胡麗楠 門璐 姜立坤

適用于評定水痘活疫苗免疫反應(yīng)的抗體檢測法

胡麗楠 門璐 姜立坤

目的 評定水痘活疫苗免疫反應(yīng)的抗體檢測方法。方法 選擇2016年某一地區(qū)監(jiān)測報告水痘患者，為其接種水痘減毒活疫苗。分別用膜抗原免疫熒光抗體檢測試驗(yàn)（FAMA）和ELISA等對患者的血清進(jìn)行檢測。結(jié)果 ELISA方法特異性好，但市售試劑敏感性較差，F(xiàn)AMA方法雖然繁瑣，但因其較高的敏感性和特異性，更適合于疫苗免疫后的血清學(xué)評價。結(jié)論 水痘病毒IgG抗體的檢測在篩選VZV易感人群、判斷個體免疫狀況、水痘疫苗免疫效果的評價以及免疫策略的研究、臨床診斷等方面均具有重要意義。

水痘活疫苗；免疫反應(yīng)；抗體檢測方法

水痘作為一種帶狀皰疹病毒（VSV），最早被發(fā)現(xiàn)于1948年，是全世界性的高接觸性傳染病毒，VSV是一種包膜病毒，通過侵染呼吸道黏膜或淋巴系統(tǒng)，并通過內(nèi)分泌循環(huán)的方式感染皮膚，從而誘發(fā)水痘，而水痘活疫苗是廣泛應(yīng)用于青少年臨床使用以便于防治VSV感染的臨床免疫手段，這是由于水痘活疫苗既誘導(dǎo)體液免疫又誘導(dǎo)細(xì)胞免疫，根據(jù)病毒的復(fù)制性而研發(fā)的一種高效的、長期免疫方法，同時接種活疫苗的人群體內(nèi)免疫抗體水平有一定的變化，通過這些變化可以準(zhǔn)確的了解接種人群的情況，因此，需要確定適用于評定水痘活疫苗免疫反應(yīng)的抗體檢測方法[1]。

1 資料及方法

1.1 一般資料

選取本院于2015年4月- 2016年4月來本院進(jìn)行水痘活疫苗接種的60例患者作為研究對象，并將這60例研究對象分為A、B、C三組，其中A組20例，男10例，女10例，平均年齡為（9.0±2.5）歲；B組患者20例，其中男12例，女8例，平均年齡為（8.7±2.3）歲；C組患者20例，男11例，女9例，平均年齡為（9.5±1.8）歲，所有接種人群在接種活疫苗前均已進(jìn)行過常規(guī)檢查，所有患者均無過敏現(xiàn)象。3組患者年齡、性別等一般臨床資料對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 研究方法

將這60例患者均接種統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的水痘活疫苗，將這60例患者的血清分為三組A、B、C，并將所有待檢測的血清進(jìn)行處理[2]。

A組血清采取用全VZV抗原作酶聯(lián)免疫吸附測定（VARELISA），其中抗原為經(jīng)超聲波處理的MRG-S細(xì)胞的溶解物上清液，并與為感染的MRG-S細(xì)胞的溶解上清液的抗體水平進(jìn)行對比，將處理過的A組血清蛋白分別與對照孔以及VZV抗原反應(yīng)，檢測待檢血清的吸光值的增值（△A）及VZV抗原的平均光密度值，如△A超出限定曲線，則重新調(diào)整血清蛋白的稀釋度。

B組血清采取糖蛋白抗原ELISA（gpELISA）的抗體檢測方法進(jìn)行檢測，分析純化VZV感染細(xì)胞的提取物得到的糖蛋白（gP）為抗原，將糖蛋白進(jìn)行不同比例的稀釋，并與已知VZV陽性血清以及硬性血清進(jìn)行反應(yīng)，從而探究gPELISA對抗體檢測的靈敏性[3]。

C組血清采取增強(qiáng)中和檢測法（ENt）檢測抗體的水平，并將得到的抗體檢測結(jié)果進(jìn)行分析。此法采取補(bǔ)體與抗IgG參與而獲得高敏感的抗體檢測措施，利用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)藥劑對C組血清進(jìn)行處理，并與MRG-S血清進(jìn)行反應(yīng)，分析檢測結(jié)果，從而得出Ent的檢測靈敏性[4]。

1.3 評定標(biāo)準(zhǔn)

所有的靶均是感染的MRG-S細(xì)胞的上清液，以為感染的MRG-S細(xì)胞作為陰性對比，人體血清作為陽性對比，熒光范圍為0～4，檢測的血清強(qiáng)度至少大于2，才能判定為抗VZV陽性，血清對照細(xì)胞無反應(yīng)。

2 結(jié)果

通過臨床診斷結(jié)合之病例可以確診60例患者的情況，分別利用gpELISA、ENT以及VARELISA三種方法進(jìn)行檢測的血清蛋白中，根據(jù)所繪曲線及各檢測系統(tǒng)的陽性判斷指標(biāo)可知gpELISA以及Ent的靈敏度相對較高，其中三種方法檢測陽性率的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，因此結(jié)果具有一定的臨床意義。

3 討論

水痘主要是VZV病原體，VZV作為一種包膜病毒，通過體液循環(huán)作用于皮膚表面，進(jìn)而誘發(fā)水痘，而作為急性病毒性傳染病的水痘屬于全球性接觸性高感染疾病，20歲以下的青少年極易感染水痘，而多數(shù)患者在幼齡時感染過VZV的患者終身免疫，但是當(dāng)潛伏于神經(jīng)細(xì)胞中的VZV再次激活時，便會產(chǎn)生HZ病毒，二次感染多發(fā)生在成年人中，發(fā)病率隨年齡的增高而增長，且相對于水痘，HZ不易治愈，易引發(fā)并發(fā)癥，致患者死亡。VZV檢測的方法眾多，相應(yīng)的活疫苗種類眾多，包括傳統(tǒng)水痘疫苗、帶狀皰疹疫苗、亞單位疫苗以及DNA疫苗等，而由于VZV的危害性，高效率、高靈敏的檢測VZV病毒是十分重要的，重要使通過檢測患者的抗體水平，從而分析患者的VZV病毒感染與否，因此研究適用于評定水痘活疫苗免疫反應(yīng)的抗體檢測方法具有十分重要的臨床價值[5-8]。

綜上所述，水痘作為一項(xiàng)全球性高接觸性傳染性疾病，如何檢測以及如何防治具有十分重要社會意義以及臨床價值，本文選取了全VZV抗原作酶聯(lián)免疫吸附測定（VARELISA），糖蛋白抗原ELISA（gpELISA），增強(qiáng)中和檢測法（ENt）三種方法檢測相應(yīng)的抗體水平，從而探討患者的VZV感染情況以及相應(yīng)的抗體檢測水平。

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Antibody Detection Method for Assessing the Immune Response of Varicella Live Vaccine

HU Li'nan MEN Lu JIANG Likun Heilongjiang Provincial Center for Disease Control and Prevention of Harbin City, Harbin Heilongjiang 150056, China

Objective To evaluate the chickenpox vaccine immune response antibody detection methods. Methods Choose an area of 2016 monitoring report varicella patients, for their vaccination of live attenuated varicella vaccine. With membrane antigen immunofuorescence antibody test (FAMA) and ELISA to test the patient's serum. Results The specificity of ELISA method is good, but the commercial reagent sensitivity is poorer, FAMA method although trival, but because of its high sensitivity and specifcity, more suitable for vaccine after serological evaluation. Conclusion The chicken pox virus IgG antibody detection in the screening of susceptible VZV, judge the individual immune status, varicella vaccine immune effect evaluation and strategy research, clinical diagnosis is of great signifcance.

varicella vaccine; immune response; antibody detection method

R186

A

1674-9316（2017）02-0121-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．02．076

黑龍江省哈爾濱市疾病預(yù)防控制中心，黑龍江 哈爾濱 150056

姜立坤，E-mail：hunannan1983@126．com