陳小聰

（廣西-東盟食品藥品安全檢驗檢測中心，廣西南寧530001）

動物源性食品中獸藥殘留快速檢測技術(shù)研究進展

陳小聰

（廣西-東盟食品藥品安全檢驗檢測中心，廣西南寧530001）

對動物源性食品中獸藥殘留快速檢測方法中的酶聯(lián)免疫技術(shù)、生物芯片技術(shù)、生物傳感器技術(shù)、拉曼光譜檢測技術(shù)等的研究進展進行了綜述，并對其發(fā)展前景進行了展望和建議。

動物源性食品；快速檢測；獸藥殘留

0 引言

隨著畜牧業(yè)規(guī)模化和產(chǎn)業(yè)化，為了防止群體染病事件的發(fā)生，同時為了追求利益的最大化，養(yǎng)殖過程中獸藥的使用量和使用范圍逐漸被擴大化，國家對于獸藥的安全使用有很多規(guī)定，但因為養(yǎng)殖者對法律法規(guī)及相關(guān)標準的不了解或受到利益的驅(qū)動，濫用、誤用獸藥，極易造成獸藥殘留超標。食品安全監(jiān)控體系不斷發(fā)展完善，但獸藥殘留依然是動物源性食品中安全監(jiān)管的重點和熱點。我國國家標準中獸藥殘留的檢測方法有氣相色譜法、液相色譜法、薄層色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等[1]，但是這些方法存在預處理復雜、需要配備昂貴的大型儀器、操作繁瑣、對人員素質(zhì)要求高、試驗成本高等缺點，不利于進行食品安全監(jiān)管的現(xiàn)場快速檢測；而一些快檢技術(shù)（如免疫技術(shù)、生物傳感器技術(shù)、拉曼光譜檢測技術(shù)）具有快捷、簡便、成本低等特點，被廣泛運用。對近幾年動物源性食品中獸藥殘留快速檢測技術(shù)進行綜述，重點介紹了酶聯(lián)免疫技術(shù)、生物芯片技術(shù)、生物傳感器技術(shù)、拉曼光譜檢測技術(shù)等快速檢測技術(shù)，并對快速檢測技術(shù)在食品分析領域中，尤其是動物源性食品中獸藥殘留的應用前景進行了展望。

1 免疫技術(shù)

1.1 酶聯(lián)免疫技術(shù)

酶聯(lián)免疫技術(shù)是由免疫技術(shù)與現(xiàn)代測試手段相結(jié)合而建立的一種超微量測定技術(shù)[2]，對于獸藥殘留的檢測一般采用3種競爭分析模式，即抗體包被直接競爭、抗原包被直接競爭和間接競爭[3]。Wang L等人[4]進行膠體金吸附和酶聯(lián)免疫吸附交叉試驗，這2種方法獲得良好的相關(guān)性，可以快速測試動物源食品中14種磺胺殘留。王忠斌等人[5]建立了氨基糖苷類抗生素多殘留的直接競爭ELISA分析方法，快速檢測新霉素、卡那霉素、慶大霉素、鏈霉素等獸藥中常用的氨基糖苷類抗生素。王自良等人[6]研制的苯巴比妥ELISA試劑盒，線性檢測范圍廣，達1.0～81.0 ng/mL，靈敏度高，檢測限低。王選年等人[7]研制的鹽酸克倫特羅ELISA試劑盒，線性檢測范圍為0.5～128.0 ng/mL，與腎上腺素、去甲腎上腺素、萊克多巴胺及多種抗生素均無交叉反應性。

1.2 膠體金免疫技術(shù)

膠體金免疫技術(shù)起步于20世紀70年代，具有體積較小、操作簡單、出具結(jié)果快等特點。近年來，膠體金免疫層析技術(shù)發(fā)展很快，已應用在小分子物質(zhì)的檢測上。Zhu Y等人[8]研制出檢測12種喹諾酮類藥物在雞肉和雞肝中殘留的免疫層析試紙條，在能識別氟喹諾酮藥物的單克隆抗體基礎上，成功研制出了可以同時檢測12種氟喹諾酮類藥物的膠體金快速檢測試紙條。諾氟沙星及培氟沙星在雞肉和雞肝中的檢測限為25 ng/L，恩諾沙星、環(huán)丙沙星、氟甲喹、氧氟沙星、依諾沙星、洛美沙星、達氟沙星、氨氟沙星、惡喹酸及麻保沙星在雞肉和雞肝中的檢測限達到50 μg/kg，整個過程在10 min之內(nèi)完成。劉烜等人[9]采用免疫競爭法研制出一種快速檢測喹諾酮類藥物殘留的免疫層析法，在檢測肌肉等組織樣品時，靈敏度最低值為10 ng/mL，只需3～5 min，與類似物無交叉反應。

1.3 化學發(fā)光微粒子免疫技術(shù)

化學發(fā)光微粒子免疫技術(shù)是近年來發(fā)展較快的新型檢測技術(shù)。克倫特羅也稱“瘦肉精”，快檢方法多為酶聯(lián)免疫法。牛治存等人[10]應用化學發(fā)光微粒子免疫分析技術(shù)研發(fā)克倫特羅化學發(fā)光快速檢測試劑盒，采用直接競爭CMIA方法，配合貴州勤邦食品安全科學技術(shù)有限公司研制的磁免疫全自動化學發(fā)光檢測儀，用光子計數(shù)儀測定光子計數(shù)的強度與克倫特羅藥物濃度負相關(guān)得出克倫特羅的含量。黨娟等人[11]運用化學發(fā)光微粒子免疫法對牛肝、牛肉樣品中阿維菌素類藥物殘留進行檢測，結(jié)果表明檢測靈敏度與可測范圍遠遠高于酶聯(lián)免疫法，且兼具了ELISA法的簡便操作和短時反應等性能。

2 生物芯片技術(shù)

生物芯片技術(shù)使用了微光技術(shù)，根據(jù)分子間特異性相互作用的原理，將不連續(xù)的分析過程集成于硅芯片、玻璃芯片等，進入計算機系統(tǒng)，以實現(xiàn)對細胞、蛋白質(zhì)、基因及其他生物組分的檢測[12]。分別為基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細胞芯片等，其中以蛋白芯片發(fā)展最為迅速。陳愛亮等人[13]開發(fā)了獸藥殘留蛋白芯片檢測系統(tǒng)，該系統(tǒng)可用于豬肉、豬肝、雞肉、雞肝、牛奶中磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹惡啉、磺胺甲惡唑、磺胺異惡唑、磺胺間甲氧嘧啶、鏈霉素、雙氫鏈霉素、恩諾沙星、氯霉索的定量檢測，可同時分析多種樣品的多種獸藥殘留。劉楠等人[14]以常用的氯霉素、克倫特羅、雌二醇和泰樂菌素4種獸藥為靶標物，基于間接競爭法的免疫學檢測原理，改進了常規(guī)懸浮芯片技術(shù)在微球上固定抗體的方法，根據(jù)待測靶標物靈活自由組合，同時檢出上述4種獸藥殘留靶標物，整個檢測過程僅耗時1～2 h。因生物芯片技術(shù)通量高、特異性強、靈敏快速等特點，使其在獸藥殘留的檢測領域得到更多運用者的關(guān)注。

3 生物傳感器技術(shù)

生物傳感器是由化酶或電化學或物理傳感器組成的一種能測定溶液中某種或某一類化學物質(zhì)的傳感裝置[15]。生物傳感器技術(shù)，也已經(jīng)應用于獸藥殘留的快速檢測。李瑩等人[16]利用自行研制的便攜式表面等離子體共振（SPR）生物傳感器，根據(jù)免疫反應的特異性，研究克倫特羅抗原、抗體的相互作用，分析動力學反應過程，建立標準曲線，并提出克倫特羅的連續(xù)檢測法和快速檢測法。李會芹等人[17]提出了一種新穎、無標記、快速的內(nèi)嵌式TsPRlK23生物傳感器的光學表面等離子共振（SPR）鹽酸克倫特羅測定方法，測定裝置由集成光學SPR生物傳感器、微流通池、便捷更換芯片的夾具、觸電屏，USB接口板度光電轉(zhuǎn)換電路板組成。在光學SPR芯片金膜表面固定鹽酸克倫特羅抗原，在標準樣品中分別添加鹽酸克倫特羅抗原，采用競爭免疫反應方法建立的鹽酸克倫特羅測定標準曲線，相關(guān)系數(shù)0.997，相對標準偏差6.5%。

4 拉曼光譜檢測技術(shù)

隨著光電技術(shù)的發(fā)展，拉曼技術(shù)也有長足的發(fā)展，結(jié)合納米技術(shù)，拉曼光譜技術(shù)向表面增強拉曼光譜邁進。陳蓓蓓等人[18]借助便攜式激光拉曼光譜儀和相應的納米試劑，實現(xiàn)了利用表面增強拉曼光譜技術(shù)來完成食品中多種化學物的快速檢測，并進行了定量分析，選擇的檢測項目主要涉及食品中非法添加物、食品濫用添加劑、農(nóng)獸藥殘留等，獲得了較好的檢測效果。表面增強拉曼光譜（SERS）技術(shù)基于拉曼散射效應，可將信號強度明顯提高，以高出常規(guī)拉曼技術(shù)104～107的靈敏度實現(xiàn)對痕量物質(zhì)的檢測。吳輝陽[19]采用表面增強拉曼光譜（SERS）技術(shù)對常見的獸藥殘留檢測方法進行研究與開發(fā)，對氟喹諾酮類、硝基呋喃類等獸藥具有很好的檢出效果。

5 展望

目前，能進行現(xiàn)場快速檢測獸藥殘留的快速檢測技術(shù)主要有免疫技術(shù)、生物傳感器技術(shù)、拉曼光譜檢測技術(shù)，其中酶聯(lián)免疫技術(shù)較為成熟，是國內(nèi)外獸藥殘留檢測的重要方法之一。膠體金免疫技術(shù)雖然幾分鐘能出結(jié)果，但是檢測限較高、靈敏度差，容易出現(xiàn)假陽性、假陰性。生物芯片技術(shù)檢測獸藥殘留具有通量高、特異性強、靈敏度高等特點，備受各界關(guān)注，發(fā)展迅猛。拉曼光譜技術(shù)簡單、快速、靈敏，可進行無損檢測也有一定的發(fā)展前景。其他技術(shù)（如生物傳感器等）仍是發(fā)展的方向，有著較為廣闊的前景。上述快速檢測方法雖然與大型儀器法相比檢測耗時短、成本低，但由于缺乏統(tǒng)一的快速檢測設備、耗材的生產(chǎn)標準，市場上的快速檢測產(chǎn)品質(zhì)量不一，有關(guān)權(quán)威部門應盡早制定標準化的

食品安全快速檢測產(chǎn)品復核性驗證規(guī)程，對快速檢測產(chǎn)品進行確認認可，有利于規(guī)范快速檢測產(chǎn)品的市場，更好地為食品安全監(jiān)管服務。

[1]中華人民共和國秦皇島出入境檢驗檢疫局.常用獸藥殘留量檢測方法標準選編[M].北京：中國標準出版社，2009：53.

[2]余華，嚴玉寶，謝晶，等.酶聯(lián)免疫分析技術(shù)及其在進出口動物產(chǎn)品獸藥殘留檢測中的應用[J].中國畜牧獸醫(yī)，2010，37（11）：76-79.

[3]呂珍珍，蔣小玲，劉金釧，等.免疫分析技術(shù)在獸藥殘留檢測中的應用[J].農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全，2012（b9）：76-79.

[4]Wang L，Wang S，Zhang J，et al.Enzyme-linked immunosorbent assay and colloidal gold immunoassay for sulphamethazine residues in edible animal foods:investigation of the effects of the analytical conditions and the sample matrix on assay performance[J].Analytical and Bioanalytical Chemistry，2008（6）：1 619-1 627.

[5]王忠斌，王向紅，徐蓓，等.氨基糖苷類藥物多殘留酶聯(lián)免疫分析方法的研究[J].中國食品學報，2008，8（5）：120-125.

[6]王自良，王建華，楊艷艷，等.苯巴比妥殘留快速檢測阻斷ELISA試劑盒的研制及性能測定[J].中國獸醫(yī)雜志，2006，42（4）：62-64.

[7]王選年，楊艷艷，邢廣旭，等.鹽酸克倫特羅單抗快速檢測試劑盒的研制[J].中國獸醫(yī)學報，2004，24（1）：75-78.

[8]Zhu Y，Li L，Wang Z，et al.Development of an immunochromatography strip for the rapid detection of 12 fluoroquinolones in chicken muscle and liver[J].Journal of

Advances in Application of Rapid Detection for Detection of Veterinary Drug Residues in Animal-Derived Foods

CHEN Xiaocong
（Guangxi-ASEAN Food and Drug Safety Inspection and Testing Center，Nanning，Guangxi 530001，China）

This paper focuses on the developments of rapid detection in the field of veterinary drugresidue analysis，such as enzyme linked immunosorbent assay，bio-chip technology，biosensor and Raman spectrum technology.Finally，its applications are also analyzed and put forward.

animal-derived foods；rapid detection；veterinary drug residues

S859.84

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.08.022

1671-9646（2017）08a-0070-03

2017-06-01

陳小聰（1974—），女，本科，高級工程師，研究方向為食品安全檢測。