李賽姣，李維，周丹妮，尹太郎，楊菁

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，武漢 430060)

ATP合成酶β亞單位在PCOS伴2型糖尿病大鼠胰島中的表達(dá)

李賽姣，李維，周丹妮，尹太郎，楊菁*

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，武漢 430060)

目的 研究ATP合成酶β亞單位在多囊卵巢綜合征(PCOS)伴2型糖尿病的大鼠胰島中的表達(dá)情況，初步探討ATP合成酶β亞單位在PCOS發(fā)展為2型糖尿病中的作用。 方法 30只雌性SD大鼠平均分為3組：PCOS組、PCOS伴2-DM組 和對(duì)照組。采用硫酸普拉睪酮鈉誘導(dǎo)PCOS模型(PCOS組，10只)，硫酸普拉睪酮鈉聯(lián)合高脂高糖+鏈脲左菌素(STZ)誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠模型(PCOS伴2-DM組，10只)。HE染色光鏡下觀察PCOS大鼠卵巢的病理結(jié)構(gòu)改變，用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清睪酮(T)、雌二醇(E2)及空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)含量。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)PCOS組、PCOS伴2型糖尿病組及空白對(duì)照組胰腺胰島中ATP合酶β亞單位的表達(dá)。 結(jié)果 與對(duì)照組相比，PCOS伴2-DM組及PCOS組卵巢均呈多囊樣改變；與對(duì)照組相比，PCOS伴2-DM組和PCOS組大鼠FINS雖顯著降低(P<0.05)，但HOMA-IR指數(shù)均顯著增高(P<0.05)，PCOS伴2-DM組大鼠空腹血糖均≥16.7 mmol/L；PCOS組及PCOS伴2-DM組大鼠血清T與E2水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而PCOS組及PCOS伴2-DM組之間無顯著差異(P>0.05)；PCOS伴2-DM組的胰島面積顯著小于對(duì)照組及PCOS組(P<0.05)；PCOS伴2-DM組ATP合酶β亞單位的表達(dá)強(qiáng)度顯著低于對(duì)照組及PCOS組(P<0.05)，PCOS組與對(duì)照組相比胰島中ATP合酶β亞單位的表達(dá)亦顯著降低(P<0.05)。 結(jié)論 硫酸普拉睪酮鈉聯(lián)合高脂高糖飲食+小劑量STZ能有效誘導(dǎo)PCOS伴2型糖尿病大鼠模型；PCOS及PCOS伴2型糖尿病患者胰島中ATP合成酶β亞單位表達(dá)異常，可能是導(dǎo)致2型糖尿病發(fā)生的原因之一。

多囊卵巢綜合征； 2型糖尿?。?ATP合成酶β亞單位； 動(dòng)物模型

(JReprodMed2017，26(1)：64-69)

多囊卵巢綜合征(PCOS)是育齡婦女最常見的內(nèi)分泌失調(diào)性疾病，占生育期婦女的10%～15%。常表現(xiàn)為雄激素增高、排卵減少或停止、月經(jīng)稀少、多毛、痤瘡、肥胖及不孕等癥狀。近年來研究證明PCOS患者普遍存在糖和脂肪代謝異常，約31%～35%的PCOS患者伴有糖耐量異常(IGT)[1]，7%～10%伴有2型糖尿病(2-DM)，其2-DM的發(fā)生率是正常婦女的5～10倍，且發(fā)病時(shí)間也提前近30年[2]。目前研究表明絕大多數(shù)2-DM是“雙重打擊”即胰島素抵抗(IR)和β細(xì)胞胰島素分泌缺乏共同作用導(dǎo)致的結(jié)果，其中胰島β細(xì)胞的異常是PCOS患者發(fā)生2-DM的中心環(huán)節(jié)[3-6]。研究表明ATP合成速率降低可能是多種因素誘導(dǎo)的β細(xì)胞胰島素分泌障礙及凋亡的中心環(huán)節(jié)。脂應(yīng)激會(huì)激活β細(xì)胞解耦聯(lián)蛋白2(UCP2)表達(dá)， 破壞線粒體膜Δψ，抑制ATP合成速率并最終導(dǎo)致β細(xì)胞功能障礙及凋亡[7-8]。最大限度保護(hù)PCOS患者的β細(xì)胞胰島素分泌功能并阻止β細(xì)胞凋亡，有望成為防治其向2-DM發(fā)展的重要途徑。

由此，深入研究PCOS伴2-DM患者β細(xì)胞胰島素分泌缺乏發(fā)病機(jī)制和尋找有效的防治藥物顯得十分緊迫和必要。本研究通過建立PCOS伴2型糖尿病的大鼠模型，觀察ATP合成酶β亞單位在大鼠胰島中的表達(dá)情況，以初步探討ATP合成酶β亞單位在PCOS發(fā)展為2型糖尿病的作用。

材料與方法

一、材料

1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)21日齡SD雌性大鼠30只，購(gòu)自華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)為0026414。

2. 藥物及試劑：注射用硫酸普拉睪酮鈉(江蘇揚(yáng)州奧賽康藥業(yè))；鏈脲佐菌素(STZ)(Sigma，美國(guó))，臨用前以0.1 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH 4.2)溶解，新鮮配成1% STZ溶液，經(jīng)濾菌器除菌；ATP合酶β亞單位單克隆抗體(小鼠抗大鼠)(Santa Cruz，美國(guó))；免疫組化染色試劑盒、甲醛及多聚賴氨酸處理的硅化玻片(武漢博士德)；胰島素、雌激素及睪酮酶聯(lián)免疫分析試劑盒(R&D，美國(guó))；高脂高糖飼料自行配制，基本配方：基礎(chǔ)飼料66.5%，蔗糖20 %，豬油10 %， 膽固醇2.5%，膽酸鈉1%。

二、方法

1. 動(dòng)物分組及模型建立：實(shí)驗(yàn)大鼠自21日齡開始斷奶，標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食、飲水適應(yīng)性喂養(yǎng)2日后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組，將30只大鼠分為3組，分別為PCOS組、PCOS伴2型糖尿病組(PCOS伴2-DM組)及正常組，每組分別10只。

自23日齡開始， PCOS伴2-DM組大鼠給予高脂高糖飼料飲食4周，其他兩組繼續(xù)標(biāo)準(zhǔn)飼料飲食。PCOS組及PCOS伴2-DM組大鼠每日皮下注射硫酸普拉睪酮鈉9 mg/100 g [相當(dāng)于脫氫表雄酮(DHEA)6 mg/100 g]+0.4 ml注射用水，正常對(duì)照組均同期每日皮下注射0.4 ml注射用水，連續(xù)25 d。所有大鼠禁食12 h，PCOS伴2-DM組腹腔注射STZ 45 mg/100 mg 1次，PCOS組及對(duì)照組注射等量檸檬酸鹽緩沖液。于STZ或檸檬酸鹽緩沖液注射后72 h，大鼠用6%水合氯醛麻醉，打開腹腔，直視下采大鼠下腔靜脈血，取胰腺組織及雙側(cè)卵巢組織。

2. 血清性激素和空腹胰島素(FINS)測(cè)定：采集的大鼠下腔靜脈血靜置后放入4℃冰箱過夜，3 000 r/min離心3 min，收集血清，分裝后-20℃保存。采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清激素水平，包括血清E2、T及胰島素(INS)水平。用血糖儀測(cè)定血糖水平，以血糖≥16.7 mmol/L為糖尿病造模成功，以穩(wěn)態(tài)模型的胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)作為評(píng)價(jià)胰島素抵抗(IR)指標(biāo)。HOMA-IR指數(shù)計(jì)算公式為FINS (mU/L)×空腹血糖(FBG) (mmol/L)/22.5。

3. 光鏡標(biāo)本制作：取一側(cè)卵巢及部分胰腺組織，迅速置入10%中性甲醛中固定，以卵巢最大平面為待檢測(cè)面，進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片(4 μm厚)，粘貼于涂有多聚賴氨酸的清潔載玻片上，按照每隔20張取1張的方法，制備切片。烤片后，室溫?zé)o塵保存，切片用于HE染色觀察卵巢的病理結(jié)構(gòu)。

4. 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)ATP合酶β蛋白的表達(dá)：取出胰腺組織固定于10%的甲醛溶液中。將石蠟包埋標(biāo)本制成常規(guī)切片，采用免疫組織化學(xué)SABC法。操作按試劑盒說明進(jìn)行。切片脫蠟至水后，95℃水浴中抗原修復(fù)，加入1∶200稀釋的一抗。依次加二抗、三抗作用，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，二甲苯透明，中性樹膠封片。以已知陽性片作為陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、2型糖尿病相關(guān)激素指標(biāo)檢測(cè)

與對(duì)照組相比，PCOS伴2-DM組和PCOS組大鼠FINS雖顯著降低(P<0.05)，然而，評(píng)價(jià)胰島素抵抗的HOMA-IR指數(shù)均顯著增高(P<0.05)，提示兩組大鼠均存在胰島素抵抗；同時(shí)PCOS伴2-DM組大鼠空腹血糖均≥16.7 mmol/L，提示該組2型糖尿病模型造模成功(表1)。

二、PCOS相關(guān)激素指標(biāo)檢測(cè)

PCOS組及PCOS伴2-DM組大鼠血清T與E2水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)， 而PCOS組及PCOS伴2-DM組之間無顯著差異(P>0.05)(表1)。

三、卵巢病理結(jié)構(gòu)光鏡觀察

PCOS伴2-DM組(圖1A)及PCOS組(圖1B)可見卵巢皮質(zhì)內(nèi)各級(jí)發(fā)育期卵泡，可見多個(gè)囊泡及閉鎖卵泡，卵泡多呈囊性擴(kuò)張，其內(nèi)卵母細(xì)胞及放射冠消失，顆粒細(xì)胞層數(shù)減少(多為2～3層)，排列疏松，黃體數(shù)量明顯下降并伴有不完全的黃素化；對(duì)照組(圖1C) 大鼠卵巢鏡下見發(fā)育各個(gè)時(shí)期的卵泡和黃體，顆粒細(xì)胞形態(tài)完整，排列整齊，多為8～9層，卵泡膜細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞未見增生。

綜合血清性激素和病理檢查結(jié)果提示PCOS伴2-DM大鼠建模成功。

四、ATP合酶β亞單位在PCOS伴2型糖尿病大鼠胰島中的表達(dá)

PCOS伴2-DM組的胰島面積顯著小于對(duì)照組及PCOS組(P<0.05)；PCOS伴2-DM病組ATP合酶β亞單位的表達(dá)強(qiáng)度顯著低于對(duì)照組及PCOS組(P<0.05)，提示與對(duì)照組及PCOS組相比，胰島中ATP合酶β亞單位的表達(dá)明顯降低(P<0.05)。PCOS組與對(duì)照組相比，胰島中ATP合酶β亞單位的表達(dá)亦顯著降低(P<0.05)(表2)。

對(duì)照組胰腺中胰島數(shù)量多；胰島大小均一，形狀規(guī)則，胰島細(xì)胞較整齊；胰島界限清楚，同周圍腺泡界限分明，沒有病理改變(圖2A)。而PCOS伴2-DM組胰腺中胰島少見；胰島萎縮，小胰島多見，胰島都遭到破壞，細(xì)胞核變形；胰島同周圍腺泡界限不清(圖2B)。PCOS組的胰島數(shù)目及大小介于兩組之間，胰島細(xì)胞相對(duì)整齊，胰島存在一定程度破壞，但邊界同周圍腺泡相對(duì)分明(圖2C)。

組 別例數(shù)T(nmol/L)E2(pmol/L)FINS(mU/L)FBG(mmol/L)HOMA?IR指數(shù)對(duì)照組10176±0111347±588087±009354±1021888±189PCOS伴2?DM組10192±017?2283±579?071±006?2659±594?2132±151?PCOS組10211±008?1985±675?077±005?1529±3922192±178?

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05

A：PCOS伴2-DM組；B：PCOS組；C：對(duì)照組圖1 各組大鼠卵巢組織病理結(jié)構(gòu)光鏡觀察結(jié)果(HE×200)

組別胰島面積(μm2)ATP合酶β亞單位(IOD整合光密度)對(duì)照組6297881±662643674048±80983PCOS伴2?DM組1645751±161457?221714±24281?PCOS組5489257±729195?516001±102295?#

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05；與PCOS伴2-DM組相比，#P<0.05

A：對(duì)照組；B：PCOS伴2-DM組；C：PCOS組圖2 各組大鼠胰腺組織病理觀察結(jié)果(HE ×200)

討 論

PCOS是一種較為復(fù)雜的內(nèi)分泌及糖代謝異常所致的綜合征，其臨床表現(xiàn)及癥狀自青春發(fā)動(dòng)期前后開始，一直持續(xù)至絕經(jīng)前后，覆蓋婦女幾乎一生。由卵巢功能障礙所導(dǎo)致的月經(jīng)不調(diào)、多毛、痤瘡、肥胖以及黑棘皮癥等臨床癥狀影響青春期患者，到了育齡期則導(dǎo)致無排卵、不孕不育以及IR等癥狀，到中老年則出現(xiàn)因長(zhǎng)期的代謝障礙導(dǎo)致的2型糖尿病、高血壓、血脂代謝障礙等[9]。統(tǒng)計(jì)顯示，有將近50%的PCOS患者同時(shí)存在著胰島素抵抗[10]，而肥胖型PCOS患者高胰島素血癥發(fā)生率可高達(dá)75%[11]。目前已公認(rèn)IR是PCOS 的基本臨床表現(xiàn)及發(fā)病機(jī)制之一，而IR會(huì)導(dǎo)致遠(yuǎn)期2-DM的發(fā)生。研究顯示PCOS的婦女發(fā)展為2-DM的危險(xiǎn)性較正常婦女高2～6倍，28～30歲PCOS婦女中2-DM的發(fā)病率為4%～10%，生育期PCOS婦女伴2-DM的發(fā)病率為7.2%[12]。目前PCOS患者IR及2-DM發(fā)病機(jī)制不清。因此，建立PCOS合并2-DM動(dòng)物模型對(duì)其病因的基礎(chǔ)研究以及近期及遠(yuǎn)期并發(fā)癥的防護(hù)意義深遠(yuǎn)[13]。

有關(guān)PCOS的造模方法有多種，但尚無公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法。在過去的幾年中，多種PCOS大鼠模型已被用于研究PCOS的病因和病理生理學(xué)。然而多種方法都有其局限性，如戊酸雌二醇可誘導(dǎo)PCOS，主要表現(xiàn)為多囊樣卵巢形態(tài)，但不引起PCOS的典型代謝紊亂[14]；在來曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠模型中，芳香化酶抑制劑能夠阻斷睪酮轉(zhuǎn)化為雌二醇，模型表現(xiàn)出類似人類PCOS的形態(tài)學(xué)改變，盡管能增加睪酮的濃度，但是沒有降低胰島素的敏感性[15]；注射外源性雄激素——硫酸普拉睪酮鈉誘導(dǎo)PCOS模型是一種目前業(yè)界相對(duì)比較認(rèn)可的經(jīng)典方法，已經(jīng)有多個(gè)學(xué)者成功建立了大鼠PCOS的模型，該模型的大鼠能表現(xiàn)出與人類PCOS類似的高雄激素水平及卵巢多囊樣改變等特點(diǎn)[16]。因此本研究選取該法進(jìn)行PCOS大鼠模型的建立。

2-DM動(dòng)物模型可分為自發(fā)性糖尿病模型、化學(xué)藥物如STZ損傷誘導(dǎo)的糖尿病模型、高脂高糖喂養(yǎng)聯(lián)合低劑量STZ誘導(dǎo)的糖尿病模型。本研究選用了前期實(shí)驗(yàn)組所報(bào)道的高脂高糖飲食聯(lián)合低劑量STZ誘導(dǎo)的2-DM模型[17]。其關(guān)鍵藥物STZ是一種廣譜抗生素，具有抗菌、抗腫瘤的性能和致糖尿病的副作用，對(duì)一定種屬動(dòng)物的胰島β細(xì)胞有選擇性破壞作用，能誘發(fā)許多動(dòng)物產(chǎn)生糖尿病。該模型具有類似人類2-DM發(fā)病機(jī)制的特點(diǎn)，是一種理想的2-DM動(dòng)物模型。

本研究中，在通過硫酸普拉睪酮鈉誘導(dǎo)PCOS的同時(shí)給予高脂高糖飲食刺激，PCOS造模完成后給予低劑量STZ腹腔注射，最終誘導(dǎo)的PCOS伴2-DM大鼠激素水平上睪酮水平相對(duì)于對(duì)照組明顯增高(P<0.05)，HOMA-IR指數(shù)升高(P<0.05)；卵巢形態(tài)學(xué)上，模型組相對(duì)于對(duì)照組呈現(xiàn)較多的囊性擴(kuò)張的卵泡，卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞或放射冠消失，顆粒細(xì)胞層變薄甚至消失；臨床癥狀上表現(xiàn)出典型的多飲、多食、多尿癥狀。提示PCOS伴2型DM大鼠模型的建立。該模型對(duì)于研究PCOS胰島素抵抗及2-DM等相關(guān)并發(fā)癥能夠提供較好的幫助。

目前認(rèn)為IR和β細(xì)胞分泌缺陷是2-DM發(fā)病機(jī)制的兩個(gè)主要環(huán)節(jié)。IR貫穿2-DM發(fā)生發(fā)展的整個(gè)過程，是2-DM發(fā)生的始動(dòng)因素，而胰島β細(xì)胞功能正常與否則是2-DM是否發(fā)生的決定因素；如果胰島β細(xì)胞能保持其代償能力，2-DM并不會(huì)發(fā)生，而一旦其代償能力下降，2-DM逐漸發(fā)生。理論上不論IR有多么嚴(yán)重，只要β細(xì)胞能分泌足夠多的胰島素來克服就不會(huì)發(fā)生糖尿病。

但PCOS患者β細(xì)胞胰島素分泌異常的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡明。在胰腺β細(xì)胞中，Ca2+和ATP是胰島素分泌的最重要的調(diào)節(jié)子。Fujimoto等[18]在使用單個(gè)β細(xì)胞或胰島的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)Ca2+和ATP可直接影響胞吐系統(tǒng)，協(xié)同增強(qiáng)胰島素的釋放。Saleh等[7]研究顯示ATP的增加可以誘導(dǎo)K+-ATP通道的關(guān)閉進(jìn)而促進(jìn)胰島素分泌，表明ATP對(duì)于胰腺β細(xì)胞應(yīng)對(duì)葡萄糖反應(yīng)時(shí)分泌胰島素起關(guān)鍵的決定性作用。亦有研究發(fā)現(xiàn)在糖尿病患者中ATP的產(chǎn)生是不足的[8]，而ATP的產(chǎn)生有賴于ATP合成酶。ATP合成酶是產(chǎn)生ATP的關(guān)鍵酶，它的蛋白表達(dá)水平直接影響了線粒體的能量代謝功能。

ATP合成酶普遍存在于細(xì)胞線粒體內(nèi)膜，由F1和F0亞單位構(gòu)成，是一個(gè)將ATP合成與水解(由F1亞單位介導(dǎo))同質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)裝置的旋轉(zhuǎn)(由F0亞單位介導(dǎo))耦聯(lián)的機(jī)械化學(xué)酶，F(xiàn)1亞單位是由α，β二聚物合成的一種三聚物組成[19]。研究發(fā)現(xiàn)胰島β細(xì)胞中ATP合成酶α或β亞基的變異或合成減少都將導(dǎo)致ATP合成減少，導(dǎo)致β細(xì)胞功能的異常。BHE/cdb大鼠是一種線粒體內(nèi)膜ATP合成酶α亞基基因突變的動(dòng)物模型，在成熟后可發(fā)生糖尿病，表現(xiàn)為氧化磷酸化的效率降低，ATP產(chǎn)生減少。Saleh等[7]研究發(fā)現(xiàn)BHE/cdb大鼠經(jīng)葡萄糖刺激后β細(xì)胞ATP的產(chǎn)生下降35%，且可激發(fā)K+-ATP通道的關(guān)閉的藥物格列本脲可恢復(fù)BHE/cdb大鼠葡萄糖刺激的胰島素分泌(GSIS)，提示BHE/cdb大鼠GSIS受損，可能歸因于ATP產(chǎn)生的減少。

本研究通過免疫組織化學(xué)檢測(cè)PCOS組及PCOS伴2-DM大鼠胰腺β細(xì)胞中ATP合成酶的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其ATP合成酶的表達(dá)水平明顯低于正常對(duì)照組，且PCOS伴2-DM組表達(dá)又顯著低于PCOS組，提示PCOS大鼠胰島中線粒體功能下降導(dǎo)致ATP合成不足；而PCOS合并2-DM大鼠中線粒體功能進(jìn)一步下降，引起ATP合成的不足，這將可能進(jìn)一步引起胰島β細(xì)胞分泌缺陷，導(dǎo)致PCOS發(fā)展為2-DM。

綜上所述，硫酸普拉睪酮鈉誘導(dǎo)的PCOS大鼠模型與PCOS患者相似，并在此基礎(chǔ)上聯(lián)合使用高脂高糖飲食及STZ，建立了PCOS伴2-DM的動(dòng)物模型。通過免疫組織化學(xué)的方法發(fā)現(xiàn)PCOS及PCOS伴2-DM的大鼠胰腺β細(xì)胞中ATP合成酶的表達(dá)明顯低于正常對(duì)照組，進(jìn)一步證實(shí)PCOS及PCOS合并2-DM胰島中存在ATP合成酶的缺陷，可能導(dǎo)致β細(xì)胞功能不足以及PCOS發(fā)展為2-DM。因此，在PCOS發(fā)病的早期實(shí)施干預(yù)，阻止ATP合成酶的減少，或誘導(dǎo)ATP合成酶的表達(dá)增加，可能將阻斷IR的進(jìn)展，進(jìn)而阻止PCOS發(fā)展為2-DM，對(duì)預(yù)防PCOS的遠(yuǎn)期并發(fā)癥的研究中具有重要意義。

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[編輯：郭永]

Expression of the ATP synthase β-subunit in pancreas of rats with polycystic ovary syndrome and type 2 diabetes

LI Sai-jiao， LI Wei， ZHOU Dan-ni， YIN Tai-lang,YANG Jing*

ReproductiveMedicalCenter，RenminHospitalofWuhanUniversity，Wuhan430060

Objective： To investigate the expression of ATP synthase β-subunit in pancreas of the rats with polycystic ovary syndrome (PCOS) and type 2 diabetes(PCOS pus 2-DM).Methods： Thirty female SD rats were divided into three equal groups including PCOS group， PCOS plus type 2 diabetes group and control group. The rats in PCOS group were received subcutaneous injection of sodium prasterone sulfate once daily for 25 consecutive days to induce PCOS model； and the rats in the PCOS plus 2-DM group were treated with sodium prasterone sulfate combined with high-carbohydrate/high-fat diet & streptozotocin (STZ)； while the rats in the control group were injected with water for injection at the same period. Histopathological changes of the ovaries were observed by HE staining， and fasting blood glucose (FBG)， fasting insulin (FINS)， and sex hormone levels were determined three weeks later. Light microscopy examination of pancreas and ovary were performed. The expression of ATP synthase β-subunit in pancreas was measured by immunohistochemistry staining.Results： PCOS plus 2-DM group and PCOS group showed polycystic-like changes in the ovary. Compared with the control group， FINS was significantly lower， but HOMA-IR was significantly higher in PCOS plus 2-DM group and PCOS group (P<0.05). The FBG levels were more than or equal to 16.7 mmol/L in PCOS plus 2-DM group. The serum testosterone and estradiol levels were significantly increased in PCOS group and PCOS plus 2-DM group compared with those in control group (P<0.05)， while there was no significant difference between PCOS group and PCOS plus 2-DM group (P>0.05). The islet area in PCOS plus 2-DM group was significantly less than that in control group or PCOS group(P<0.05). Additionally， the expression of ATP synthase β-subunit in pancreas in PCOS plus 2-DM group was significantly decreased than that in control group or PCOS group(P<0.05)， and the expression in PCOS group was also significantly lower than in the control groups(P<0.05).Conclusions： The sodium prasterone sulfate combing with high-carbohydrate/high-fat diet & STZ can effectively induce a model of PCOS with type 2 diabetes. The ATP synthase β-subunit of pancreas may play an important role in the pathogenesis of type 2 diabetes.

Polycystic ovarian syndrome； Type 2 diabetes； ATP synthase β-subunit； Animal model

10.3969/j.issn.1004-3845.2017.01.012

2016-05-30；

2016-07-23

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30973196)；中央高校青年教師資助項(xiàng)目(2042016kf0086)

李賽姣，女，云南玉溪人，博士，主治醫(yī)師，生殖內(nèi)分泌專業(yè).(*