趙淑燦 鄭定容

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PPTG、Survivin和bFGF mRNA在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其意義

趙淑燦1鄭定容2

目的 檢測非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者組織中垂體腫瘤轉(zhuǎn)化mRNA (PPTG mRNA)、生存素mRNA (Survivin mRNA)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子mRNA(bFGF mRNA)的表達(dá)水平，探討其在NSCLC中的診斷價(jià)值。 方法 隨機(jī)選擇NSCLC患者原發(fā)癌病灶組織86例為NSCLC組，其中肺鱗癌35例、肺腺癌38例、其他型肺癌13例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者40例；腫瘤高分化36例、中分化24例、低分化26例；TNM Ⅰ期22例、Ⅱ期24例、Ⅲ期20例、Ⅳ期 20例，同時(shí)取癌旁正常肺組織86例為癌旁組，肺部為良性疾病肺組織80例為對(duì)照組，采用實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測四組患者組織的PPTG、Survivin和bFGF mRNA的表達(dá)。 結(jié)果 PPTG、Survivin和bFGF mRNA在NSCLC組、癌旁組的組織表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.05)，在NSCLC組中的表達(dá)高于癌旁組(P<0.05)；PPTG、Survivin和bFGF mRNA在腺癌、鱗癌組織表達(dá)均明顯高于其他組，在腺癌組織中的表達(dá)高于鱗癌(P<0.05)，其與肺癌組織分級(jí)、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈密切正相關(guān)性(P<0.05)，而與患者的性別與年齡無關(guān)(P>0.05)。 結(jié)論 PPTG、Survivin和bFGF mRNA基因在NSCLC中呈高表達(dá)，其表達(dá)水平有助于臨床分期、組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的判斷。

非小細(xì)胞肺癌；實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)；垂體腫瘤轉(zhuǎn)化；生存素；堿性成纖維細(xì)胞生長因子

堿性成纖維細(xì)胞生長因子(Basic fibroblast growth factor, bFGF) mRNA是作用廣泛的有絲分裂原，與腫瘤的分期、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，多種腫瘤組織過度表達(dá)bFGF[1]；垂體腫瘤轉(zhuǎn)化(Pituitary Tumor Transforming,PPTG) mRNA是一種強(qiáng)有力的腫瘤轉(zhuǎn)化基因，與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)，在多種腫瘤中呈高表達(dá)[2]；生存素(Survivin) mRNA是凋亡抑制蛋白家族新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)成員，具有抑制細(xì)胞凋亡又有促進(jìn)細(xì)胞增殖的雙重功能，在多種惡性腫瘤組織中survivin mRNA呈異常高表達(dá)[3]。非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)是嚴(yán)重危害人類健康的惡性腫瘤之一，其死亡率居各惡性腫瘤之首[4]，PPTG、Survivin和bFGF的高表達(dá)能促進(jìn)細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化，在腫瘤形成過程中起重要作用[5]，本文實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)(Real time polymerase chain reaction,RT-PCR)研究原發(fā)性NSCLC患者原發(fā)癌病灶組織與PPTG、Survivin和bFGF mRNA的基因表達(dá)情況，并分析其與NSCLC生物學(xué)行為的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

資料與方法

一、一般臨床材料

隨機(jī)選擇2013年1月-2015年12月本院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科診治的NSCLC 86例為NSCLC組，所有病人術(shù)前均未行化療和放療等其他治療，病理診斷明確，其中男性50例、女性36例；年齡30歲-78歲，平均(55.4±8.7)歲，≥60歲患者56例，<60歲患者30例；經(jīng)WHO肺癌分類標(biāo)準(zhǔn)分類[6]：肺鱗癌35例、肺腺癌38例、其他型肺癌13例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者40例；高分化36例、中分化24、低分化26例；按TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[7]：TNM Ⅰ期22例、Ⅱ期24例、Ⅲ期20例、Ⅳ期 20例，同時(shí)取癌旁正常肺組織86例為癌旁組，肺部為良性疾病肺組織80例為對(duì)照組，其中男性48例、女性32例，年齡30歲-78歲，平均(56.7±8.8)歲，≥60歲患者50例，<60歲患者30例，包括肺心病10例、肺炎18例、肺氣腫22例、結(jié)節(jié)病8例、慢性支氣管炎10例、支氣管擴(kuò)張12例。所有患者均本研究所有患者都經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者知情并簽署知情同意書，以上各組份研究對(duì)象年齡和性別構(gòu)成比等無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，均都具有可比性。

二、試劑及儀器

Taq酶、dNTP和 2×緩沖液購自上海翊圣生物科技有限公司；QIAamp DNA minikit DNA提取試劑盒購自上海浩然生物技術(shù)有限公司；總RNA提取試劑盒(TRIzol法) 購自北京百泰克生物技術(shù)有限公司； RT-PCR儀器采用美國MJR Option(2) 實(shí)時(shí)熒光FQ-PCR分儀，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作及判定結(jié)果，結(jié)果表達(dá)量采用2-△△CT表示[8]。

三、PCR引物序列

參照Tsuyoshi等方法[9]設(shè)計(jì)正反及探針義鏈，內(nèi)參基因?yàn)棣?actin均由FAM標(biāo)記，由廣州中山大學(xué)達(dá)安基因有限公司合成，(見表1)，與設(shè)計(jì)的目的片段大小一致結(jié)果(見圖1)。

表1 引物與探針序列

注： 1為PPTG陽性樣本， 2為bFGF陽性樣本， 3為Survivin陽性樣本，N為陰性對(duì)照， P1為PPTG陽性對(duì)照，P2為bFGF陽性對(duì)照， P3為Survivin陽性對(duì)照，M為 100 bp DNA。

圖1 PPTG、Survivin和bFGF mRNA的基因PCR結(jié)果

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用Spss18 for Windows軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，兩組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，多組計(jì)量資料比較采用F檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、三組患者的組織PPTG、Survivin和bFGF mRNA表達(dá)比較 PPTG、Survivin和bFGF mRNA在NSCLC組、癌旁組的組織表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.05)，在NSCLC組中的表達(dá)高于癌旁組，P<0.05，(見表2)。

表2 三組患者的組織PPTG、Survivin和bFGF mRNA表達(dá)比較

二、不同類型癌組織PPTG、Survivin和bFGF mRNA表達(dá)比較

PPTG、Survivin和bFGF mRNA在腺癌與鱗癌均明顯高于其他組，在腺癌組組中的表達(dá)高于鱗癌組，P<0.05,(見表3)；PPTG、Survivin和bFGF mRNA在肺癌TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈密切正相關(guān)性，P<0.05,(見表4，5)。

表3 PPTG、Survivin和bFGF mRNA在不同類型癌表達(dá)比較

表4 PPTG、Survivin和bFGF mRNA在TNM分期表達(dá)比較

表5 PPTG、Survivin和bFGF mRNA在轉(zhuǎn)移情況表達(dá)比較

三、NSCLC患者的性別與年齡對(duì)PPTG、Survivin和bFGF mRNA的表達(dá)比較

在NSCLC中PPTG、Survivin和bFGF mRNA的表達(dá)與患者的性別與年齡無關(guān)，P>0.05,(見表6)。

表6 性別與年齡對(duì)PPTG、Survivin和bFGF mRNA的表達(dá)比較

討 論

近年來，肺癌的發(fā)病率及死亡率在全球呈上升趨勢，其發(fā)病率和死亡率是世界上最高的惡性腫瘤，現(xiàn)已經(jīng)嚴(yán)重威脅人類的身心健康，其中NSCLC在肺癌中約占80%-85%[10]。正常細(xì)胞的抑癌基因和原癌基因的突變或(和)異常表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞的增殖、分化和凋亡過程失控,機(jī)體失去對(duì)細(xì)胞生長的正常調(diào)控,形成腫瘤。大量的臨床研究表明腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞凋亡的異常有關(guān)[11]，本研究隨機(jī)選擇本院86例NSCLC患者作為研究對(duì)象，研究PPTG、Survivin和bFGF mRNA在NSCLC中的表達(dá)和臨床意義。

PTTG最初是由Pei等在1997年由垂體腫瘤中發(fā)現(xiàn)具有強(qiáng)致癌作用的癌基因[12]，在人體的多種正常組織(如正常成人大腦、睪丸、胚胎肝和脾臟等)存在無表達(dá)或者低表達(dá)，PTTG在多種腫瘤細(xì)胞(如早幼粒白血病細(xì)胞、腺癌細(xì)胞和垂體癌細(xì)胞)等發(fā)現(xiàn)高表達(dá)[13]。Survivin是哺乳動(dòng)物類細(xì)胞凋亡抑制蛋白的重要成員之一，定位于不穩(wěn)定性較高的染色體17q25上,具有促使細(xì)胞轉(zhuǎn)化，表達(dá)于細(xì)胞周期的G2/M期，調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂和抑制細(xì)胞凋亡的作用，廣泛表達(dá)于各種類型腫瘤組織之中，Survivin的表達(dá)增高隨著腫瘤的生長浸潤而表達(dá)逐漸增強(qiáng),Survivin與多種腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)[14]。bFGF是由成纖維細(xì)胞分泌的生長因子，是一種強(qiáng)有力的光譜有絲分裂劑，具有促進(jìn)組織損傷部位內(nèi)皮細(xì)胞分化和血管新生的能力，在在多種惡性腫瘤患者血清中明顯增高[15]。本研究結(jié)果顯示，肺癌組織中的PPTG、Survivin和bFGF mRNA表達(dá)明顯高于正常癌旁組織，鱗癌患者PPTG、Survivin和bFGF mRNA表達(dá)明顯高于腺癌患者，提示PPTG、Survivin和bFGF mRNA水平隨疾病進(jìn)展而升高，并且與其表達(dá)高低與患者的TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈密切相關(guān)性，由此可見，PPTG、Survivin和bFGF mRNA存在于正常人體內(nèi)，與腫瘤血管密度和惡性生物學(xué)行為明顯相關(guān)，其過高表達(dá)則可能提示腫瘤發(fā)生或預(yù)示腫瘤的不良轉(zhuǎn)歸，其機(jī)制可能是PPTG高表達(dá)直接引起了肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致肺癌的發(fā)生；bFGF可能通過自分泌和(或)旁分泌作用于肺癌細(xì)胞，刺激肺部組織血管的生成，為肺癌提供營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)肺癌的生長、發(fā)展；PPTG和bFGF可能通過促進(jìn)Survivin的表達(dá)來抑制肺癌細(xì)胞凋亡，有絲分裂促進(jìn)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的異常增殖,肺癌細(xì)胞的無限增殖與凋亡受阻，最終導(dǎo)致肺癌的發(fā)生；PPTG、Survivin和bFGF mRNA的表達(dá)呈明顯的正相關(guān)，提示PPTG、Survivin和bFGF mRNA的表達(dá)貫穿于肺癌變的全過程，三者在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中可能存在協(xié)同作用。PPTG、Survivin和bFGF mRNA能成為反映肺癌生物學(xué)行為及侵襲性的重要指標(biāo)，通過檢PPTG、Survivin和bFGF mRNA表達(dá)可以對(duì)NSCLC預(yù)后進(jìn)行一定的判斷，以更好地指導(dǎo)臨床治療。

綜上所述，PPTG、Survivin和bFGF mRNA的基因表達(dá)在NSCLC中高表達(dá)，其表達(dá)水平有助于臨床分期組、織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的判斷。

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Expression and significance of PPTG, Survivin and bFGF mRNA in non-small cell lung cancer

ZHAOShu-can,ZHENGDing-rong

ComprehensiveMedicalWard,ShantouCentralHospital,Shantou,Guangdong515031,China

Objective To detect the expression of PPTG mRNA, Survivin mRNA and bFGF mRNA in NSCLC patients, and to explore their diagnostic value in NSCLC. Methods 86 NSCLC patients with primary cancer lesion tissue were randomly selected, including 35 cases of lung squamous cell carcinoma, 38 cases of lung adenocarcinoma, and 13 of other types of lung cancer. There were 46 cases with lymph node metastasis and 40 cases without lymph node metastasis. 36 cases were well-differentiated tumors, 24 cases of median-differentiated tumors, and 26 cases of poorly differentiated tumors. 22 cases were at TNM stage Ⅰ, 24 cases at stage Ⅱ, 20 cases at stage Ⅲ, and 20 cases at stage Ⅳ. The normal lung tissue besides lung cancer were collected in the peritumoral group (86) and the control group (80). The expression of PPTG, Survivin and bFGF mRNA were detected by RT-PCR. Results The expression of PPTG, Survivin and bFGF mRNA in the NSCLC group and the peritumoral group was higher than that in the control group (P<0.05), and the expression in the NSCLC group was higher than that in the peritumoral group (P<0.05). The expression of PPTG, Survivin and bFGF mRNA in adenocarcinoma and squamous cell carcinoma tissues were significantly higher than other tissues, and they was higher in adenocarcinoma than in squamous cell carcinoma (P<0.05). Lung cancer grade, TNM stage and lymph node metastasis were closely positively correlated (P<0.05), regardless of patient's gender and age (P>0.05). Conclusion PPTG, Survivin and bFGF mRNA gene are highly expressed in NSCLC patients, which can help to make the clinical stage, histological grade and lymph node metastasis judgment.

NSCLC; real time polymerase chain reaction; pituitary tumor transforming; survivin; basic fibroblast growth factor

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.03.044

1. 515031 廣東 汕頭，汕頭市汕頭中心醫(yī)院內(nèi)科綜合病區(qū) 2. 518102 廣東 深圳，深圳市寶安區(qū)中心醫(yī)院社區(qū)健康服務(wù)管理中心

2016-07-14]