蒙 堅, 黃 熙,楊鳳元

桂林醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院皮膚科(桂林541001)

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退白顆粒與NB-UVB對白癜風(fēng)患者IL-6、CD4+、Th17影響研究*

蒙 堅, 黃 熙,楊鳳元

桂林醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院皮膚科(桂林541001)

目的：分析退白顆粒與窄譜中波紫外線(Narrow band ultraviolet B，NB-UVB)對白癜風(fēng)患者IL-6、CD4+、Th17等調(diào)節(jié)作用。方法：將110例白癜風(fēng)患者，按照隨機(jī)原則將其均分為觀察組和對照組，另以50例健康者做為健康組。觀察組給予退白顆?？诜?lián)合NB-UVB照射治療，對照組給予NB-UVB照射治療，觀察兩組的臨床療效。結(jié)果：觀察組的臨床有效率83.64%顯著高于對照組56.37%，P<0.05。治療后，觀察組IL-6水平、CD8+、Th17細(xì)胞的百分比顯著低于對照組，TGF-β水平、CD4+細(xì)胞的百分比及CD4+/CD8+顯著高于對照組。觀察組不良反應(yīng)發(fā)生率12.72%與對照組10.91% 差異不顯著。結(jié)論：退白顆粒聯(lián)合NB-UVB治療白癜風(fēng)患者，可以調(diào)節(jié)外周血免疫細(xì)胞，影響細(xì)胞因子表達(dá)，提高患者的免疫功能，發(fā)揮較好的治療作用，值得臨床應(yīng)用。

白癜風(fēng)是臨床上常見的一種后天性進(jìn)展性色素脫失性皮膚病，由于皮膚表皮黑素細(xì)胞被破壞、功能消失而產(chǎn)生的皮膚黏膜白斑，隨著病情的進(jìn)展會造成毛發(fā)的色素脫失；病理學(xué)檢查可見皮損區(qū)表皮、毛囊部黑色素細(xì)胞及黑色素顆粒缺失[1-2]。近年來，越來越多的中藥制劑被用于皮膚病及自身免疫性疾病的治療，且有較好的臨床療效，因此中西醫(yī)結(jié)合治療越來越受到白癜風(fēng)患者的歡迎。本研究運用退白顆粒聯(lián)合NB-UVB治療白癜風(fēng)患者，對上述相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行分析，報告如下。

資料與方法

1 一般資料 選取2012年10月至2015年10月在我院皮膚科就診的白癜風(fēng)患者110例，隨機(jī)均分為觀察組：55例，其中男21例，女34例，平均年齡(28.5±6.3)歲；病程4月～5年，平均病程(2.9±2.8)年；局限型16例，節(jié)段型12例，肢端型11例，散發(fā)型16例；皮損面積8～240cm2，平均(67.4±18.2)cm2；進(jìn)展期31例，穩(wěn)定期24例。對照組：55例，其中男23例，女32例，平均年齡(26.9±7.4)歲；病程6月～4.5年，平均病程(3.1±2.5)年；局限型17例，節(jié)段型15例，肢端型11例，散發(fā)型12例；皮損面積6～260cm2，平均(69.1±20.4)cm2；進(jìn)展期29例，穩(wěn)定期26例。兩組患者在年齡、性別、病程、皮損面積、病期等方面的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。此外，另外選取50例來我院體檢中心體檢的健康人做為健康組，其中男30例，女20例，年齡16～67歲，平均年齡(29.1±5.7)歲。三組年齡、性別之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。本研究經(jīng)過我院中心醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)與認(rèn)可，且所有入選患者均簽署知情同意書。

2 研究方法 藥物、主要試劑及儀器:藥物：退白顆粒：主要藥物成分有：白蒺藜30 g，白芷、何首烏、補(bǔ)骨脂、雞血藤、菟絲子各15 g，當(dāng)歸、黃芪、丹參、紅花、烏梢蛇、陳皮、黑豆衣各10 g。

2.1 儀器及試劑:流式細(xì)胞儀，型號FACS Calibur ，美國BD公司生產(chǎn)；系統(tǒng)光療儀，型號UV100L，徳國Waldmann公司生產(chǎn)；日光紫外線模擬器，型號SUV-1000，上海Sigma公司生產(chǎn)；酶標(biāo)儀，型號anthos201O型，奧地利產(chǎn)；白癜風(fēng)表皮分離儀，型號BY-II型，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠生產(chǎn)；高速離心機(jī)，型號TGL-168，上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)。人IL-6ELISA試劑盒,上海西唐生物科技有限公司生產(chǎn)。

2.2 治療方法:觀察組給予退白顆粒口服聯(lián)合NB-UVB照射治療。退白顆粒服用方法：加水200 ml沖服，早晚各100 ml。NB-UVB照射治療：用系統(tǒng)光療儀照射患處，NB-UVB波長為311 nm，初始劑量為0.4～0.6J/ cm2，其中面部0.4 J/cm2，軀干0.5 J/cm2，四肢0.6 J/cm2；以后每次劑量增加10%～20%，直到患者出現(xiàn)皮膚紅斑反應(yīng)后，按照該劑量維持治療；每周3次；照射時應(yīng)該對眼睛、外生殖器及正常的皮膚進(jìn)行必要防護(hù)。對照組：僅給予NB-UVB照射，照射方法及時間同觀察組。兩組患者的治療時間均為3個月。

2.3 標(biāo)本采集:分別抽取治療前、后兩組患者及健康對照者清晨空腹外周血5 ml,每次采集的樣本均分為兩份，一份以3000次/min離心15 min后取血清用于細(xì)胞因子測定， 一份用于流式細(xì)胞儀分析。

3 觀察指標(biāo) 觀察兩組患者的臨床療效，療效評定標(biāo)準(zhǔn)[3]：無效：白斑縮小的面積很小或無變化，皮損處恢復(fù)正常膚色的面積占原有皮損面積的比值<10%；好轉(zhuǎn)：白斑部分消退或縮小的面積較大，皮損處恢復(fù)正常膚色的面積占原有皮損面積的10%～49%；顯效：白斑大部分消退，皮損處恢復(fù)正常膚色的面積占原有皮損面積的比值>50%；痊愈：白斑完全消退，皮損處恢復(fù)正常膚色的面積占原有皮損面積的比值≥50%。臨床有效率=(顯效例數(shù)+痊愈例數(shù))/總例數(shù)×100%。

觀察患者外周血中IL-6、TGF-β的含量，采用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒測定IL-6、TGF-β的含量。

觀察患者治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群的檢測結(jié)果：運用流式細(xì)胞儀，按照試劑盒上的操作要求檢測兩組患者的CD4+、CD8+、Th17細(xì)胞的百分比，然后利用功能軟件計算CD4+/CD8+T細(xì)胞比值。

由于光療法照射時間長可能會對患者產(chǎn)生光老化、色素沉著等不良反應(yīng)，因此治療結(jié)束后，應(yīng)觀察兩組患者不良反應(yīng)的發(fā)生情況；此外由于觀察組聯(lián)合運用退白顆粒，退白顆粒屬于中成藥，定期進(jìn)行血、尿常規(guī)及肝腎功能等常規(guī)檢查。

結(jié) 果

1 觀察組、對照組患者的臨床療效比較 觀察組痊愈25例，顯效21例，好轉(zhuǎn)9例，無效0例,對照組痊愈18例，顯效13例，好轉(zhuǎn)17例，無效7例，觀察組臨床有效率46(83.64%)顯著高于對照組31(56.37%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2 健康組及觀察組、對照組治療前后外周血中IL-6、TGF-β的含量變化的比較 見表1。

表1 健康組及觀察組、對照組外周血中IL-6、

注：與治療前比較，#P<0.05；與對照組治療后比較，*P<0.05；與健康組比較，?P<0.05

3 健康組與觀察組、對照組外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的檢測結(jié)果的比較 見表2。

表2 健康組及觀察組、對照組外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的檢測結(jié)果±s)

注：與治療前比較，#P<0.05；與對照組治療后比較，*P<0.05；與健康組比較，?P<0.05

4 不良反應(yīng) 觀察組和對照組的光不良反應(yīng)基本一致，患者主要表現(xiàn)為：照射后輕度的自覺皮膚燒灼感、刺痛感及瘙癢感；觀察組部分患者會出現(xiàn)輕度惡心、嘔吐及上腹部不適癥狀；觀察組患者治療前后的血、尿常規(guī)、肝腎功能均未見顯著變化。按照患者出現(xiàn)皮膚不適癥狀及胃腸道癥狀兩方面對患者的不良反應(yīng)進(jìn)行分析，結(jié)果觀察組不良反應(yīng)發(fā)生率12.72%與對照組10.91%差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

討 論

白癜風(fēng)是臨床上常見的一種皮膚病，由于其病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未得到完全闡釋，所以目前尚未有統(tǒng)一的治療方案，就其研究現(xiàn)狀而言，自身免疫機(jī)制是多數(shù)專家、學(xué)者公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制之一[4]。因此臨床上對于白癜風(fēng)的治療多從免疫機(jī)制角度入手，常用的治療方法是NB-UVB照射治療，通過刺激促黑激素產(chǎn)生、促細(xì)胞因子分泌、促黑素細(xì)胞增殖及黑素生成以及對移行和增殖的黑素細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用等而發(fā)揮治療作用[5]。但近年來研究發(fā)現(xiàn)[6]，NB-UVB照射治療白癜風(fēng)仍然存在不足，多數(shù)患者需要長期進(jìn)行光照治療，長期光照可能會產(chǎn)生光老化、色素沉著等不良反應(yīng)。因此臨床上目前多采用聯(lián)合中成藥或中藥湯劑療法治療白癜風(fēng)[7]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，白癜風(fēng)的發(fā)病是機(jī)體內(nèi)外因素互相作用的結(jié)果，內(nèi)因為肝脾腎虛，多由肝血虛、腎陽虛、腎氣不足、致令機(jī)體陰陽失衡，氣血失和，在此基礎(chǔ)上濕熱風(fēng)邪乘虛而入，客入肌膚，閉阻經(jīng)絡(luò)血脈，肌膚不得溫煦，皮膚毛發(fā)失養(yǎng)致黑色素脫失而成白斑[8]。因此治療上應(yīng)該養(yǎng)血益膚、驅(qū)風(fēng)通絡(luò)；本研究中運用退白顆粒聯(lián)合NB-UVB治療，退白顆粒的作用機(jī)制如下：當(dāng)歸、黃芪益氣補(bǔ)血，白蒺藜、烏梢蛇、白芷、菟絲子祛風(fēng)發(fā)散通絡(luò)；雞血藤、補(bǔ)骨脂、何首烏、丹參、紅花、陳皮，滋養(yǎng)肝腎、理氣活血；黑豆衣補(bǔ)腎養(yǎng)血、祛風(fēng)調(diào)氣。通過聯(lián)合運用退白顆粒，減少了NB-UVB的照射劑量，從而降低了NB-UVB照射可能引起腫瘤的風(fēng)險。此外，研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂、白蒺藜等能夠提高皮膚對于NB-UVB照射的敏感性，加速黑色素的生物合成[9]；當(dāng)歸、丹參等能明顯改善局部微循環(huán)，促進(jìn)黑色素運轉(zhuǎn)和彌散，促進(jìn)皮損部位黑色素的再生[10]。因此退白顆粒與NB-UVB聯(lián)合運用可以顯著提高臨床治療效果。本研究結(jié)果中觀察組的臨床有效率83.64%顯著高于對照組56.37%，與盛國榮等[11]研究結(jié)果相近。

白癜風(fēng)是一種T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫相關(guān)性疾病[12]。TGF-β是一種促生長因子，參與許多生理病理過程，在維持機(jī)體免疫平衡中起著重要作用，在許多疾病發(fā)病的急性階段中，其合成會明顯減少，TGF-β在白癜風(fēng)中的作用機(jī)理在于CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞產(chǎn)生的膜性TGF-β與未知的受體結(jié)合，從而傳遞細(xì)胞接觸-依賴性抑制信號，抑制免疫活性細(xì)胞的增殖，調(diào)節(jié)細(xì)胞表型及抑制淋巴細(xì)胞等，進(jìn)而導(dǎo)致黑素細(xì)胞自身抗原的耐受性破壞，形成白癜風(fēng)[13]。本次研究中觀察組TGF-β水平治療后顯著高于對照組，筆者推斷與退白顆粒的免疫調(diào)節(jié)作用相關(guān)，但具體機(jī)制尚不明確且當(dāng)歸、丹參等能明顯改善局部微循環(huán)，促進(jìn)黑色素運轉(zhuǎn)和彌散，促進(jìn)皮損部位黑色素的再生，從而改善觀察組治療情況，增加其治療有效率。

此外，白癜風(fēng)發(fā)病過程中Th17細(xì)胞分泌的IL-17A作用于表皮角質(zhì)形成細(xì)胞及真皮成纖維細(xì)胞，促進(jìn)IL-6的大量分泌，使IL-6在血液和局部微環(huán)境中的濃度顯著增高，作用于黑素細(xì)胞，IL-6能促進(jìn)黑素細(xì)胞表面的細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)的表達(dá)，ICAM-1是中性白細(xì)胞與黑素細(xì)胞黏附的必需因子，IL-6通過增加效應(yīng)細(xì)胞的遷移及其與靶細(xì)胞間的黏附，引起黑素細(xì)胞功能失調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致白癜風(fēng)。 退白顆粒對小鼠的體液免疫及T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)有一定的調(diào)節(jié)作用；CD3+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞對于白癜風(fēng)發(fā)病起到免疫抑制性調(diào)節(jié)作用，通過實驗研究發(fā)現(xiàn)去除CD4+T細(xì)胞的小鼠體內(nèi)CD3+T細(xì)胞數(shù)量增加了10倍，并且超過一半的小鼠出現(xiàn)了白癜風(fēng)的體征。因此本研究中治療后，觀察組及治療組IL-6水平、CD8+、Th17細(xì)胞的百分比較治療前降低，表明NB-UVB照射治療可以抑制IL-6對黑素細(xì)胞的損傷，并通過調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，進(jìn)而改善白癜風(fēng)癥狀。治療后，觀察組IL-6水平、CD8+、Th17細(xì)胞的百分比顯著低于對照組,CD4+細(xì)胞的百分比及CD4+/CD8+顯著高于對照組，表明NB-UVB聯(lián)合退白顆粒對抑制IL-6分泌，Th細(xì)胞分泌功能優(yōu)于單用NB-UVB照射治療。此外，觀察組的不良反應(yīng)發(fā)生率與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可見聯(lián)合治療的安全性尚可，這一結(jié)果再次表明了中醫(yī)藥在治療白癜風(fēng)方面的優(yōu)勢。

綜上所述，運用退白顆粒聯(lián)合NB-UVB治療白癜風(fēng)患者，可以調(diào)節(jié)患者的外周血免疫細(xì)胞，影響細(xì)胞因子的表達(dá)，從而提高患者的免疫功能，發(fā)揮較好的治療作用，值得臨床應(yīng)用。

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(收稿：2016-07-26)

?廣西自然科學(xué)基金資助項目(桂科基結(jié)字[2016]608號)

白癜風(fēng)/中西醫(yī)結(jié)合療法 退白顆粒

R758.41

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10.3969/j.issn.1000-7369.2017.01.045