張雄杰 丁佑銘

TACE對(duì)肝癌組織中MMP-2和MMP-9表達(dá)及其預(yù)后的影響

張雄杰 丁佑銘

目的 探討TACE對(duì)肝癌MMP-2、MMP-9的表達(dá)及預(yù)后的影響。方法 選取肝癌患者80例，隨機(jī)分為兩組，分別為術(shù)前TACE組、直接手術(shù)組。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)兩組患者術(shù)前靜脈血中MMP-2、MMP-9的水平；采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)兩組患者術(shù)中所取肝癌及癌旁組織中MMP-2、MMP-9的表達(dá)；比較兩組患者術(shù)后1、2、3年的生存情況，并分析其影響因素。結(jié)果 直接手術(shù)組患者血液中MMP-2、MMP-9水平明顯高于術(shù)前TACE組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組肝癌組織中MMP-2、MMP-9表達(dá)陽(yáng)性率均較癌旁組織高，且直接手術(shù)組肝癌組織中MMP-2、MMP-9的陽(yáng)性率明顯高于術(shù)前TACE組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；術(shù)前TACE組1、2、3年生存率及中位生存期明顯優(yōu)于直接手術(shù)組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Child-Pugh分級(jí)、MMP-2、MMP-9表達(dá)、門靜脈癌栓、行TACE術(shù)均是影響患者生存期的因素(P<0.05)；與患者性別、年齡、AFP、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目無(wú)關(guān)(P>0.05)。結(jié)論 TACE術(shù)能夠降低肝癌患者血液及組織中MMP-2、MMP-9的表達(dá)，延長(zhǎng)患者術(shù)后生存期，且患者生存期的長(zhǎng)短受Child-Pugh分級(jí)、MMP-2、MMP-9的表達(dá)、出現(xiàn)門靜脈癌栓以及行TACE術(shù)的影響，MMP-2、MMP-9可能成為評(píng)價(jià)肝癌治療效果及預(yù)后的新的指標(biāo)。

TACE；肝癌；MMP-2；MMP-9

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:030～033)

數(shù)據(jù)顯示，每年死于肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的患者超過(guò)60萬(wàn)[1]。除了手術(shù)治療以外，近幾年，動(dòng)脈導(dǎo)管栓塞術(shù)(transcatheter arterial chemoembo lization,TACE)是治療HCC的新方法[2]?；|(zhì)金屬蛋白酶-2、9(matrixmetalloproteinase-2,9,MMP-2,MMP-9)參與HCC的組侵襲轉(zhuǎn)移[3]。本文通過(guò)對(duì)進(jìn)行TACE術(shù)后肝癌組織中MMP-2、MMP-9進(jìn)行檢測(cè)，分析TACE與MMP-2、MMP-9的表達(dá)及肝癌預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2014 年1 月至2015 年1 月在我院住院治療的HCC患者80例作為實(shí)驗(yàn)組，入組患者均可進(jìn)行手術(shù)切除，經(jīng)病理確診，隨機(jī)分為術(shù)前TACE組、直接手術(shù)組，每組40例。術(shù)前TACE組包括男性20例，女性20例，年齡31～81歲，平均(51.23±2.63)歲。直接手術(shù)組包括男性20例，女性20例，年齡30～78歲，平均(49.86±1.52)歲。入組患者的性別、年齡等方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 TACE治療原發(fā)性肝癌的方法

Seldinger 技術(shù)穿刺右股動(dòng)脈，行腹腔干、腸系膜上動(dòng)脈造影。采用CMF方案經(jīng)微導(dǎo)管于腫瘤供血?jiǎng)用}局部灌注化療，具體：5-氟尿嘧啶750 mg、絲裂霉素10 mg、順鉑40 mg，后用碘油-吡柔比星乳劑栓塞填充病灶。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)兩組患者血液中MMP-2、MMP-9的表達(dá) 患者均于第1 次TACE 術(shù)前1天、術(shù)后1天、1周、1個(gè)月，清晨空腹肘前靜脈取血3 ml，收集于無(wú)任何抗凝劑的試管中靜置15 min～1 h，以2 500 r/min 離心15 min,血清保存于-40 ℃待測(cè)。

計(jì)算板孔數(shù)；稀釋標(biāo)準(zhǔn)品；加樣；配液；洗滌；顯色；終止；450 nm波長(zhǎng)處測(cè)量吸光值。

1.3.2 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)兩組患者組織中MMP-2、MMP-9的表達(dá) 標(biāo)本用福爾馬林液固定；脫水、透明；浸蠟、包埋；切片、貼片、烤片；脫蠟、脫水；高壓熱修復(fù)；3%過(guò)氧化氫阻斷；山羊血清封閉；加一抗50 μl靜置1 h；加二抗50 μl靜置10 min；顯色；終止；復(fù)染、分化；脫水、透明；封片；觀察。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

MMP-2、MMP-9陽(yáng)性：細(xì)胞核不染色，胞膜或胞質(zhì)

出現(xiàn)棕色或棕黃色顆粒，染色細(xì)胞數(shù)：陰性(-)：≤10%；弱陽(yáng)性(+)：11%～25%；陽(yáng)性(++)：26%～50%；強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：>50%。

1.5 評(píng)價(jià)指標(biāo)

術(shù)前TACE組患者的生存時(shí)間自首次接受TACE第1天為起點(diǎn)，直接手術(shù)組以手術(shù)第1天為起點(diǎn)，比較兩組患者術(shù)后1、2、3年的生存率。

選定年齡、性別、AFP、Child-Pugh分級(jí)、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、門靜脈癌栓、MMP-2、MMP-9、是否行TACE等變量，分析影響生存期的因素。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用方差分析，生存期比較采用Kaplan-Meier法統(tǒng)計(jì)，影響生存期的因素采用Cox回歸模型分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)兩組患者血液中MMP-2、MMP-9的表達(dá)

采用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)兩組患者M(jìn)MP-2、MMP-9的水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，直接手術(shù)組患者血液中MMP-2、MMP-9水平明顯高于術(shù)前接受TACE治療的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者血液中MMP-2、MMP-9的表達(dá) 比較

注：*為與直接手術(shù)組比較，P<0.05。

2.2 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)兩組患者組織中MMP-2、MMP-9的表達(dá)

采用免疫組織化學(xué)法對(duì)直接手術(shù)組、術(shù)前TACE組患者進(jìn)行MMP-2、MMP-9的檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MMP-2、MMP-9鏡下見棕黃色或黃色顆粒表達(dá)于胞膜或胞質(zhì)。直接手術(shù)組肝癌組織中MMP-2、MMP-9陽(yáng)性率分別為87.5%、85.0%；癌旁組織MMP-2、MMP-9陽(yáng)性率為10.0%、12.5%；術(shù)前TACE組肝癌組織中MMP-2、MMP-9陽(yáng)性率為62.5%、57.5%；癌旁組織MMP-2、MMP-9陽(yáng)性率7.5%、10.0%。兩組肝癌組織MMP-2、MMP-9陽(yáng)性率高于癌旁組織，直接手術(shù)組肝癌組織MMP-2、MMP-9陽(yáng)性率高于術(shù)前TACE組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組中MMP-2、MMP-9的表達(dá)情況/例

注：*為直接手術(shù)組肝癌組織與癌旁組織比較，P<0.05；#為術(shù)前TACE組肝癌組織與癌旁組織比較，P<0.05；△為兩組肝癌組織間比較，P<0.05。

2.3 兩組患者術(shù)后生存期及影響因素的分析

術(shù)前TACE組術(shù)后1、2、3年生存率為94.4%、69.4%、50.9%，中位生存期37.0個(gè)月。直接手術(shù)組術(shù)后1、2、3年生存率為88.6%%、60.0%、25.7%，中位生存期為26.0個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

采用Cox回歸模型，從兩組患者的性別、年齡、AFP、Child-Pugh分級(jí)、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、門靜脈癌栓、MMP-2、MMP-9、是否行TACE等方面，與患者的生存期進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Child-Pugh分級(jí)、MMP-2、MMP-9的表達(dá)、門靜脈癌栓、行TACE術(shù)均是影響患者生存期的因素(P<0.05)；與性別、年齡、AFP、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目無(wú)關(guān)(P>0.05)。

3 討論

肝細(xì)胞癌作為常見的惡性腫瘤，發(fā)病率逐年上升，居全世界第五位，死亡率第二位。對(duì)于HCC的治療，手術(shù)切除仍是首選，但由于其發(fā)病隱匿，患者往往就診較晚，發(fā)現(xiàn)時(shí)已至中晚期，喪失手術(shù)機(jī)會(huì)，僅有不足20%的患者可以直接手術(shù)切除[4]。

臨床上，對(duì)于HCC的治療方案很多，對(duì)于早期患者，采用手術(shù)切除或者射頻消融療效較好，有報(bào)道提示，對(duì)于能夠進(jìn)行手術(shù)切除的HCC患者，其5年生存率可達(dá)50%。而對(duì)于不能手術(shù)切除的中晚期患者，TACE是首選[5]。TACE結(jié)合了TAE 和局部化療，能夠選擇性阻塞肝臟供血?jiǎng)用}，減少90%的腫瘤血供，但對(duì)正常的肝臟組織血液供應(yīng)影響不大，僅為35%。除此之外，TACE局部藥物濃度很高，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，降低化療藥的全身毒性，化療相關(guān)的不良反應(yīng)明顯減少[6]。MMPs的表達(dá)與腫瘤的惡性程度相關(guān)，MMP-2、MMP-9參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移[7]。

本研究選取在我院住院的HCC患者作為入組對(duì)象，隨機(jī)分為術(shù)前TACE組與直接手術(shù)組，采用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)兩組患者進(jìn)行手術(shù)前靜脈血中MMP-2、MMP-9的水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，直接手術(shù)組患者血液中MMP-2、MMP-9明顯高于術(shù)前接受TACE治療的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這提示，對(duì)于HCC患者，在手術(shù)前接受TACE治療，能夠明顯降低MMP-2、MMP-9的水平，降低腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的可能。

對(duì)兩組患者手術(shù)過(guò)程中取肝癌及癌旁組織進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MMP-2、MMP-9鏡下見棕黃色或黃色顆粒表達(dá)于胞膜或胞質(zhì)。直接手術(shù)組肝癌組織中MMP-2、MMP-9陽(yáng)性率87.5%、85.0%；術(shù)前TACE組肝癌組織MMP-2、MMP-9陽(yáng)性率62.5%、57.5%；肝癌組織MMP-2、MMP-9陽(yáng)性率高于癌旁組織，直接手術(shù)組肝癌組織MMP-2、MMP-9陽(yáng)性率高于術(shù)前TACE組。這表明，TACE術(shù)能夠降低肝癌組織中MMP-2、MMP-9的表達(dá)，在一定程度上能夠起到治療HCC的目的。

術(shù)前TACE組12、24、36 個(gè)月生存率94.4%、69.4%、50.9%，中位生存期37.0個(gè)月。直接手術(shù)組12、24、36 個(gè)月生存率88.6%%、60.0%、25.7%，中位生存期26.0個(gè)月，說(shuō)明經(jīng)過(guò)術(shù)前TACE治療后，患者的生存率提高，生存期明顯延長(zhǎng)。從兩組患者的性別、年齡、AFP、Child-Pugh分級(jí)、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、門靜脈癌栓、MMP-2、MMP-9、是否行TACE等方面，與患者生存期的關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Child-Pugh分級(jí)、MMP-2、MMP-9的表達(dá)、門靜脈癌栓、行TACE術(shù)均是影響生存期的因素，與性別、年齡、AFP、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目無(wú)關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)HCC患者與手術(shù)治療前行2次以上TACE治療，其5年生存率達(dá)51.0%，5 年無(wú)病生存期為66.4個(gè)月；術(shù)前行1次TACE者其5年生存率為35.5%，5 年無(wú)病生存期為22.5個(gè)月；手術(shù)前未行TACE者生存率僅為21.4%，5 年無(wú)病生存期為12.5個(gè)月[8]。術(shù)前、術(shù)后均行TACE對(duì)HCC患者生存期的延長(zhǎng)更明顯[9]。既往有病例分析顯示，腫瘤大小、腫瘤位置、肝功、術(shù)前TACE是影響患者術(shù)后生存期的重要因素[10]。上述國(guó)內(nèi)外研究與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。

綜上所述，TACE術(shù)能夠降低肝癌患者血液及組織中MMP-2、MMP-9的表達(dá)，延長(zhǎng)患者術(shù)后生存期，且患者生存期的長(zhǎng)短受Child-Pugh分級(jí)、MMP-2、MMP-9的表達(dá)、出現(xiàn)門靜脈癌栓以及行TACE術(shù)的影響，MMP-2、MMP-9可能成為評(píng)價(jià)肝癌治療效果及預(yù)后的新的指標(biāo)，而TACE值得在臨床上進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

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(編輯：吳小紅)

Effect of TACE on MMP-2 and MMP-9 Expression and Prognosis of Liver Cancer

ZHANGXiongjie,DINGYouming.

People'sHospitalofWuhanUniversity,Wuhan,430000

Objective To study the effect of TACE on the expression of MMP-2,MMP-9 and prognosis of hepatocellular carcinoma.Methods 80 cases of hepatocellular carcinoma were randomly divided into 2 groups,respectively before operation in group TACE,the direct operation group.Using enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of the 2 groups before blood levels of MMP-2,MMP-9;immunohistochemistry was used to detect the expression of MMP-2 in hepatocellular carcinoma and adjacent tissues,MMP-9 taken from the patients in the 2 groups;the survival time of 12,24,36 months after operation in the 2 groups were compared,and influencing factors were analyzed.Results The enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the 2 groups of patients with venous blood MMP-2,MMP-9 levels,direct operation group in blood of patients with MMP-2,MMP-9 was significantly higher than that before surgery in patients receiving TACE treatment,the difference was statistically significant(P<0.05);Using immunohistochemical method in the 2 groups of patients with MMP-2,the expression of MMP-9 in tissues were detected,the positive expression rates of the 2 groups,the liver tissue MMP-2,MMP-9 were lower than that of paracancerous tissue increased,the positive rate and direct operation group of MMP-2,MMP-9 in hepatocellular carcinoma tissues was significantly higher than that before operation in group TACE,with statistical significant difference(P<0.05);Preoperative TACE group 12,24,and 36 months survival rate and median survival period was significantly higher than that of direct operation group,there was significant difference between the 2 groups(P<0.05);grade Child-Pugh,MMP-2,MMP-9 expression,portal vein tumor thrombus,TACE patients were survival factors(P<0.05);the number and gender,age,AFP,tumor size,tumor(P>0.05).Conclusion TACE can reduce the expression of MMP-2 in blood and tissues of patients with hepatocellular carcinoma,MMP-9,survival prolonging postoperative patients,and the length of survival by Child-Pugh classification,MMP-2,MMP-9 expression,tumor thrombus in portal vein and TACE effect,MMP-2,MMP-9 might be a new index to evaluate the treatment of liver cancer effect and prognosis.

TACE;Hepatocellular carcinoma;MMP-2；MMP-9

430000 武漢大學(xué)人民醫(yī)院(張雄杰，丁佑銘)；431600 漢川市人民醫(yī)院(張雄杰)

丁佑銘

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.01.010

R735.7

A

1001-5930(2017)01-0030-04

2016-02-17

2016-09-12)