外源病毒，來確定是否與免疫活疫苗有關(guān)。

我國于1976年首先在臺灣省發(fā)生該病，隨后在遼寧省、山東省、內(nèi)蒙古省、河南省、江蘇省、安徽省等地相繼發(fā)現(xiàn)禽腺病毒的流行，2014—2015年該病在國內(nèi)呈普發(fā)態(tài)勢，已經(jīng)成為一種嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的傳染病，逐漸被人們重視。尹燕博教授實驗室對2007—2015年我國部分地區(qū)疑似Ⅰ群腺病毒引起的雞包涵體肝炎的病料進(jìn)行較為系統(tǒng)的病原診斷、PCR檢測、病理組織學(xué)檢查，診斷分離到60株雞包涵體肝炎病毒，多為Ⅰ群4亞型腺病毒，即引起禽心包積液綜合征的病毒。

我們在實驗室對收集的樣本進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，在目前流行的禽腺病毒中存在兩種基因型的病毒，在分離株中從山東樣本中分離到兩種基因型的禽腺病毒，引起的病理變化也不一致，其中基因C型的病毒主要引起禽的心包積液綜合征；而基因型為E的病原主要引起禽的包涵體肝炎。這說明在我國禽場中存在的禽腺病毒成多樣性，給我們的防治帶來一定的挑戰(zhàn)，足夠引起我們的重視。在防控方面因本病目前無明確的致病機理，使用滅活疫苗進(jìn)行防控，能給健康雞群進(jìn)行防控能達(dá)到90%以上保護(hù)。同時再給雞群使用活苗時要注意活疫苗外源毒的檢測，避免活疫苗攜帶病原引起不必要的損失。

（略）