趙東鯤+包長(zhǎng)龍

【摘 要】 目的：測(cè)定額力根一號(hào)中羥基紅花黃色素A的含量。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26∶2∶72），檢測(cè)波長(zhǎng)為403nm，流速為1.0mL/min。結(jié)果：羥基紅花黃色素A在0.3762～3.7620μg（r=0.99991）范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。羥基紅花黃色素A平均加樣回收率為97.3%。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、靈敏，可用于制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 額力根一號(hào)；羥基紅花黃色素A；HPLC

【中圖分類(lèi)號(hào)】R914.4 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2016）24-0018-03

Abstract：Objective HPLC determination of hydroxysafflor yellow A in eligen Ⅰ.Methods The HPLC method was used.Octadecyl silane bonded silica gel as a filler ，The mobile phase was a mixture of methanol-acetonitrile-0.7% aqueous phosphoric acid（26∶[KG-*3/5]2∶[KG-*3/5]72） at a flow rate of 1.0mL·min-1 ，and the detecting wavelength was at 403 nm.Results The linear range of hydroxysafflor yellow A was 0.3762～3.7620μg（r=0.99991） and the average recovery rate was 97.3%.Conclusion The method is simple，rapid and accurate.It could be used for the quality control of eligen Ⅰ.

Keywords：Eligen Ⅰ；Hydroxysafflor Yellow A； HPLC

額力根一號(hào)（肝一號(hào)）是由丹參、鱉甲、黃芪、黨參、當(dāng)歸、三七、柴胡、紅花、枸杞子、北豆根、赤芍、青篙、阿膠、拳參、生地十五味藥組成的復(fù)方制劑，主要治療肝腫大、肝膿腫、肝癌、肝硬化以及酒精引起的胃酸過(guò)多等。額力根一號(hào)方中的主要成分紅花有活血通經(jīng)、祛瘀止痛的功效。而羥基紅花黃色素A為紅花的水溶性成分，具有抑制血小板聚集、抗氧化、抗炎等多種藥理活性[1]，本文采用方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的HPLC法來(lái)測(cè)定額力根一號(hào)中羥基紅花黃色素A的含量，實(shí)現(xiàn)對(duì)額力根一號(hào)的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10AT，SPD-10Avp，SIL-HTA，CLASS-VP。

1.2 試藥 羥基紅花黃色素A（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用。批號(hào)：111637—200503）；額力根一號(hào)（批號(hào)：090525、090603、090326由內(nèi)蒙古通遼市庫(kù)倫旗蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室提供）。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26∶2∶72），柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為403nm，流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量10μL。理論板數(shù)：按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 稱(chēng)取羥基紅花黃色素A對(duì)照品13mg，精密稱(chēng)定，置100mL量瓶中，加25%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（制成每1mL含0.13mg的溶液）。

2.3 供試品溶液的制備 取額力根一號(hào)粉末（過(guò)三號(hào)篩）約6.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）40min，放冷，再稱(chēng)定重量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得額力根一號(hào)樣品溶液。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按照額力根一號(hào)處方制成陰性對(duì)照溶液（不含紅花）。

2.5 干擾實(shí)驗(yàn) 取三種溶液（對(duì)照品、陰性及額力根一號(hào)溶液）各10μL分別進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果可見(jiàn)：額力根一號(hào)配方中沒(méi)有對(duì)羥基紅花黃色素A產(chǎn)生干擾的成分，色譜圖見(jiàn)圖1～3。

2.6 線性試驗(yàn) 分別取2、4、8、12、15和20μL對(duì)照品溶液（羥基紅花黃色素A），進(jìn)樣。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。羥基紅花黃色素A在0.3762～3.7620μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：Y=1.0476×106X-3.7547×104 ，r=0.99991。

2.7 精密度試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下的羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定羥基紅花黃色素A峰面積，結(jié)果羥基紅花黃色素A峰面積的RSD（n=6）為1.10%。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 在上述色譜條件下，分析測(cè)定由同一批額力根一號(hào)樣品制備的6份供試品溶液。結(jié)果羥基紅花黃色素A含量的平均值（n=6）為0.973 mg·g-1，RSD為0.20%。見(jiàn)表1。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一額力根一號(hào)供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12，18，30h按上述色譜條件測(cè)定。測(cè)得羥基紅花黃色素A的平均峰面積為1307572，RSD（n=6）為1.30%。結(jié)果表明額力根一號(hào)供試品溶液在室溫條件下放置30h依然穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的樣品額力根一號(hào)約3.0g，共9份，分別添加羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液適量，按上述方法測(cè)定含量后計(jì)算回收率。結(jié)果如下表。羥基紅花黃色素A平均回收率（n=9）為97.3%。

2.11 樣品測(cè)定 取額力根一號(hào)，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，記錄色譜峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

3.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 配制一定濃度的羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液，分別在210～600nm波長(zhǎng)內(nèi)進(jìn)行全掃描，羥基紅花黃色素A在403nm處有較強(qiáng)的紫外吸收。實(shí)驗(yàn)選擇403nm進(jìn)行測(cè)得。

3.2 提取溶劑的選擇 據(jù)文獻(xiàn)[2]，藥材紅花的羥基紅花黃色素A含量測(cè)定方法中，選用25%甲醇作為提取溶劑，超聲提取40min，故本研究也采用25%甲醇作為提取溶劑，超聲提取40min。

3.3 定量方法的建立 本研究建立了一種準(zhǔn)確可靠、專(zhuān)屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)單快捷的定量方法，通過(guò)對(duì)羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定，達(dá)到控制額力根一號(hào)制劑質(zhì)量的目的。

參考文獻(xiàn)

[1]劉永剛，李芳君，湯芳.羥基紅花黃色素A對(duì)大鼠心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[M].中國(guó)藥理與臨床，2015，31（1）：71-73.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：151.

（編輯：梁志慶）