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        基因擴(kuò)增檢測領(lǐng)域的食品檢測實驗室認(rèn)可應(yīng)用研究

        2017-02-02 17:26:47李宏鄧六愛韓子強(qiáng)李艷美劉云國
        農(nóng)產(chǎn)品加工 2017年11期
        關(guān)鍵詞:食品質(zhì)量試劑實驗室

        李宏,鄧六愛,韓子強(qiáng),李艷美,劉云國

        (1.新疆大學(xué),新疆烏魯木齊830046;2.中國合格評定國家認(rèn)可中心,北京100062;3.日照市食品藥品檢驗檢測中心,山東日照276800;4.平陰縣職教中心,山東平陰250400)

        基因擴(kuò)增檢測領(lǐng)域的食品檢測實驗室認(rèn)可應(yīng)用研究

        李宏1,2,鄧六愛3,韓子強(qiáng)4,李艷美1,*劉云國1

        (1.新疆大學(xué),新疆烏魯木齊830046;2.中國合格評定國家認(rèn)可中心,北京100062;3.日照市食品藥品檢驗檢測中心,山東日照276800;4.平陰縣職教中心,山東平陰250400)

        檢測和校準(zhǔn)實驗室認(rèn)可準(zhǔn)則,包含了食品檢測實驗室為證明其按質(zhì)量管理體系運行、具有全部技術(shù)能力并能提供正確技術(shù)測試結(jié)果所必須滿足的全部要求?;驍U(kuò)增是指以擴(kuò)增檢測DNA或RNA為方法的檢測技術(shù),適用于從事基因擴(kuò)增檢測領(lǐng)域食品質(zhì)量檢測類相關(guān)實驗室的認(rèn)可活動。從實驗室和人員情況、管理體系、服務(wù)和供應(yīng)品性能的技術(shù)要求、客戶服務(wù)等方面闡述了管理要求,從人員情況、設(shè)施與環(huán)境條件、檢驗方法和數(shù)據(jù)控制、儀器和設(shè)備、測量的溯源性、測試及校準(zhǔn)物品的處置、技術(shù)結(jié)果的質(zhì)量保證和報告等方面闡述了技術(shù)要求。

        基因擴(kuò)增檢測;檢測和校準(zhǔn)實驗室;實驗室認(rèn)可

        基因擴(kuò)增是指通過生物體外試驗的方法,將一特定基因的拷貝數(shù)選擇性地增加而其他基因并未按比例增加的過程,即以擴(kuò)增檢測DNA或RNA為方法的檢測技術(shù),不包括自然基因擴(kuò)增。檢測和校準(zhǔn)實驗室能力認(rèn)可準(zhǔn)則,包含了檢驗和校準(zhǔn)實驗室為證明其按質(zhì)量管理體系運行、具有全部技術(shù)能力并能提供正確技術(shù)檢測結(jié)果所必須滿足的所有要求[1]。研究適用于從事基因擴(kuò)增檢測領(lǐng)域的食品質(zhì)量檢測實驗室的認(rèn)可活動,因擴(kuò)增方法主要用于轉(zhuǎn)基因檢測、動植物源性成分鑒定、過敏原檢測、物種分子鑒定、微生物鑒定、功能基因檢測等,該領(lǐng)域涉及植物學(xué)、動物學(xué)、微生物學(xué)、病毒學(xué)、人類學(xué)、古生物學(xué)、藻類學(xué)、昆蟲學(xué)等。

        1 管理方面的要求

        1.1 實驗室及人員要求

        食品質(zhì)量檢測實驗室不得從事法律法規(guī)禁止的一切活動,包括不允許發(fā)布在國家法律法規(guī)禁止范圍內(nèi)的檢驗結(jié)果,有責(zé)任和義務(wù)保護(hù)我們國家的物種信息資源和基因資源,應(yīng)確保樣本及其相關(guān)的基因、遺傳信息不被用于鑒定及客戶委托以外的其他目的使用。食品質(zhì)量檢測實驗室技術(shù)管理者中應(yīng)至少包括1名具有豐富的基因擴(kuò)增檢測經(jīng)驗和相關(guān)知識的人員,應(yīng)具有分子生物學(xué)專業(yè)或與所從事檢驗專業(yè)范圍密切相關(guān)的大學(xué)本科以上學(xué)歷和至少5年以上分子生物學(xué)檢測的工作經(jīng)歷。

        1.2 管理體系

        針對基因擴(kuò)增檢測領(lǐng)域的基礎(chǔ)性和前瞻性,應(yīng)建立與其活動范圍相適應(yīng)的管理體系。應(yīng)制定程序來描述如何更改和控制保存在計算機(jī)系統(tǒng)中的文件,尤其是結(jié)果的處理軟件。標(biāo)書和合同的評審對包括所使用方法在內(nèi)的要求應(yīng)予以規(guī)定,并充分考慮國家法律法規(guī)及社會倫理道德的要求[2-3]形成文件,并被人們易于理解;使用時,應(yīng)包括客戶的要求或標(biāo)書與合同之間任何差異、任何變化的動態(tài)管理。基因擴(kuò)增領(lǐng)域具有探索性,在實際檢測工作中經(jīng)常根據(jù)前期的檢測結(jié)果確定下一步的檢測工作,由于合同處于變化過程中,因而對合同要實施動態(tài)管理。食品質(zhì)量檢測實驗室應(yīng)根據(jù)客戶樣品的信息,如樣品類型及樣品的處理程度,確定此技術(shù)在樣本中的適用性。當(dāng)核酸提取或基因擴(kuò)增無法完成、無法出具結(jié)果報告時,應(yīng)向客戶做出說明。如基因擴(kuò)增后需要進(jìn)行測序,該測序工作可以優(yōu)先分包給已獲認(rèn)可的權(quán)威或?qū)I(yè)技術(shù)機(jī)構(gòu)來進(jìn)行。

        1.3 服務(wù)和供應(yīng)品性能的技術(shù)要求

        應(yīng)制訂實驗驗證的文件,包括分子生物學(xué)試劑、染料、培養(yǎng)基、血清、抗血清和分析軟件等符合預(yù)期性能;尤其要對影響結(jié)果質(zhì)量的重要供應(yīng)品、試劑和消耗性材料進(jìn)行技術(shù)性驗收[4-5]。用于基因擴(kuò)增前處理的試劑,應(yīng)為不含干擾檢測結(jié)果成分的分析純或生化試劑,使用時提取緩沖液或溶液使用前應(yīng)采用適當(dāng)方式滅菌,應(yīng)遵循前處理的注意事項或試劑的使用說明(包括試劑對聲、光、熱及化學(xué)物質(zhì)的穩(wěn)定性信息)并形成相應(yīng)記錄。食品質(zhì)量檢測實驗室配制的試劑應(yīng)貼好標(biāo)簽,并在標(biāo)簽上注明試劑名稱、容量、溶劑類型、配制及使用日期和/或保質(zhì)期,若試劑有特殊使用說明、有毒有害提示或使用限制也應(yīng)在標(biāo)簽上注明。所用Taq聚合酶/反應(yīng)預(yù)混液/試劑盒/引物和探針,在使用前應(yīng)進(jìn)行性能驗證。引物應(yīng)通過核酸陽性物質(zhì)及陰性物質(zhì)驗證其性能,并出具證明證實引物的性質(zhì)或序列。實驗室應(yīng)優(yōu)先使用已經(jīng)獲得產(chǎn)品認(rèn)證或者質(zhì)量管理體系認(rèn)證的合格供應(yīng)商提供的產(chǎn)品;檢驗機(jī)構(gòu)也可以通過調(diào)查或?qū)嵉乜疾旆绞竭M(jìn)行供應(yīng)商的評價,證明供應(yīng)商的組織能力和技術(shù)能力,并保存對其進(jìn)行評價的相關(guān)記錄[6]。

        1.4 客戶服務(wù)

        食品質(zhì)量檢測實驗室在確保其他客戶信息機(jī)密的前提下,允許客戶或其代表合理進(jìn)入檢測機(jī)構(gòu)的相關(guān)區(qū)域,還應(yīng)考慮法律法規(guī)、樣品安全、人身安全、污染防范等多方面因素[7-8]。實驗室應(yīng)制定污染處理文件,污染一旦發(fā)生,應(yīng)立即停止檢驗工作,并立即評價是否對檢驗結(jié)果造成了不良影響;應(yīng)確保所有檢驗人員能夠識別污染的發(fā)生,并執(zhí)行工作程序;應(yīng)有程序確保電子記錄的安全性和完整性,并定期進(jìn)行備份和殺毒處理;授權(quán)專門人員負(fù)責(zé)電子記錄的保存、使用、傳輸、審核以及維護(hù)等。

        2 技術(shù)方面的要求

        2.1 人員要求

        食品質(zhì)量檢測實驗室選用工作人員時,應(yīng)考慮以下幾個條件:①應(yīng)該熟悉生物檢驗安全和消毒滅菌知識;②應(yīng)獲得與其檢測工作內(nèi)容相適應(yīng)的培訓(xùn),具備相應(yīng)的實驗操作技能;③當(dāng)檢驗實驗室使用分析軟件、數(shù)據(jù)庫軟件或在線軟件對檢測的結(jié)果進(jìn)行檢索和處理時,檢驗報告中所含意見和解釋負(fù)責(zé)的人員必須對相關(guān)軟件性能及操作等有充分的了解[9]。所有專業(yè)技術(shù)人員應(yīng)有相關(guān)專業(yè)的教育經(jīng)歷;授權(quán)簽字人應(yīng)具有相關(guān)專業(yè)本科以上學(xué)歷,且在本專業(yè)領(lǐng)域工作5年以上或者經(jīng)評估具有同等學(xué)歷。同等學(xué)歷的規(guī)定如下:博士學(xué)位研究生畢業(yè),從事相關(guān)專業(yè)檢驗工作不低于1年;碩士學(xué)位研究生畢業(yè),從事相關(guān)專業(yè)檢驗工作不低于3年;大學(xué)本科畢業(yè),從事相關(guān)專業(yè)檢驗工作不低于5年;大學(xué)專科畢業(yè),從事相關(guān)專業(yè)檢驗工作不低于8年可視為具有同等能力。應(yīng)對工作人員定期進(jìn)行持續(xù)技能培訓(xùn)和重新確認(rèn),并提供記錄。例如,每12個月至少進(jìn)行1次技能確認(rèn),在1個認(rèn)可周期內(nèi),對主要檢測和技術(shù)管理人員的確認(rèn)內(nèi)容應(yīng)覆蓋其所從事技術(shù)工作的全部內(nèi)容。當(dāng)檢驗人員或授權(quán)簽字人的職責(zé)變更或離開崗位6個月以上再重新上崗時,應(yīng)重新予以考核確認(rèn)[1]。

        2.2 設(shè)施及環(huán)境條件

        在設(shè)施方面,食品質(zhì)量檢測實驗室內(nèi)溫度、濕度的控制應(yīng)能滿足儀器設(shè)備的正常運行和不同試驗的需求。對檢測實驗室設(shè)施的要求,是以能獲得可靠的檢驗結(jié)果為重要依據(jù)。檢測實驗室的總體布局和各分支部位排列應(yīng)減少潛在對檢測樣本的污染和對人員的危害,應(yīng)設(shè)分割開的工作區(qū)域,至少包括以下區(qū)域:①試劑儲存、準(zhǔn)備和配制區(qū);②樣品準(zhǔn)備區(qū);③核酸提取區(qū);④擴(kuò)增區(qū);⑤擴(kuò)增產(chǎn)物的分析區(qū)[10-11]。各功能區(qū)域的使用面積要能夠保證合理放置儀器設(shè)備和符合相應(yīng)檢測業(yè)務(wù)工作的需求,功能區(qū)之間實現(xiàn)有效間隔。各功能區(qū)域應(yīng)該有明確的標(biāo)識,以避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、試劑及物品等混用。如有必要,應(yīng)實現(xiàn)樣品在工作區(qū)域之間單向流動。出入各工作區(qū)域必須遵循單一的方向順序,即只能從試劑儲存及準(zhǔn)備和配制區(qū)、樣品準(zhǔn)備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)至擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),避免相互之間發(fā)生交叉污染。在不同的工作區(qū)域作業(yè)時,應(yīng)使用有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服,以防止混用。此外,當(dāng)實驗人員離開工作區(qū)域時,不得將各區(qū)域特定的工作服帶到另外區(qū)域。

        在環(huán)境條件方面,食品質(zhì)量檢測實驗室的清潔、清洗等應(yīng)按試劑儲存及準(zhǔn)備和配制區(qū)再到擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的單一方向進(jìn)行。不同的作業(yè)區(qū)域應(yīng)有其各自的清潔工具,不能混用,以防止相互間交叉污染[12]。實驗室應(yīng)有限制進(jìn)入的措施,應(yīng)控制非作業(yè)人員進(jìn)入或使用可能會影響檢驗質(zhì)量的區(qū)域。應(yīng)采取適當(dāng)?shù)姆绞奖Wo(hù)檢測樣品及環(huán)境,防止未經(jīng)授權(quán)的人員訪問。必要時,應(yīng)為進(jìn)入檢測實驗室的人員提供至少1套有效的生物安全防護(hù)工具。實驗室應(yīng)有妥善處理廢棄樣品和有害廢棄物的設(shè)施及制度,如使用某些可致基因突變和(或)有毒物質(zhì)(如甲醛、丙烯酰胺、溴化乙錠或同位素等),應(yīng)注意操作人員的安全防護(hù)。

        2.3 檢測方法及數(shù)據(jù)控制

        食品質(zhì)量檢測實驗室應(yīng)明確檢測方法的適用范圍,如有些轉(zhuǎn)基因檢測方法規(guī)定樣品只能是未加工的或者進(jìn)行了加工但未污染其他物種DNA的樣品,實驗室用此方法進(jìn)行認(rèn)可時應(yīng)該充分認(rèn)識到這些限制[13]。必要時,操作指導(dǎo)書應(yīng)規(guī)定檢測結(jié)果的判定方法、判定依據(jù)、判定結(jié)果等的表述,包括對過程產(chǎn)物的確認(rèn)要求。實驗室應(yīng)建立并實施數(shù)據(jù)保護(hù)的程序,對數(shù)據(jù)輸入或采集、數(shù)據(jù)存儲、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)移和數(shù)據(jù)處理的方法、備份方式、數(shù)量和時間、殺毒方式進(jìn)行規(guī)定,并定期核查,以確保數(shù)據(jù)的真實性、完整性、保密性和安全性。同時,實驗室應(yīng)將以圖像形式(如電泳圖)保存的數(shù)據(jù)資料納入到數(shù)據(jù)保護(hù)程序中。

        2.4 儀器和設(shè)備

        對于沒有設(shè)定檢定規(guī)程的儀器和設(shè)備,食品質(zhì)量檢測實驗室應(yīng)建立用于定期檢驗并證實該設(shè)備經(jīng)過了適當(dāng)校準(zhǔn)且處于正常功能狀態(tài)的程序和記錄,建立1套定期預(yù)防性維護(hù)程序和應(yīng)急預(yù)案[14]。該程序應(yīng)遵循儀器制造商的建議,可根據(jù)制造商的儀器設(shè)備使用說明確定維護(hù)、驗證、可接受標(biāo)準(zhǔn)、校準(zhǔn)的頻次和程序?;驍U(kuò)增檢驗實驗室每一區(qū)域都須有專用的儀器和設(shè)備,各區(qū)域儀器和設(shè)備都必須有非常明確的標(biāo)識,以避免設(shè)備物品(如試劑、吸管、微量移液器等)從其各自的區(qū)域內(nèi)移出,造成不同工作區(qū)域間的交叉污染[15]。微量移液器要定期進(jìn)行期間核查,以保證容積的準(zhǔn)確。

        2.5 測量溯源性

        基因識別結(jié)果或鑒定結(jié)果,可溯源至公認(rèn)的基因序列?;驍U(kuò)增檢測無法溯源到SI單位或與之無關(guān),要求能溯源到標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、使用規(guī)定的方法和或被有關(guān)各方接受并且描述清晰的協(xié)議標(biāo)準(zhǔn)、核酸序列,包括參加能力驗證[16]。如無可參加的能力驗證時,則盡可能參加3家以上實驗室間比對計劃?;驍U(kuò)增領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可包括目標(biāo)生物(微生物、病毒、寄生蟲、轉(zhuǎn)基因品系等)、陽性DNA參考物質(zhì)、質(zhì)?;蜉d體、公共的基因序列數(shù)據(jù)庫(如生命條碼數(shù)據(jù)系統(tǒng)(BOLD)和美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)的參考DNA序列等。檢驗過程中的陽性對照、陰性對照、對照標(biāo)本的使用和儲存,應(yīng)參照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的管理方法進(jìn)行管理[17]。

        2.6 測試和校準(zhǔn)物品的處置

        食品質(zhì)量檢測實驗室應(yīng)根據(jù)檢驗項目制定樣品的接收條件,明確提出對樣品的要求,列出不符合要求樣品的類型和拒收條件。在接收檢材或樣本時,應(yīng)對其來源、名稱、數(shù)量及性狀進(jìn)行詳細(xì)的審查,如發(fā)現(xiàn)有異常情況,或與被告知的情況或提供的說明不符時,應(yīng)及時向委托方問詢、核實,做好記錄并由委托方簽字確認(rèn)。針對物種鑒定方面,樣品的物理特性(包括外觀、氣味、紋理等)可能有助于識別樣品的物種來源,應(yīng)在DNA測試之前進(jìn)行這些檢測,且應(yīng)記錄所有相關(guān)的信息[18]。如果物理特性的分析結(jié)果與聲稱的物種不匹配,實驗室應(yīng)要求客戶說明原因。由于檢測目的不同,樣本會被分裝或轉(zhuǎn)移。因此,實驗室應(yīng)提供操作手冊及相應(yīng)程序規(guī)定過程或中間樣品的保存和使用要求,如從樣本中提取的核酸、基因擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物等中間樣品的保存和使用。

        2.7 檢測結(jié)果的質(zhì)量保證和報告

        食品質(zhì)量檢驗實驗室應(yīng)制訂質(zhì)量控制計劃,對內(nèi)部質(zhì)量控制和外部質(zhì)量控制活動的實施方式、內(nèi)容、責(zé)任人等作出明確的規(guī)定;對內(nèi)部質(zhì)量控制活動,質(zhì)量控制計劃中還應(yīng)給出結(jié)果評價依據(jù)。在1個認(rèn)可周期內(nèi),無論內(nèi)部還是外部質(zhì)量控制活動,其實施的內(nèi)容應(yīng)覆蓋到獲得認(rèn)可的全部檢測項目和所有的關(guān)鍵檢驗人員。針對樣品摻假檢測,如果檢測方法中給出了檢出限,則無論結(jié)果是“檢出”還是“未檢出”,在報告中均應(yīng)注明方法的檢出限。

        針對轉(zhuǎn)基因檢測,報告中應(yīng)詳細(xì)給出靶序列類型,如“35S啟動子:檢出”或“抗草甘膦轉(zhuǎn)基因:未檢出”或“Bt-176:未檢出”,而不應(yīng)該僅僅報告“不含轉(zhuǎn)基因成分”,后者的表述會造成所有轉(zhuǎn)基因成分都已檢測的歧義。同時,應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)要求給出空白對照、陰性對照和陽性對照等的檢測結(jié)果。如果由于提取核酸的質(zhì)量、數(shù)量不足或其他技術(shù)原因,不能得出結(jié)論,應(yīng)在報告中明確指出。應(yīng)有措施對檢測結(jié)果和檢測中獲得的信息或個人隱私保密。

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        Study on the Application of Laboratory Competence Accreditation for Food Inspection in the Field of Gene Amplification Testing

        LI Hong1,2,DENG Liuai3,HAN Ziqiang4,LI Yanmei1,*LIU Yunguo1
        (1.Xinjiang University,Urumqi,Xinjiang 830046,China;2.China National Accreditation Center for Conformity Assessment,Beijing 100062,China;3.Rizhao Food&Drugs Inspection&Testing Center,Rizhao,Shandong 276800,China;4.Pingyin Vocational Education Center,Pingyin,Shandong 250400,China)

        The testing and calibration laboratory accreditation standards include all requirements that met for food inspection laboratories to demonstrate their ability to operate and provide the correct technical results in accordance with the management system.Gene amplification refers to the detection of DNA or RNA as a method of detection.This study is applicable to the accreditation activities of food inspection laboratory in the field of gene amplification testing.The management requirements are elaborated from laboratory and personnel,management system,service performance and the technical requirements for the supplies and customer service.The technical requirements are elaborated from requirements of the personnel,facilities and environmental conditions,detection method and data control,instrument and equipment,measurement traceability,test and calibration items of disposal,and the results of the quality assurance reporting.

        gene amplification testing;testing and calibration laboratory;laboratory competence accreditation

        TS201

        A

        10.16693/j.cnki.1671-9646(X).2017.06.022

        1671-9646(2017)06a-0072-04

        2017-03-30

        新疆自治區(qū)天山學(xué)者科研啟動經(jīng)費(45030);新疆自治區(qū)高層次人才引進(jìn)工程專項經(jīng)費(201412);中國合格評定國家認(rèn)可委員會項目(J2016CNAS11)。

        李宏(1978—),女,碩士,高級工程師,研究方向為實驗室認(rèn)證認(rèn)可。

        *通訊作者:劉云國(1977—),男,博士,教授級高級工程師,研究方向為食品生物技術(shù)。

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