趙憲林，曹少杰，顏偉俊，侯青娥

（渭南職業(yè)技術學院農學院，陜西渭南714000）

維生素E對陜西地區(qū)夏季新西蘭兔精液品質的影響

趙憲林，曹少杰，顏偉俊，侯青娥

（渭南職業(yè)技術學院農學院，陜西渭南714000）

以新西蘭兔為試驗對象，在其日糧中添加0，5，10，15，20 mg/d維生素E，研究維生素E對西北地區(qū)夏季新西蘭兔子精液品質的影響。結果表明，在兔子日糧中添加10～15 mg/d微生素E可以有效提高精子活力、活率和精子頂體完整率（P＜0.05），顯著提高A，B級精子百分率（P＜0.05）；以及顯著提高精子的前向性及精子曲線運動速度、直線運動速度（P＜0.05）。說明在兔子日糧中添加維生素E為10～15 mg/d時，可以有效提高新西蘭兔精液品質。

新西蘭兔；維生素E；精液

新西蘭兔是近代最著名的優(yōu)秀品種之一，原產于美國，生長快，產肉能力高且肉質松嫩可口，泌乳性能好，母性強，仔兔成活率高，具有飼養(yǎng)周期短、出欄快、產肉能力高[1]等特點，自引入我國以來一直受到廣大養(yǎng)殖戶的歡迎。在夏季，由于天氣炎熱等相關原因，導致公兔精液品質低下，母兔受精率低。所以，研究雄性新西蘭兔精液品質，提高其精液質量顯得尤為重要。在此前的報道中，有很多學者通過在日糧中添加各種物質來研究對兔子精液品質的影響[2-3]。但是不同地區(qū)研究結果相同，對實際生產缺乏相關指導意義。

VE是存在于動物機體中的重要抗氧化劑，可以通過食物獲得，存在于細胞膜的特定部位,對精子內線粒體、網狀組織或漿膜的磷脂有著特殊的親和性，能夠降低動物應激損傷、提高動物精液品質，它能夠通過抑制過氧化簇離子（ROS）的形成，從而達到預防或阻止誘發(fā)脂質過氧化反應。而存在于精漿中的ROS，主要來源于芳香族氨基酸所催化死亡精子發(fā)生的反應[2-4]。趙憲林等[5]研究認為，ROS對精子的品質有極大的損害作用。BAILEY等[6]進行人類精液研究時發(fā)現(xiàn)，ROS可以顯著降低精子的活性，同時能夠引起男性的不育。據(jù)報道，在精液中本身含有多種抗氧化物酶，功能主要是消除精液中的ROS，但是這些自然的抗氧化物酶活性相對較弱，而精子對氧化應激較為敏感[7-9]。所以，在精液生產中，通常通過添加抗氧化劑來減少或消除ROS對精子的不良作用。趙憲林等[5]在對秦川牛精液冷凍保存進行研究時發(fā)現(xiàn)，VE作為冷凍精液的保護液對凍后精子品質起到了積極的作用。YOUSEF等[3]給兔子飼喂VE，結果發(fā)現(xiàn)了能夠提高兔子精子的濃度和射精量，降低精子死亡率和畸形率。

據(jù)報道，VE是一種非常優(yōu)秀的抗氧化劑，它能夠保護細胞和組織免受自由基過氧化物的損害。VE能夠減少應激同時降低應激對機體造成的影響，結果達到提高機體免疫力和生產性能。在對人的研究上，VE的抗氧化物活性通過保護細胞對提高機體的免疫力有著明顯的作用，并且能增加淋巴、巨噬細胞、漿細胞在氧化應激方面的功能和提高細胞的增殖效果[10-11]。但維生素E對新西蘭兔精液品質的影響至今鮮有報道。

本試驗就日糧中添加維生素E對陜西地區(qū)夏季新西蘭兔精液品質的影響進行了研究，以明確維生素的最佳添加量，為其在實際生產中的應用提供一定理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗儀器與試劑

彩色精子質量檢測儀，電子分析天平，電熱恒溫培養(yǎng)箱，維生素E粉劑（sigma），載玻片，蓋玻片。福爾馬林磷酸鹽固定液；姬姆薩染色液。

1.2 精液采集及處理

選擇13月齡，身體健康、體質量相當?shù)姆敝承阅芰己玫?0只新西蘭兔，采集方法參考楊博[1]的研究進行。利用人工采精法在每周一、三10：00進行采精。取精液100 μL加入專用精子計數(shù)板中，將此板放在37.5℃恒溫顯微鏡載物臺上，用WLJY-9000彩色精子質量檢測系統(tǒng)進行檢測，鮮精經過常規(guī)檢測分析，活力大于0.60，密度適中即可用于本次試驗[12]。

1.3 新西蘭兔精子常規(guī)指標檢測

利用精子質量檢測系統(tǒng)（WLJY—9000）把采集的精液檢測3次，保存結果?，F(xiàn)把系統(tǒng)分析得出的各種運動相關參數(shù)羅列如下[13]。

精子活力（%）是指精子的運動能力，按WHO 1994年標準分為“A，B，C和D共4級”。

A級精子百分率是指快速直線前向運動的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率；B級精子百分率是指慢速或無定向前向運動的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率；C級精子百分率是指非前向運動的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率；D級精子百分率是指不運動的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率；直線性（%）是指精子運動曲線的直線分離度；擺動性（%）是指精子頭部沿其實際運動軌跡的空間平均路徑擺動的尺度；前向性（%）是指精子運動平均路徑的直線分離度；曲線運動速度（μm/s）是指精子頭部沿其實際行走曲線的運動速度；直線運動速度（μm/s）是指精子頭部直線移動距離的速度；平均路徑速度（μm/s）是指精子頭部沿其空間平均軌跡的運動速度；平均移動角度（°）是指精子頭部沿其運動軌跡瞬間轉折角度的絕對值之和對時間的平均值；側擺幅度（μm）是指精子頭部實際運動軌跡對平均路徑的側擺幅度，用ALH表示；鞭打頻率（Hz）也稱擺動頻率，即精子頭部跨越其平均路徑的頻率；精子活率是指活精子占檢測精子的百分率；精子頂體完整率是指頂體完整精子數(shù)占檢測精子的百分數(shù)。

1.4 精子頂體完整率的檢測

檢測方法參照趙憲林等[12]的相關研究進行。首先取一滴精液滴到載玻片的一端，用另一張邊緣光滑的載玻片呈35°角自右面接觸液滴，拉向另一端，制成抹片。自然風干5～10 min后，用福爾馬林磷酸鹽固定液固定15 min，水洗干燥后，用姬姆薩染色90 min，自來水沖洗，干燥，顯微鏡下觀察300個精子，統(tǒng)計頂體完整的精子數(shù)。

1.5 統(tǒng)計分析

本試驗所有數(shù)據(jù)均用平均數(shù)±標準差表示；采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1 維生素E對新西蘭兔精子活力、活率、頂體完整率的影響

采取精液后迅速用偉力精液分析系統(tǒng)進行檢測。從表1可以看出，日糧中VE的添加量為10～20 mg/d時，精子活力顯著高于對照組，且差異顯著（P＜0.05）；日糧中VE的添加量為10～15 mg/d時，精子活率顯著提高，與對照組相比差異顯著（P＜0.05），但是添加量為20 mg/d時，活率有下降趨勢；飼喂10～15 mg/d的試驗組頂體完整率與對照組相比，差異顯著（P＜0.05），添加量為20 mg/d時，頂體完整率有下降趨勢。

表1 維生素E對新西蘭兔精子活力、活率、頂體完整率的影響

2.2 維生素E對新西蘭兔精子品質的影響

由表2可知，當日糧中添加VE為5～20 mg/d時，所采集的精子A級精子百分率顯著高于對照組，且與對照組間差異達顯著水平（P＜0.05）；當維生素E添加量為5～15 mg/d時，B級精子百分率顯著高于對照組，且與對照差異顯著（P＜0.05）；當維生素E添加量為5～15 mg/d時，C級精子百分率與對照間差異顯著（P＜0.05）；當維生素E添加量為10～20 mg/d時，D級精子百分率顯著低于對照組（P＜0.05）。

表2 維生素E對新西蘭兔精子品質的影響

2.3 維生素E對新西蘭兔精子運動性能的影響

由表3可知，維生素E添加量為10 mg/d時，直線性與對照相比差異顯著（P＜0.05）；前向性方面，添加量為20 mg/d時，與對照組相比差異顯著（P＜0.05）；曲線運動速度方面，維生素E添加量為20 mg/d時，與對照組相比差異顯著（P＜0.05）；直線運動速度方面，飼喂15 mg/d維生素E時，與對照組相比，差異顯著（P＜0.05）；平均移動角度方面，飼喂5～10 mg/d維生素E時，與對照組相比，差異顯著（P＜0.05）；鞭打頻率方面，飼喂10 mg/d維生素E時，與對照組相比，差異顯著（P＜0.05）；在擺動性、平均路徑速度、測擺幅度方面，對照組與各個試驗組之間無顯著差異（P＞0.05）。

表3 維生素E對新西蘭兔精子運動性能的影響

3 討論

一般情況下，兔子在相對高的環(huán)境溫度下更容易遭受氧化應激。較高的溫度加上較大濕度更加容易導致應激，引起兔子精液品質降低，頂體完整率下降，受精率降低。在熱應激條件下，兔子呼吸作用增加，為了維持體溫最佳狀態(tài)，就需要增加他們的代謝，從而增加能量損耗。假如增加的能量需要不是來自于飼料，那就需要動員儲存于機體的脂肪進行轉化，在脂肪轉化過程中就會形成脂質過氧化物，一部分可以被體內的抗氧化劑消除掉，則一部分對身體會造成危害。而在動物生殖系統(tǒng)中也同樣存在這些問題。熱應激條件下，精液中脂質過氧化物含量較高，會直接降低精子活力及受精率[4]。

有研究表明，精子活力、活性及頂體完整率是反映精子品質高低的主要指標[3，12]。本試驗結果表明，在新西蘭兔日糧中添加VE，可以有效改善兔子精子品質。其中，在日糧中添加VE為10～15 mg/d時，精子活力顯著高于對照組（P＜0.05）。VE添加量為15 mg/d時，精子活率、頂體完整率與對照組相比顯著提高（P＜0.05）。精子活力、活率、頂體完整率是衡量精子品質高低的指標，但是影響頂體完整率高低的主要因素不僅與動物個體本身有關，同樣與精子排出體外后所在的外界環(huán)境條件有關[13]。IDREES等[7]研究表明，在新西蘭兔日糧中添加VE可以有效提高精子活力、活率及頂體完整率，與本研究結果一致。在動物體內，本身存在一定的抗氧化物酶，會起到一定的抗氧化作用，但是促氧化和抗氧化之間失衡會導致活性陽離子（ROS）的產生及累積，也許會引起生物分子如脂肪、蛋白及核酸的氧化修飾，進而引起精子的氧化損傷，導致精子活力降低，活性下降。同時導致雄性動物的不育。原因可能是由于VE作為一種抗氧化劑，可以消除精液內自身產生的氧化離子，降低精液中ROS的含量，從而提高動物精子活力、活性及頂體完整率[14]。

精子的活力與精子的受精能力密切相關，其是評定精液品質的重要指標，又是評定精子是否具備輸精資格的重要因素[9，12，15]。在人類研究上，A級、B級精子百分率在一定程度上決定精子是否能夠有效地穿過女性生殖道到達受精部位，當精子A級百分率下降時會干擾精子受精過程，使生育指數(shù)下降[16]。MUSTAFA等[2]研究發(fā)現(xiàn)，VE是機體中最重要的抗氧化劑，能通過抑制自由基的形成，阻止誘發(fā)膜脂質發(fā)生過氧化，提高精子頂體完整率和降低精子畸形率。YOUSEF等[3]研究證明，補充飼喂VE能夠有效減少新西蘭兔精液中活性氧（ROS）的產物，有效改善精液品質。本研究表明，在日糧中添加VE為10 mg/d，可以有效提高精液中A級、B級精子百分率，同時提高精子運動能力、直線性、前向性、直線運動速度，與趙憲林等[12]在秦川牛精液上的相關研究結果一致；但是對于精子的擺動性、曲線運動速度、平均移動角度等相關指標沒有顯著影響，與趙憲林等[12]研究結果存在差異，可能與物種的差異性、VE的生產廠家及飼喂?jié)舛鹊扔嘘P。

本研究結果表明，在新西蘭兔日糧中添加VE為5～10 mg/d時，可以有效改善精子品質，提高兔子精液品質。

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聲明

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《山西農業(yè)科學》編輯部

Effects of VEon the New Zealand Rabbits Sperm Quality in the Summer of Shaaxi Area

ZHAOXianlin，CAOShaojie，YANWeijun，HOUQing'e
（College ofAgronomy，Weinan Vocational&Technical College，Weinan 714000，China）

The present experiment was carried out to evaluate the effects of vitamin E（0，5，10，15，20 mg/d）supplementation on the New Zealand rabbits sperm quality.The results showed that it could be concluded that the VE（10-15 mg/d）had better protect in sperm quality and sperm acrosome intact rate,could improve the percentage of the grade A and grade B significantly,could significant improve the sperm forward directional characteristics，average semen curve movement velocity was markedly increased，straight line velocity significantly.The results illustrated that added the vitamin E in the the rabbit diet for 10-15 mg/d could improve the semen qualityofNewZealand rabbits effectively.

NewZealand rabbits;vitamin E;sperm

S829.1

：A

：1002-2481（2017）01-0111-04

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.01.29

2016-06-29

陜西省教育廳專項科研計劃項目（16JK2053）；渭南職業(yè)技術學院院級課題（WZYY201313）

趙憲林（1984-），男，河南濮陽人，講師，博士，主要從事動物遺傳育種與繁殖教學及研究工作。