植廣林 平曉坤 陳絢姣 趙 琰 梁玉珍 黃 勉 賈 坤*

(1.廣州動(dòng)物園，廣州，510070；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣州，510642；3.廣東省獸醫(yī)臨床重大疾病綜合防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州，510642)

野生動(dòng)物結(jié)核病檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

植廣林1平曉坤2，3陳絢姣1趙 琰2，3梁玉珍1黃 勉1賈 坤2，3*

(1.廣州動(dòng)物園，廣州，510070；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣州，510642；3.廣東省獸醫(yī)臨床重大疾病綜合防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州，510642)

稿件運(yùn)行過(guò)程

野生動(dòng)物； 結(jié)核?。?分枝桿菌； 檢測(cè)方法

現(xiàn)今國(guó)內(nèi)外關(guān)于野生動(dòng)物結(jié)核病的檢測(cè)方法大致上可歸為3類：第一類是細(xì)菌學(xué)檢測(cè)，如涂片鏡檢、細(xì)菌培養(yǎng)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等；第二類為免疫學(xué)檢測(cè)，常見的有皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)等；第三類是分子生物學(xué)診斷技術(shù)，常見的有PCR、核酸探針技術(shù)、LAMP等檢測(cè)技術(shù)。

中國(guó)城市化的進(jìn)程讓更多的人進(jìn)入城市，人們接觸野生動(dòng)物的機(jī)會(huì)更多是在動(dòng)物園里，這使得一旦在動(dòng)物群體中爆發(fā)結(jié)核病，如果不能及時(shí)檢測(cè)出來(lái)，就有可能爆發(fā)大規(guī)模的感染。對(duì)于結(jié)核病的危害在集約化養(yǎng)殖的牧場(chǎng)中每年都會(huì)產(chǎn)生巨額的損失，野生動(dòng)物帶菌狀況更是無(wú)法精確統(tǒng)計(jì)，所產(chǎn)生的損失和危害無(wú)法估計(jì)[1]。野生動(dòng)物活動(dòng)范圍廣，對(duì)人類的警惕性也更強(qiáng)，且具有一定的攻擊性，現(xiàn)行的檢測(cè)方法有著其本身的實(shí)際使用優(yōu)勢(shì)，但同時(shí)由于檢測(cè)方法本身的限制，例如野生動(dòng)物區(qū)別于集約化養(yǎng)殖動(dòng)物，難以保定，采樣困難等，傳統(tǒng)的檢測(cè)技術(shù)在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中有一定難度。傳統(tǒng)的檢測(cè)手段以及現(xiàn)行的先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法雖然都有著各種的限制條件及其本身的不足，但對(duì)于建立新的檢測(cè)方法具有重要的借鑒意義，同時(shí)提供了理論基礎(chǔ)。因此準(zhǔn)確了解各種檢測(cè)方法的優(yōu)缺點(diǎn)是很有必要的，本文就現(xiàn)行的對(duì)于動(dòng)物結(jié)核病的檢測(cè)方法作一簡(jiǎn)單的綜述，望能為新的檢測(cè)方法提供幫助。

1 細(xì)菌學(xué)檢測(cè)

1.1 抗酸染色法

由于分枝桿菌(Mycobacteriumspp.)的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，經(jīng)過(guò)加熱和延長(zhǎng)染色時(shí)間可使其固定著色。在分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就可以不被酸性脫色劑脫色而呈現(xiàn)出肉眼可見的紅色，從而達(dá)到對(duì)病料進(jìn)行染色的目的[2]。在普通光學(xué)顯微鏡油鏡下可檢出抗酸性桿菌?？顾崛旧椒ǔＳ幂履岫先旧ǎ部捎脽晒饪顾崛旧?。如果鏡檢組織內(nèi)有抗酸性染色的微生物，并且動(dòng)物組織具有典型的組織學(xué)病變，就可以做出初步診斷。雖然抗酸染色法陽(yáng)性檢出率比較低，但它作為一種傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，具有假陽(yáng)性率低、成本低廉、操作簡(jiǎn)便快捷等特點(diǎn)[3]。在對(duì)于圈養(yǎng)野生動(dòng)物的檢測(cè)上，筆者通過(guò)對(duì)疑似結(jié)核病感染動(dòng)物進(jìn)行采樣之后，進(jìn)行涂片觀察，就可快速做出初步判斷，不需要其他復(fù)雜的檢測(cè)手段，此法在野生珍稀動(dòng)物的結(jié)核病快速檢測(cè)和及時(shí)治療上尤為重要，所以該方法在實(shí)際應(yīng)用中具有一定的實(shí)用價(jià)值。缺點(diǎn)是對(duì)于致病性分枝桿菌和非致病性分枝桿菌難以區(qū)分，對(duì)于菌株的種屬特異性也難以進(jìn)行區(qū)分。

1.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)法

細(xì)菌分離培養(yǎng)常用選擇性培養(yǎng)如羅氏培養(yǎng)基，改良羅氏培養(yǎng)基用來(lái)分離分枝桿菌，再通過(guò)培養(yǎng)所得菌落性狀和生化試驗(yàn)來(lái)鑒定，也可結(jié)合核酸探針和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法進(jìn)行鑒定，同時(shí)上述抗酸染色同樣可適用于分離培養(yǎng)后的細(xì)菌鑒定，本研究目前也建立了結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)的PCR檢測(cè)技術(shù)，在對(duì)臨床樣品的檢測(cè)中發(fā)揮了重要的作用。但如果存在培養(yǎng)物污染或其他的特殊原因，也可通過(guò)接種豚鼠，再通過(guò)分離鑒定來(lái)檢出病原菌。不足之處是在上述培養(yǎng)基中，結(jié)核分枝桿菌需經(jīng)過(guò)14～15 h才能分裂擴(kuò)增一次，這使得整個(gè)病原學(xué)檢測(cè)所需時(shí)間較長(zhǎng)，一般需10～30 d才能在培養(yǎng)基看到較為清楚的菌落[2]，對(duì)于病原菌的檢出陽(yáng)性率也較低。且在細(xì)菌分離培養(yǎng)過(guò)程中，出于公共衛(wèi)生安全以及對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的保護(hù)，一般都需要在生物安全柜中進(jìn)行接種菌株操作，且需要專業(yè)人員在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)菌。該檢測(cè)方法所需的較長(zhǎng)的檢測(cè)時(shí)間對(duì)于快速檢出病原菌的需要存在著先天條件上的不足。由于該方法在檢測(cè)時(shí)效性以及所需的較高的實(shí)驗(yàn)條件等種種原因的限制，在對(duì)于野生動(dòng)物結(jié)核病的檢測(cè)上有多種不足，所以在實(shí)際工作中很少被采用。

2 免疫學(xué)檢測(cè)

這類方法的原理主要是通過(guò)檢測(cè)特異性的抗原抗體免疫反應(yīng)。通過(guò)檢測(cè)抗原特異性的T淋巴細(xì)胞在體外接受相應(yīng)抗原刺激活化后分泌的T淋巴細(xì)胞活化標(biāo)記分子，可以判斷機(jī)體對(duì)某種病原的致敏情況，從而間接反映是否被該病原感染。它是一種快速、簡(jiǎn)便的檢查技術(shù)，并且在多種疾病的診斷中得到廣泛應(yīng)用。目前，報(bào)道研究最多的免疫學(xué)診斷技術(shù)主要有γ-干擾素(IFN-γ)診斷法、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定)法，ELISPOT(酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè))法，白細(xì)胞介素診斷法等。與PPD皮內(nèi)試驗(yàn)相比，上述具有出現(xiàn)反應(yīng)早相比于PPD皮內(nèi)試驗(yàn)所需要的20 d以上的要求，利用類似于γ-干擾素診斷等方法在動(dòng)物被感染后2～3周即可得到陽(yáng)性結(jié)果，具有快速、靈敏的優(yōu)點(diǎn)。

2.1 結(jié)核菌素(PPD)皮內(nèi)試驗(yàn)

結(jié)核菌素皮內(nèi)反應(yīng)屬于遲發(fā)型細(xì)胞過(guò)敏反應(yīng)。結(jié)核菌或卡介苗進(jìn)入機(jī)體使機(jī)體的免疫T淋巴細(xì)胞致敏，并在機(jī)體內(nèi)大量分化增殖。當(dāng)已致敏的機(jī)體再次遭受到抗原入侵時(shí)，已致敏的淋巴細(xì)胞就會(huì)與之結(jié)合，引起機(jī)體被注射部位出現(xiàn)硬塊甚至發(fā)生水泡、壞死等變態(tài)反應(yīng)性炎癥。通過(guò)對(duì)動(dòng)物注射結(jié)核菌素后所出現(xiàn)的一系列炎癥反應(yīng)來(lái)判斷機(jī)體是否感染結(jié)核桿菌。

通過(guò)接種結(jié)核菌素一方面可以檢測(cè)機(jī)體是否感染分枝桿菌。另一方面，通過(guò)結(jié)核菌素試驗(yàn)可以判斷接種卡介苗是否接種成功。此方法在長(zhǎng)期的生產(chǎn)實(shí)踐中被證明是檢測(cè)動(dòng)物結(jié)核病的可靠的篩選試驗(yàn)，在實(shí)際的生產(chǎn)生活中被廣泛采用。但該方法的不足之處在于，對(duì)因感染其他非致病性分枝桿菌而致敏的動(dòng)物檢測(cè)結(jié)果同樣呈陽(yáng)性，無(wú)法通過(guò)所出現(xiàn)的免疫反應(yīng)來(lái)判斷為何種致病菌，且在那些因病情嚴(yán)重而導(dǎo)致免疫反應(yīng)低下的動(dòng)物易出現(xiàn)假陰性。此外，結(jié)核菌素皮內(nèi)試驗(yàn)需要消耗大量人力，檢驗(yàn)周期較長(zhǎng)，所以有一定的滯后性。由于DTH(遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng))的滯后效應(yīng)，此方法不能在30 d內(nèi)重復(fù)進(jìn)行。在對(duì)已經(jīng)進(jìn)行BCG(卡介苗)免疫的動(dòng)物群體，由于BCG疫苗中含有與PPD相同的抗原成分，因而PPD皮內(nèi)試驗(yàn)不能鑒別免疫動(dòng)物與感染動(dòng)物[4]。同時(shí)對(duì)于野生動(dòng)物來(lái)說(shuō)，野生動(dòng)物的不穩(wěn)定性對(duì)動(dòng)物的保定、注射結(jié)核菌素以及后期的對(duì)注射部位的觀測(cè)以確定是否有分枝桿菌感染都是需要顧及到的因素，PPD的質(zhì)量和劑量，結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)及操作方法等因素均能影響檢測(cè)結(jié)果，故需嚴(yán)格進(jìn)行質(zhì)量控制。在一些國(guó)家，使用比較結(jié)核菌素試驗(yàn)，即比較皮內(nèi)試驗(yàn)(SICTT)，在動(dòng)物頸部一側(cè)的不同部位，同時(shí)注射兩種PPD，根據(jù)出現(xiàn)的不同反應(yīng)，能夠提示被檢動(dòng)物是結(jié)核桿菌感染還是非特異的DTH反應(yīng)[4]。

2.2 γ-干擾素(IFN-γ)檢測(cè)

該檢測(cè)方法由Wood等人于1990年建立，其原理為致敏的外周血淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)的條件下，接受特異抗原(如PPD)刺激后被活化，表達(dá)并分泌IFN-γ，通過(guò)一定的技術(shù)手段對(duì)培養(yǎng)上清中的IFN-γ進(jìn)行檢測(cè)(如ELISA)，或者對(duì)IFN-γ mRNA的表達(dá)進(jìn)行定量或者半定量(如RT-PCR)檢測(cè)，還可通過(guò)ELISPOT技術(shù)對(duì)分泌IFN-γ的淋巴細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)(形成的斑點(diǎn)數(shù))及對(duì)單個(gè)細(xì)胞分泌的IFN-γ進(jìn)行定量(形成的斑點(diǎn)大小)檢測(cè)，其結(jié)果與淋巴細(xì)胞增生試驗(yàn)具有很好的相關(guān)性[5]。具體操作，將1mL的肝素抗凝血液和PPD在37℃培養(yǎng)過(guò)夜，第二天收集血漿樣品并以?shī)A心ELISA檢測(cè)IFN-γ[6]。用作全血培養(yǎng)刺激物的抗原是Mycobacteriumbovis的PPD和Mycobacteriumavium的PPD(后者用于檢查交叉反應(yīng))。該測(cè)定系統(tǒng)簡(jiǎn)便、快速，便于用作疫情監(jiān)測(cè)時(shí)大量樣品的測(cè)試。與皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)相比，該方法減少了操作中的主觀性，其敏感性和特異性更高，在皮內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)行后再進(jìn)行IFN-γ試驗(yàn)，其靈敏度和特異性未有顯著影響(分別為85%和93%)，因此可以作為皮內(nèi)試驗(yàn)理想的補(bǔ)充試驗(yàn)[7]。γ-干擾素釋放對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)的主要技術(shù)障礙是在采血后需盡快處理血液樣品，且實(shí)驗(yàn)費(fèi)用高昂，限制了該方法從研究到臨床的實(shí)際應(yīng)用。

2.3 白細(xì)胞介素檢測(cè)

感染分枝桿菌后的機(jī)體多呈現(xiàn)以細(xì)胞免疫為主的免疫反應(yīng)，IL-2主要由刺激活化后的T淋巴細(xì)胞分泌，可以作為T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的指標(biāo)。由于IL-2具有刺激成淋巴細(xì)胞增生的特性，通過(guò)測(cè)定牛外周血淋巴細(xì)胞(PBL)經(jīng)抗原刺激培養(yǎng)后的上清中IL-2的生物活性，以重組人IL-2建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線作對(duì)照，可以IL-2活性進(jìn)行半定量測(cè)定。以此來(lái)檢測(cè)機(jī)體是否感染結(jié)核分枝桿菌。結(jié)核分枝桿菌能夠通過(guò)刺激機(jī)體單核巨噬細(xì)胞來(lái)合成并釋放IL-6[8]。結(jié)核分枝桿菌的內(nèi)毒素脂多糖(LPS)可刺激單核細(xì)胞釋放IL-6增多[9]。IL-6的水平與結(jié)核病的感染有重要關(guān)系，是結(jié)核病診斷的潛在標(biāo)志物，IL-6水平檢測(cè)可輔助診斷結(jié)核病。對(duì)于IL-6的檢測(cè)常用方法如ELISA法，放射免疫檢測(cè)法，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法等方法[10]。IL-6的最低檢測(cè)量可達(dá)3pg/mL[11]，靈敏度較高。聯(lián)合IL-2，IL-6，IFN-γ不但可以更加準(zhǔn)確的檢測(cè)出機(jī)體感染分枝桿菌的情況，而且還可以在檢測(cè)活動(dòng)性結(jié)核病與潛伏性結(jié)核感染鑒別診斷中提供有力依據(jù)[12]。

2.4 ELISA檢測(cè)技術(shù)

ELISA技術(shù)是利用抗原抗體專一性鍵結(jié)合的特性進(jìn)行抗原或抗體檢測(cè)。在多種動(dòng)物疾病診斷中發(fā)揮著重要作用，近年來(lái)深受動(dòng)物疫病篩查工作者的喜愛。結(jié)核分枝桿菌感染后由于細(xì)胞免疫起決定作用，因此對(duì)于結(jié)核桿菌感染后所產(chǎn)生的血清抗體有限，如何發(fā)現(xiàn)這些抗體并建立有效的ELISA檢測(cè)技術(shù)，給科研工作者帶來(lái)了挑戰(zhàn)，目前本項(xiàng)目篩選了多個(gè)基因片段，開展ELISA檢測(cè)技術(shù)的研究，以期獲得特異性好、靈敏度高的ELISA檢測(cè)技術(shù)來(lái)提高結(jié)核病的檢出率。

3 分子生物學(xué)診斷

3.1 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)

PCR技術(shù)在生命科學(xué)領(lǐng)域經(jīng)過(guò)數(shù)年的努力積累了大量的資料和經(jīng)驗(yàn)，使這一方法不斷完善，其反應(yīng)靈敏、特異、快速的特性在多數(shù)報(bào)告中得到肯定[13]。該檢測(cè)方法首先要選擇合適的DNA片段，其次引物設(shè)計(jì)要符合一定的原則，這直接關(guān)系到臨床樣本檢測(cè)的敏感性和特異性，通過(guò)對(duì)不同的特異區(qū)段設(shè)計(jì)相應(yīng)引物，能夠鑒別各種分枝桿菌。再者要注意結(jié)核桿菌DNA的處理。結(jié)核桿菌的細(xì)胞壁具有特殊性，能否有效的破裂其細(xì)胞壁而使DNA釋放，是提高臨床樣品中結(jié)核桿菌檢出率的關(guān)鍵，可以采用經(jīng)典法、煮沸法、超聲粉碎法等。PCR自20世紀(jì)80年代問(wèn)世以來(lái)，被大量用于結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室研究及臨床診斷，但由于很多問(wèn)題如易污染、假陽(yáng)性高、使用致癌物(溴化乙啶)、操作繁瑣等曾一度被質(zhì)疑，為此研究人員正在不斷開發(fā)出新的高靈敏度和高特異性的PCR方法，如反轉(zhuǎn)錄PCR法、套式PCR法、單管套式反轉(zhuǎn)錄PCR法、實(shí)時(shí)熒光PCR、酶聯(lián)PCR等[14-15]，本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)不同類型分枝桿菌的特異片段，建立了結(jié)核分支桿菌的PCR分類鑒定技術(shù)，在對(duì)臨床病例的檢測(cè)中，能夠準(zhǔn)確區(qū)分結(jié)核分支桿菌、牛分支桿菌及非結(jié)核分枝桿菌。

由于PCR方法檢測(cè)的是核酸，故一般PCR方法無(wú)法鑒定死菌和活菌，不能區(qū)別活動(dòng)型和靜止型結(jié)核病，更不能給臨床治療提供有效的監(jiān)測(cè)手段。反轉(zhuǎn)錄PCR雖然能檢測(cè)活菌，但其對(duì)樣本處理要求較高而目前仍難以在臨床上推廣應(yīng)用。綜上所述，PCR方法在結(jié)核病分子診斷中己展現(xiàn)了巨大的應(yīng)用價(jià)值。但臨床實(shí)驗(yàn)室必須在充分了解PCR測(cè)定具有不確定性基礎(chǔ)上，采取相應(yīng)質(zhì)控措施，才能確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，而不致出現(xiàn)重大判斷失誤。因?yàn)镻CR擴(kuò)增可得到極大的檢測(cè)靈敏度，但同時(shí)其對(duì)檢測(cè)中的錯(cuò)誤也有極大的放大作用。因此，對(duì)于PCR檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告必須慎重。必須有相應(yīng)嚴(yán)格質(zhì)量控制措施，如內(nèi)質(zhì)控、陰性和陽(yáng)性質(zhì)控的情況下重復(fù)測(cè)定，才可報(bào)告檢測(cè)結(jié)果，并對(duì)檢測(cè)做出實(shí)事求是的解釋[16]。

3.2 核酸探針技術(shù)

PCR-熒光探針技術(shù)是采用雙重PCR技術(shù)和Taqman探針技術(shù)相結(jié)合，通過(guò)在臨床患病動(dòng)物的痰標(biāo)本中提取分枝桿菌核酸進(jìn)行定性檢測(cè)，分別針對(duì)結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌的特異性序列設(shè)計(jì)引物和探針，探針?lè)謩e標(biāo)記不同的熒光發(fā)光基團(tuán)，通過(guò)監(jiān)測(cè)不同熒光通道的熒光信號(hào)變化，檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌感染，該技術(shù)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、簡(jiǎn)便易行等優(yōu)點(diǎn)[17]。應(yīng)用PCR-熒光探針?lè)ㄔ谂R床標(biāo)本中進(jìn)行大樣本快速檢測(cè)和鑒別結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌，這一點(diǎn)對(duì)于群居性動(dòng)物的結(jié)核病快速檢測(cè)具有很高的應(yīng)用價(jià)值，目前國(guó)內(nèi)的博奧生物有限公司生產(chǎn)的分枝桿菌核酸檢測(cè)試劑盒可以快速檢測(cè)和區(qū)分結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌，1 d可以完成診斷檢測(cè)，國(guó)內(nèi)已經(jīng)有研究報(bào)道這一技術(shù)[18]，這一技術(shù)對(duì)于快速分檢出結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌，為臨床治療提供了有力的幫助。

4 小結(jié)

綜上所述，現(xiàn)行的對(duì)于結(jié)核病原菌的檢測(cè)方法都有著自己本身的優(yōu)缺點(diǎn)，細(xì)菌分離培養(yǎng)方法雖然實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單且可以準(zhǔn)確進(jìn)行結(jié)核病的診斷及病原的分析，但是由于在傳統(tǒng)培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)核桿菌方法中對(duì)于培養(yǎng)過(guò)程中的實(shí)驗(yàn)條件要求過(guò)高，出于生物安全方面的考慮所需要的條件并不適合于野生動(dòng)物的結(jié)核病菌檢測(cè)，且培養(yǎng)過(guò)程中結(jié)核桿菌生長(zhǎng)緩慢，不利于對(duì)疑似感染動(dòng)物進(jìn)行快速處置及采取相應(yīng)防控措施，隨著科研方面的發(fā)展近年來(lái)出現(xiàn)了一系列的快速培養(yǎng)系統(tǒng)，這些快培系統(tǒng)的共同點(diǎn)是均使用液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)菌生長(zhǎng)于一個(gè)相對(duì)密閉安全的環(huán)境中，在這些培養(yǎng)基中由于培養(yǎng)基內(nèi)所添加的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，分枝桿菌在培養(yǎng)基中初代分離率高于L-J法，得到檢測(cè)結(jié)果所需要的時(shí)間也少于L-J法[15]，隨著培養(yǎng)方法的進(jìn)步，結(jié)合PCR技術(shù)極大的檢測(cè)靈敏度，兩者結(jié)合會(huì)是一個(gè)適合快速準(zhǔn)確判斷機(jī)體是否感染結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法。

現(xiàn)行的免疫學(xué)檢測(cè)雖然簡(jiǎn)單易行，但由于目前試劑昂貴，導(dǎo)致大規(guī)模實(shí)施的成本過(guò)高，落實(shí)推廣尚有待時(shí)日。分子生物學(xué)檢測(cè)方面，目前應(yīng)用ELISPOT方法檢測(cè)細(xì)胞因子(尤其是IFN-γ)，PCR檢測(cè)技術(shù)特別是核酸探針技術(shù)已經(jīng)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。這些先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)具有傳統(tǒng)檢測(cè)方法所不具有的快速性、準(zhǔn)確性。經(jīng)過(guò)改良過(guò)后在野生動(dòng)物結(jié)核病檢測(cè)上將具有廣闊的應(yīng)用前景。因此，將現(xiàn)行的醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已經(jīng)成熟的檢測(cè)方法進(jìn)行改良將會(huì)成為野生動(dòng)物結(jié)核病檢測(cè)的研究熱點(diǎn)。

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Wild animal； Tuberculosis； Mycobacteria； Testing

結(jié)核病(Tuberculosis，TB)是一種人獸共患的慢性消耗性傳染病，該病感染宿主廣泛，可以交互傳染，很難根絕。近年來(lái)野外和圈養(yǎng)野生動(dòng)物的結(jié)核病疫情呈現(xiàn)增高的趨勢(shì)，不但造成重大經(jīng)濟(jì)損失，而且影響到公共衛(wèi)生安全。野生動(dòng)物的結(jié)核病主要是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)和牛分枝桿菌(Mycobacteriumbovis)所引發(fā)，其感染宿主譜很廣，并具有或潛在具有傳播給人類的能力。因此，建立快速準(zhǔn)確的結(jié)核病檢測(cè)方法意義重大?，F(xiàn)在較為廣泛使用的結(jié)核病檢測(cè)方法主要分為3大類，分別是細(xì)菌學(xué)檢測(cè)、免疫學(xué)檢測(cè)以及分子生物學(xué)診斷，但是這些檢測(cè)方法仍存在許多問(wèn)題。目前對(duì)于野生動(dòng)物結(jié)核病檢測(cè)迫切需要新的快速、靈敏、特異的動(dòng)物結(jié)核病診斷方法。本文就現(xiàn)行的檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展作一簡(jiǎn)要概括。

The Progress in Testing Technology ofTuberculosis in Wild Animal

Zhi Guanglin1Ping Xiaokun2，3Chen Xuanjiao1Zhao Yan2，3Liang Yuzhen1Huang Mian1Jia Kun2，3*

(1.Guangzhou Zoo，Guangzhou，510070，China；2.College of Veterinary Medicine，South China Agriculture University，Guangzhou，510642，China；3.Guangdong Provincial Key Laboratory of Prevention and Control for Server Clinical Animal Diseases，Guangzhou，510642，China)

Tuberculosis(TB)is a progressive wasting disease which is a zoonosis.In recent years，the frequency of TB epidemics in wild and captive wildlife has been increasing due to the infection ofMycobacteriumtuberculosisandMycobacteriumbovis.This disease has caused enormous economic loss and affects human public health over the long-term because of the potential risks of the transmission of the disease to humans.The rapid and accurate detection of TB is important.Based on our literature review，contemporary TB testing technologies include microbiological detection，immunological assay，and molecular biological diagnosis.However，because there are still some problems with these methods，new rapid，sensitive and specific animal TB diagnosis methods are needed.This paper briefly summarizes the progress of TB diagnosis and quarantine technologies.

植廣林，男，37歲，碩士，獸醫(yī)師；從事野生動(dòng)物疾病研究。E-mail：zhiguanglin@163.com

*通訊作者：賈坤，E-mail：jiakun@scau.edu.cn

2016-08-15

S855.2 S858.9

A

修回日期：2016-08-29

發(fā)表日期：2017-02-10

2310-1490(2017)01-148-05