裴勇

河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥制劑提取間，河南鄭州 450000

中藥制劑有效成分含量測定中高效液相色譜法的應(yīng)用分析

裴勇

河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥制劑提取間，河南鄭州 450000

中藥類型包括中藥成方制劑、中成藥、單味制劑等，與西藥相比，中藥制劑不良反應(yīng)小，用量少，且具有一定持久性和高效性。但中藥制劑所含成分較多，制備工藝復(fù)雜，在中藥制劑質(zhì)量控制上很難做到面面俱到，造成中藥制劑質(zhì)量良莠不齊。為保證中藥制劑質(zhì)量，該研究采用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）對中藥制劑有效成分含量測定中的應(yīng)用與發(fā)展進(jìn)行分析研究，并提出觀點，以供參考。

中藥制劑；含量測定；高效液相；色譜法

中藥制劑質(zhì)量檢測中，一般將具有生理活性的化學(xué)成分作為控制標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量評價，以衡量產(chǎn)品是否穩(wěn)定、質(zhì)量是否達(dá)標(biāo)等。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一種具有分析速度快、檢測靈敏度高、分離效率高、應(yīng)用范圍廣、操作方便、重現(xiàn)性高等諸多特點的成分含量測定方法，可用于分析樣品沸點、大分子量有效成分、熱不穩(wěn)定性等，已成為目前控制中藥制劑有效成分的重要手段。該研究對HPLC法在中藥制劑中藥苷類、萜類、黃酮類、生物堿類、醌類、木脂素類、香豆素類、有機酸類等8種有效成分含量測定應(yīng)用進(jìn)行介紹。

1 中藥苷類成分含量測定

苷類在是天然藥物研究中不可忽視的一類成分，其廣泛分布于中藥界，生理活性多樣，結(jié)構(gòu)不一，國內(nèi)外均有對采用HPLC法測定中藥苷類成分含量的文獻(xiàn)報道[1]。高廣慧等[2]采用HPLC法對中芍藥苷含量進(jìn)行測定，將提取與分離工藝優(yōu)化，有效分離芍藥苷成分，方法準(zhǔn)確可靠，能夠較好控制中成藥、中藥材中芍藥苷質(zhì)量。蘇曉楠等[3]通過HPLC法，快速、準(zhǔn)確測定了芒果苷、新芒果苷及知母皂苷成分的含量，為中藥材質(zhì)量控制的全面性奠定了堅實基礎(chǔ)。陳華等[4]用HPLC法測定黃芩苷含量，通過精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率試驗及樣品含量測定，結(jié)果顯示樣品分離度及重現(xiàn)性好，峰型佳，無雜質(zhì)峰干擾，保留時間穩(wěn)定，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均符合標(biāo)準(zhǔn)。

2 萜類成分含量測定

萜類成分結(jié)構(gòu)復(fù)雜、種類繁多、生理活性多種多樣，采用HPLC法可檢測出一些萜類成分含量，有學(xué)者對銀杏葉提取物萜類內(nèi)酯（倍半萜內(nèi)酯和二萜內(nèi)酯）含量進(jìn)行測定[5]，倍半萜內(nèi)酯包括白果內(nèi)脂，二萜內(nèi)酯包括銀杏內(nèi)酯A、B、C等，結(jié)果顯示，以對照品峰濃度為橫坐標(biāo)、面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)＞0.99，適用于含量測定，且白果內(nèi)酯平均RSD值0.72%，平均回收率101.35%，銀杏內(nèi)酯 A、B、CRSD 值分別為 1.86%、1.52%、1.40%，平均回收率99.35%、101.21%、101.22%，表明該定量分析方法精密度和重復(fù)性良好，可廣泛應(yīng)用于萜類成分測定。

3 黃酮類成分含量測定

黃酮類化合物多與糖類結(jié)合組成各種黃銅苷類，其易溶于水、甲醇、乙醇等極性強的溶劑，抗氧化作用強，可阻止細(xì)胞衰老、退化以及癌癥發(fā)生。采用HPLC法測定具有較高靈敏度，馮秀麗等[6]研究者利用HPLC法測定猴耳環(huán)藥材中黃酮類含量，結(jié)果顯示峰面積與成分質(zhì)量濃度在測定范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，平均RSD值0.36%～1.20%，平均回收率99.91%～100.98%，表明HPLC法簡單、準(zhǔn)確、分離度高、靈敏度佳，可作為一種有效測定黃酮類成分含量的方法。

4 生物堿類成分含量測定

生物堿是中草藥有效成分之一，具有顯著的生物活性和光學(xué)活性。生物堿呈環(huán)狀結(jié)構(gòu)，可與酸形成鹽，因其存在形式不同（可分為成鹽型與游離型），堿性強弱也有一定差異。應(yīng)用HPLC法可精準(zhǔn)測定生物堿成分含量，經(jīng)相關(guān)研究證實[7]，采用HPLC法測定元胡藥材中5種生物堿（紫堇堿、四氫小柴堿、延胡索乙素、原阿片堿、脫氫海罌粟堿）含量準(zhǔn)確，RSD（n=7）均在 1.6%～2.8%以內(nèi)，精密度及穩(wěn)定性良好，平均回收率在95.10%～97.20%之間，測定結(jié)果可靠、操作方法簡便可行，重現(xiàn)性與分離度較好，可作為元胡類藥材的質(zhì)量控制。

5 醌類成分含量測定

醌類化合物廣泛分布于植物中，如蓼科的大黃、虎杖、何首烏，豆科的決明子、番瀉葉，百合科的蘆薈等，具有致瀉、抗菌、止血等多種功效，菲醌、蒽醌及萘醌類單體成分在可見光、紫外光下均有較強吸收作用，采用HPLC測定具有準(zhǔn)確、快速、靈敏、高效等特點，中藥成分研究應(yīng)用廣泛。葛素囡等在紫草及其毛狀根萘醌類化合物測定中采用HPLC-ESI-MS/MS法的結(jié)果表明[8]，該方法可作為中藥活性成分測定的有效有段。霍金海等[9]對不同時期北青龍衣中38種萘醌類化合物成分進(jìn)行測定后發(fā)現(xiàn)，采用HPLC法能夠準(zhǔn)確監(jiān)測出北青龍衣萘醌類化合物隨采收時間變化其含量呈逐漸下降趨勢，以0.1%甲酸乙腈-甲酸水體系所得的色譜峰形良好，色譜峰穩(wěn)定且信息較多，分離效果佳，專屬性強，可有效縮短分析時間，適宜醌類成分含量測定。

6 木脂素類成分含量測定

木脂素類多分布于裸子植物與被子植物中，生物活性多種，是由二分子苯丙素衍生物聚合形成的化合物，對多種木脂素類有效成分含量均可采用HPLC法測定，如厚樸酚、連翹苷、牛蒡子苷、五味子素類等，汪麗君等[10]研究者應(yīng)用HPLC法已成功測定五味子中8個木脂素類有效成分（五味子醇乙、五味子醇甲、五味子酯甲、戈米辛 G、戈米辛 J、五味子乙素、五味子甲素、和五味子丙素），各成分均顯示出良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率（n=9）在98.9%～102.6%之間，不同時間峰面積RSD在1.5%～2.6%之間，試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定，在不同試驗條件下其重現(xiàn)性均較好，木脂素類含量采用HPLC法測定簡單可行，對制劑質(zhì)量控制參考價值較高。

7 香豆素類成分含量測定

香豆素類主要由酪氨酸衍生而來，屬于天然藥物生理活性成分，為測定蛇床子中香豆素類成分含量，李義敏等[11]采用高效液相色譜儀對蛇床子3種香豆素成分（歐芹屬素乙、蛇床子素、佛手柑內(nèi)酯）含量進(jìn)行測定，HPLC法進(jìn)行純度檢測質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98%以上，其質(zhì)量濃度分別為 0.005 1～0.102 6 mg/mL、0.051 3～1.025 mg/mL、0.005 7～0.114 8 mg/mL，其與峰面積線性關(guān)系良好，加樣回收率102.85%、101.39%、97.12%，穩(wěn)定性試驗中測得RSD分別為1.55%、1.50%、1.04%，表明其在24 h內(nèi)具有良好穩(wěn)定性，重復(fù)性試驗測得RSD為0.41%、1.31%、1.27%，說明重復(fù)性良好，采用HPLC法測定香豆素類含量穩(wěn)定、準(zhǔn)確，可為評價不同產(chǎn)地蛇床子質(zhì)量提供依據(jù)。

8 有機酸類成分含量測定

有機酸指的是具有酸性的有機化合物，在中草藥根、葉以及果實中分布廣泛，如覆盆子、五味子等，一般與鈉、鉀、鈣、生物堿類等結(jié)合成鹽，也可以游離狀態(tài)存在，已有試驗采用HPLC法成功測定有機酸含量，任曉蕾等[12]采用HPLC法測定了短瓣金蓮花藜蘆酸的含量，短瓣金蓮花富含有機酸和黃酮化合物，且與其生物活性有一定相關(guān)性，通過采用2010型高效液相色譜儀，將冰醋酸、乙腈作為色譜純，使被測物質(zhì)鋒行對稱，藜蘆酸平均回收率為100.72%，RSD為0.93%，平均含量1.089 mg/g，明確乙腈-1%冰醋酸溶液等度洗脫可使藜蘆酸成分獲得良好的分離效果，響應(yīng)值高且峰型好，基線平穩(wěn)，可作為短瓣金蓮花質(zhì)量控制指標(biāo)之一。

綜上所述，HPLC法以其高速、高效、高分辨率等技術(shù)優(yōu)勢在中藥成分含量測定中的作用日益顯現(xiàn)，已逐漸成為中藥檢驗的重要分析手段。該研究相信，隨著HPLC技術(shù)不斷更新與改進(jìn)，必將推動中藥檢驗研究邁向一個嶄新階段。

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[11]李義敏,張巧艷,秦路平,等.HPLC法測定蛇床子中3種香豆素類成分的含量[J].中藥材,2015,38(7):1441-1443.

[12]任曉蕾,霍金海,魏文峰,等.HPLC同時測定短瓣金蓮花中4種成分含量[J].中藥材,2015,38(6):1220-1222.

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1672-5654（2017）08（a）-0046-02

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10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.22.046

裴勇（1971-），男，河南鄭州人，本科，主管中藥師，研究方向：中藥制劑提取。