韓 潔，平莉莉， 胡麗敏，侯曉英

(1.河北省邯鄲市中心醫(yī)院功能科，河北 邯鄲 056001；2.河北省邯鄲市中心醫(yī)院新生兒科，河北 邯鄲 056001；3.河北省邯鄲市中心醫(yī)院兒科， 河北 邯鄲 056001)

原發(fā)性癲癇患兒腦電圖與血清炎性因子水平的相關(guān)性分析

韓 潔1，平莉莉2， 胡麗敏3，侯曉英1

(1.河北省邯鄲市中心醫(yī)院功能科，河北 邯鄲 056001；2.河北省邯鄲市中心醫(yī)院新生兒科，河北 邯鄲 056001；3.河北省邯鄲市中心醫(yī)院兒科， 河北 邯鄲 056001)

目的分析原發(fā)性癲癇患兒腦電圖與血清炎性因子水平的相關(guān)性。方法將75例原發(fā)性癲癇患兒根據(jù)癲癇發(fā)作情況分為癲癇頻發(fā)組、癲癇持續(xù)狀態(tài)組、非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組各25例。另選取同期30例健康體檢兒童作為對照組。觀察對照組和癲癇患兒血清高遷移率族蛋白B1(high-mobility group protein box-1，HMGB1)、白細胞介素2(interleukin-2,IL-2)、白細胞介素6(interleukin-6,IL-6)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)水平及腦電圖檢查結(jié)果。結(jié)果癲癇患兒HMGB1、IL-2、IL-6、TNF-α及腦電圖異常率均明顯高于健康對照組(P<0.05)，癲癇持續(xù)狀態(tài)組、癲癇頻發(fā)組血清HMGB1、IL-2、IL-6、TNF-α水平均高于非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組(P<0.05)；腦電圖癲癇樣放電組及慢波異常組血清中HMGB1、IL-2、IL-6、TNF-α水平明顯高于腦電圖正常及界線性組(P<0.05)，腦電圖癲癇樣放電組血清中HMGB1、IL-2、IL-6、TNF-α水平明顯高于腦電圖慢波異常組(P<0.05)。結(jié)論血清HMGB1、IL-2、IL-6、TNF-α是影響原發(fā)性癲癇患兒病情的重要炎性因子，腦電圖異常改變與炎癥因子表達水平呈正相關(guān)。

癲癇；炎性因子；腦電描記術(shù)；兒童

癲癇是小兒神經(jīng)系統(tǒng)常見的慢性疾病，表現(xiàn)為腦神經(jīng)元異常同步放電引起的暫時性腦功能障礙綜合征[1-2]，具有反復(fù)發(fā)作的特點，嚴重影響患兒的生活質(zhì)量。其發(fā)病機制尚未完全清楚，可能與炎性因子、神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)失衡有關(guān)。高遷移率蛋白1(high-mobility group protein box-1，HMGB1)是一類非組蛋白染色體結(jié)合蛋白，參與呼吸系統(tǒng)疾病、膿毒癥及缺血性腦損傷等多種疾病病理過程，在難治性癲癇患者海馬組織中也呈高表達[3-4]。白細胞介素6(interleukin-6,IL-6)是臨床常用的炎性因子指標(biāo)。本研究探討原發(fā)性癲癇患兒腦電圖檢查結(jié)果與血清HMGB1及炎癥因子水平的相關(guān)性，旨在為原發(fā)性癲癇患兒選擇更好的治療方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年1月—2015年10月來我院就診的原發(fā)性癲癇患兒75例，男性41例，女性34例，年齡6個月～12歲，平均(6.27±1.48)歲；另選取同期體檢健康兒童30例作為對照組，男女性各15例，年齡3～10歲，平均(7.13±0.36)歲。2組性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。原發(fā)性癲癇患兒根據(jù)癲癇發(fā)作情況分為3個亞組，3亞組間性別、年齡、病程、發(fā)病原因差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表1。

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患兒監(jiān)護人均知情同意。

表1 3組原發(fā)性癲癇患兒一般資料比較Table 1 Comparison of general data between 3 groups of primary epilepsy children (n=25)

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①原發(fā)性癲癇患兒診斷符合2010年國際抗癲癇聯(lián)盟及國際癲癇局制定的癲癇發(fā)作和癲癇綜合征診斷指南[5]，結(jié)合臨床表現(xiàn)、既往史及個人史、家族史、腦電圖檢查予以確診；②根據(jù)癲癇發(fā)作的頻率及每次持續(xù)時間進行分組，癲癇頻發(fā)定義為癲癇發(fā)作>3次/d，癲癇持續(xù)狀態(tài)定義為發(fā)作持續(xù)30 min以上或短期內(nèi)連續(xù)間斷發(fā)作超過30 min、間歇期未恢復(fù)到發(fā)作前狀態(tài)；③健康對照組無癲癇病史及家族史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、顱腦創(chuàng)傷、腦出血、腦部占位或遺傳代謝性疾病引起的繼發(fā)性癲癇；②近期有感染史；③近1個月內(nèi)應(yīng)用免疫抑制劑及激素治療者。

1.3 腦電圖檢查 應(yīng)用日本光電EEG1200視頻腦電圖儀進行監(jiān)測，常規(guī)予以單極和雙極導(dǎo)聯(lián)描記，其間作睜、閉眼試驗，閃光刺激和過度呼吸誘發(fā)試驗，詳細記錄腦電波變化，腦電圖檢查時間3.5～4 h。根據(jù)腦電圖檢測結(jié)果分為腦電圖正常、腦電圖界線性、腦電圖慢波異常、腦電圖癲癇樣放電4個等級[6]。

1.4 炎性因子檢測 健康對照組兒童在體檢時、癲癇患兒在癲癇發(fā)作后12 h內(nèi)，采集空腹外周靜脈血2 mL，于室溫下靜置30 min，3 000 r/min離心10 min(離心半徑3 cm)，留取血清置于-80 ℃冰箱保存后行批量操作檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測血清HMGB1、白細胞介素2(interleukin-2,IL-2)、IL-6、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平；HMGB1試劑盒批號為A729AD0275，IL-2試劑盒批號為A729AD0277，IL-6試劑盒批號為A729AD0278，TNF-α試劑盒批號為A729AD0230，均購自上海生工生物工程股份有限公司，嚴格按說明書進行操作。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料比較分別采用單因素方差分析和SNK-q檢驗；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 癲癇患兒與健康對照組血清炎癥因子水平及腦電圖異常率比較 非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組、癲癇頻發(fā)組和癲癇持續(xù)狀態(tài)組HMGB1均高于健康對照組(P<0.05)，癲癇頻發(fā)組和癲癇持續(xù)狀態(tài)組又高于非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組(P<0.05)；非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組、癲癇頻發(fā)組和癲癇持續(xù)狀態(tài)組IL-2高于健康對照組(P<0.05)，癲癇頻發(fā)組、癲癇持續(xù)狀態(tài)組又高于非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組(P<0.05)；癲癇頻發(fā)組和癲癇持續(xù)狀態(tài)組IL-6高于健康對照組和非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組(P<0.05)；非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組、癲癇頻發(fā)組TNF-α高于健康對照組，癲癇持續(xù)狀態(tài)組高于健康對照組、非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組和癲癇頻發(fā)組(P<0.05)；非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組、癲癇頻發(fā)組和癲癇持續(xù)狀態(tài)組腦電圖異常率均高于健康對照組(P<0.05)。見表2。

組別 例數(shù)HMGB1(μg/L)IL?2(ng/L)IL?6(ng/L)TNF?α(ng/L)腦電圖異常(例數(shù)，%)健康對照組 304．22±0．903．81±0．458．11±1．080．05±0．020(0．00)非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組257．86±0．41?5．32±0．86?11．98±1．270．10±0．02?17(68．00)?癲癇頻發(fā)組 258．72±0．64?#6．54±0．75?#14．60±1．51?#0．11±0．01?23(92．00)?癲癇持續(xù)狀態(tài)組 259．00±0．74?#8．17±0．92?#△14．75±1．60?#0．14±0．03?#△24(96．00)?F/χ2 276．742177．005144．41594．52470．379P 0．0000．0000．0000．0000．000

*P<0.05與健康對照組比較 #P<0.05與非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組比較 △P<0.05與癲癇頻發(fā)組比較(SNK-q或χ2檢驗)

2.2 癲癇患兒腦電圖檢查與血清炎癥因子表達水平比較 根據(jù)原發(fā)性癲癇患兒腦電圖檢查結(jié)果分析，腦電圖正常組、界線性組、慢波異常組、癲癇樣放電組血清炎癥因子呈逐漸升高。腦電圖癲癇樣放電組及慢波異常組血清HMGB1、IL-2、IL-6和TNF-α水平均顯著高于腦電圖正常組和界線性組(P<0.05)，而腦電圖癲癇樣放電組又明顯高于腦電圖慢波異常組(P<0.05)。見表3。

腦電圖結(jié)果例數(shù)HMGB1(μg/L)IL?2(ng/L)IL?6(ng/L)TNF?α(ng/L)正常組 114．61±0．854．12±0．468．86±1．230．05±0．02界線性組 254．89±0．444．35±0．529．14±1．420．06±0．03慢波異常組 278．47±0．61?#7．45±0．85?#13．36±1．40?#0．11±0．04?#癲癇樣放電組128．98±0．72?#△8．36±1．02?#△14．82±1．68?#△0．15±0．04?#△F 239．967139．72371．80426．244P 0．0000．0000．0000．000

*P<0.05與正常組比較 #P<0.05與界線性組比較 △P<0.05與慢波異常組比較(SNK-q檢驗)

3 討 論

HMGB1首先發(fā)現(xiàn)于腦內(nèi)，是存在于真核生物細胞內(nèi)的一類非組蛋白染色體結(jié)合蛋白，通過調(diào)節(jié)神經(jīng)細胞的遷移和出芽等生理功能來參與腦的發(fā)育。有研究發(fā)現(xiàn)，癲癇大鼠海馬神經(jīng)元細胞、星形細胞內(nèi)外和難治性顳葉癲癇患者海馬組織中神經(jīng)元細胞、膠質(zhì)細胞中HMGB1均呈高表達[7-8]。HMGB1廣泛存在于腦、淋巴組織等組織細胞的細胞核中，在巨噬細胞、單核細胞、TNF-α等誘導(dǎo)后，HMGB1可分泌到細胞外，參與許多感染性、非感染性疾病的發(fā)病與發(fā)展，HMGB1的異常增高還與危重患者的病情嚴重程度及臨床病死率有關(guān)。動物實驗發(fā)現(xiàn)，在海人藻酸注射前15 min，在C57BIJ6大鼠海馬內(nèi)注入HMGB1，大鼠癲癇發(fā)作頻率提高2.5倍，每次癲癇持續(xù)時間也相對延長[9-10]。范真等[11]研究表明，在側(cè)腦室注射HMGB1中和抗體可以抑制海馬炎性因子合成及膠質(zhì)細胞活化，減輕神經(jīng)元損傷，發(fā)揮神經(jīng)保護作用。

IL-2、IL-6、TNF-α均是反映機體炎癥狀狀態(tài)的常用炎性因子。IL-2是由活化T細胞產(chǎn)生的具有廣泛生物學(xué)活性的細胞因子，不僅參與機體免疫應(yīng)答反應(yīng)，同時作為神經(jīng)調(diào)質(zhì)樣物質(zhì)，可通過升高神經(jīng)元細胞內(nèi)游離鈣離子濃度，促進N-甲-D-天門冬氨酸受體1型亞單位合成，參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理與生理過程，發(fā)揮興奮性神經(jīng)調(diào)質(zhì)作用[12]。IL-6是一種具有多種生物活性的早期炎性因子，參與機體的免疫反應(yīng)，在巨噬細胞等受刺激后數(shù)小時即可釋放至胞外發(fā)揮致炎效應(yīng)；IL-6水平升高程度與癲癇本身有關(guān)，癲癇發(fā)作后IL-6由腦血管釋放后進入血液循環(huán)，造成外周血IL-6水平升高，反復(fù)全身強直陣攣發(fā)作患者IL-6水平呈強表達；有研究認為IL-6可保護急性癲癇發(fā)作造成的腦損傷，但IL-6長期過度表達可加重癲癇，引起神經(jīng)膠質(zhì)增多癥、神經(jīng)細胞減少，造成神經(jīng)組織的結(jié)構(gòu)改變[13-15]。TNF-α是具有多種生物學(xué)效應(yīng)細胞調(diào)節(jié)因子，主要由單核巨噬細胞與淋巴細胞分泌產(chǎn)生，通過花生四烯酸作用誘導(dǎo)自由基產(chǎn)生，從而改變神經(jīng)元膜與突觸功能，調(diào)節(jié)膜離子分布與密度，導(dǎo)致鈣離子進入細胞內(nèi)而發(fā)生進行性去極與興奮性升高，增強海馬CA3錐體細胞興奮性，降低抑制性突觸后電位活動，導(dǎo)致癲癇樣放電[16]。相關(guān)研究表明，癲癇患兒腦組織IL-6、TNF-α表達水平均異常升高，驚厥發(fā)作患兒血清及腦脊液IL-2、IL-6、TNF-α表達水平與驚厥呈正相關(guān)[17]。本研究結(jié)果顯示，癲癇患兒血清HMGB1、IL-2、IL-6、TNF-α水平均顯著高于健康對照組，癲癇持續(xù)狀態(tài)組、癲癇頻發(fā)組血清HMGB1、IL-2、IL-6、TNF-α水平均高于非癲癇頻發(fā)非持續(xù)狀態(tài)組。表明HMGB1、IL-2、IL-6、TNF-α的異常表達與癲癇的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

癲癇是因為腦組織神經(jīng)元突然、間歇性癇樣放電所誘發(fā)的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)綜合征，臨床呈反復(fù)、短暫性發(fā)作等特點。腦電圖檢測是臨床診斷癲癇發(fā)作的重要手段[18-19]。李欣等[20]研究證實，老年癲癇患者腦電圖檢查與血清細胞因子表達水平呈正相關(guān)。本研究腦電圖慢波異常、癲癇樣放電組血清中HMGB1、IL-2、IL-6、TNF-α水平明顯高于腦電圖正常及界線性組。姚丹等[21]也有類似報道。

本研究結(jié)果表明，HMGB1、IL-2、IL-6、TNF-α是影響原發(fā)性癲癇患兒病情的重要炎性因子，且患兒血清HMGB1、IL-2、IL-6、TNF-α表達水平越高，腦電圖的異常率越高，臨床給予HMGB1及IL-2、IL-6、TNF-α抑制劑可能有利于癲癇的控制。需要指出的是，本研究僅僅是一個小樣本的分析，所有患兒均來自同一家醫(yī)院，可能會存在樣本數(shù)量、樣本來源上的偏畸，更準(zhǔn)確的結(jié)論還有待于今后擴大樣本展開研究。

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(本文編輯：許卓文)

Correlation analysis of EEG and serum levels of inflammatory factors in children with idiopathic epilepsy

HAN Jie1, PING Li-li2, HU Li-min3, HOU Xiao-ying1

(1.Department of Function, Handan Central Hospital, Hebei Province, Handan 056001, China; 2.Department of Neonatology, Handan Central Hospital, Hebei Province, Handan 056001, China; 3.Department of Pediatrics, Handan Central Hospital, Hebei Province, Handan 056001, China)

Objective To analyze the relevance of EEG in children with idiopathic epilepsy to serum levels of inflammatory factors. Methods Seventy-five cases diagnosed with idiopathic epilepsy included in the study were divided into 3 groups according to the frequency of epileptic seizures: epilepticus status group, non-epileptic frequent or persistent state group, and persistent state group, which included 25 cases in each group. Thirty healthy children were enrolled as control cases. Serum level of inflammatory factors (HMGB1, IL-6, IL-2, TNF-α) and EEG findings were analyzed in both epilepsy and control groups. Results Serum level of HMGB1, IL-2, IL-6, TNF-α in in cases with epilepsy were significantly higher than that in control group (P<0.05), serum level of HMGB1, IL-2, IL-6, TNF-α in cases with epilepticus status and frequent epilepsy were both higher than that in non-frequent seizures or persistent state group (P<0.05); Serum level of HMGB1, IL-2, IL-6, TNF-α in cases with EEG epileptic discharge and slow waves were significantly higher than those with normal EEG and boundary resistance (P<0.05). Serum level of HMGB1, IL-2, IL-6, TNF-α levels in cases with EEG epileptic discharge were significantly higher than those with EEG slow waves (P<0.05). Conclusion HMGB1, IL-2, IL-6, TNF-α are important inflammatory factors relevance to idiopathic epilepsy. Abnormalities findings in EEG were positively correlated with serum levels of HMGB1, IL-2, IL-6, TNF-α.

epilepsy; inflammatory cytokines; electroencephalography; child

2016-06-06；

2016-09-19

韓潔(1975-)，女，河北平山人，河北省邯鄲市中心醫(yī)院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事腦電圖監(jiān)測及小兒發(fā)作性疾病研究。

R742.1

A

1007-3205(2017)01-0051-05

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.01.012