劉然 王東興 張克祿 呂明明

1（國家輕工業(yè)食品質(zhì)量監(jiān)督檢測天津站，天津300462）2（天津量信檢驗認(rèn)證技術(shù)有限公司，天津30046）

快速分離檢測嬰幼兒配方奶粉中水溶性B族維生素

劉然1,2*王東興1,2張克祿1,2呂明明1,2

1（國家輕工業(yè)食品質(zhì)量監(jiān)督檢測天津站，天津300462）2（天津量信檢驗認(rèn)證技術(shù)有限公司，天津30046）

B族維生素是維持人體正常機(jī)能與代謝活動不可或缺的水溶性維生素，人體無法自行制造合成，必須額外補充。由于嬰兒攝入食品有限，必須通過奶粉來獲取相應(yīng)的營養(yǎng)，因此對嬰兒配方奶粉的監(jiān)管需要高速準(zhǔn)確的方法來進(jìn)行檢測。嬰兒配方奶粉中B族維生素含量相對偏低，尤其是B12，一般在30 μg/kg以下，而且只能利用微生物方法進(jìn)行測定。該方法相對復(fù)雜，線性范圍偏小，對稀釋倍數(shù)要求嚴(yán)格，檢驗周期長，失敗率相對較高。因此，建立嬰幼兒兒配方奶粉中水溶性B族維生素的快速分離檢測方法有重要意義。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

H-class TQD液相串聯(lián)質(zhì)譜，WATERS公司；KQ3200DV超聲波清洗器，昆山舒美公司；漩渦振蕩器，大龍公司；高速離心機(jī)，sigma公司；CP224S賽多利斯萬分之一天平。

VB1、煙酸、煙酰胺、VB6、VB5、VB9、VB12，VB2標(biāo)準(zhǔn)品，德國Dr.Ehrenstorfer；實驗室用水，Milli-Q Academic制備；甲醇，Oceanpak色譜純；甲酸，DIKMA色譜純。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：分別精確稱取一定量VB1、煙酸、煙酰胺、VB6、VB5、VB9、VB12、VB2，充分溶解后移入棕色容量瓶中，純水定容至100 mL，冷凍保存，工作液為純水稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2 色譜條件

流動相：A：0.1%甲酸水B：0.1%甲酸甲醇；色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C182.1 mm×100 mm，1.7 μm；柱溫：40℃；自動進(jìn)樣器溫度：10℃；運行時間：6.5 min。

表1 梯度洗脫

1.3 質(zhì)譜條件

毛細(xì)管電壓：3.0 kV；錐孔電壓：30 V；脫溶劑氣溫度：350℃；脫溶劑氣流速：700 L/Hr；反吹氣流速：50 L/Hr。

表2 質(zhì)譜參數(shù)

1.4 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取5 g奶粉加入60 mL0.1 mol/L鹽酸中，充分混勻后用棉花塞和牛皮紙封口，放入高壓滅菌鍋內(nèi)，在121℃下滅菌30 min，待冷卻至40℃以下后取出，輕搖數(shù)次；用2.0 mol/L乙酸鈉溶液調(diào)pH值至4.0，加入2.0 mL木瓜蛋白酶及淀粉酶酶液，搖勻后，置于37℃培養(yǎng)箱中過夜；將酶解液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，濾紙過濾，取濾液13 000 r/min離心3 min，過孔徑0.22 μm濾膜。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜的選擇

水溶性B族維生素VB1、煙酸、煙酰胺、VB6保留效果差，以95%甲酸水為起始流動相，出峰過快，不能進(jìn)行有效的分離，信號差，峰型拖尾，通過前期摸索試驗，選取99%甲酸水為起始流動相。

出峰順序：VB1、煙酸、煙酰胺、VB6、VB5、VB9、 VB12、VB2。8種水溶性維生素總離子流圖見圖1。

圖1 8種水溶性維生素總離子流圖

2.2 方法線性范圍及檢出限

在1.5 μg/L～2 300 μg/L之間，8種維生素具有良好的線性關(guān)系，結(jié)果見表3。以信噪比S/N=3確定方法檢出限，范圍在0.014 μg/L～0.23 μg/L。

表3 線性方程、范圍及檢出限

2.3 樣品前處理及結(jié)果

對于樣品前處理，分別采用酸提取法、水浸提法、流動相溶解以及酶解法來進(jìn)行，分別與國標(biāo)方法進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)酶解法與國標(biāo)方法結(jié)果十分接近。采用酶解法進(jìn)行樣品空白加標(biāo)，進(jìn)行三水平加標(biāo)六平行試驗測算回收率，結(jié)果見下頁表4。

3 結(jié)論

利用LC-MS/MS檢測嬰幼兒配方奶粉中B族維生素的方法與國標(biāo)方法比較相對簡便，操作性更強(qiáng)，具有較低的檢出限，同時具有相對較大的線性范圍，回收率范圍為80.8%～102.3%，具有良好的穩(wěn)定性，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差＜10%，該方法可以快速檢測嬰兒配方奶粉中B族維生素。

［1］夏靜，俞婧，孫磊，等.功能性飲料中9種水溶性維生素的HPLC－MS－MS同步檢測技術(shù)［J］.食品科學(xué)，2014，35（12）:196-199.

［2］鄭林，錢波林.嬰兒奶粉技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀［J］.食品研究與開發(fā)，2003，24（6）:14-16.

［3］中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 5413.11—2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中維生素B1的測定［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010：1-4.

［4］魯杰，揚大進(jìn)，王竹天.維生素B12化學(xué)分析法研究概況［J］.中國食品衛(wèi)生雜志，2003，15（3）:248-252.

［5］魯盛靜，田野.嬰幼兒食品和乳制品中維生素B12測定的探討［J］.中國乳品工業(yè)，2013，41（2）:50-52.

Quick separation and detection ofwater soluble B vitam ins in infant formula m ilk powder

LIURan1,2*WANGDongxing1,2ZHANGKelu1,2LVMingming1,2

1（Tianjin unit ofnational light industrial food quality supervision and inspection，Tianjin 300462，China）

2（Tianjin Liang-Xin testing&fertification technology Co.,Ltd，Tianjin 300462，China）

采用WATERS XEVO TQD三重四級桿質(zhì)譜儀，建立嬰幼兒配方奶粉中VB1、VB2、VB3、VB5、VB6、VB9、VB12、煙酰胺的檢測方法。經(jīng)過梯度洗脫，所有化合物在6.5 min內(nèi)洗脫出來，且具有良好的線性范圍及回收率。

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；B族維生素；嬰幼兒配方奶粉

Amethod was established for determination of VB1、VB2、VB3、VB5、VB6、VB9、VB12and nicotinamide in infant formula by WATERS XEVO TQD LC-MS/MS.All of the compound were separated in 6.5 minutes,and had a good linear range and recovery.

liquid chromatography-tandem mass spectrometry（LC-MS/MS）；B vitamins；infant formula

TS252.7

A

1673-6044（2016）04-0053-02

10.3969/j.issn.1673-6044.2016.04.014

*劉然，女，1975年出生，2010年畢業(yè)于天津科技大學(xué)食品工程專業(yè)，碩士研究生，高級工程師。

2016-09-30