□ 胡 媛 襄陽市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所

核酸探針和PCR技術(shù)在食品檢驗中的運(yùn)用

□ 胡 媛 襄陽市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所

隨著國民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，肉制品的需求量逐漸增加。在獸醫(yī)領(lǐng)域中，發(fā)現(xiàn)很多致病菌通過人們食用肉制品進(jìn)入人體而引發(fā)食物中毒，肉制品中病原體的存在將嚴(yán)重威脅人體的生命健康。有關(guān)數(shù)據(jù)表明，在全球范圍內(nèi)，由食品病毒引起的人體疾病人數(shù)逐漸增加。在食品發(fā)展嚴(yán)峻的情形下，借助較為先進(jìn)的生物技術(shù)，快速的檢驗出食品中的病原細(xì)菌，能夠防治該種病菌在人體間的傳播。核酸探針和PCR技術(shù)是較為新型的病毒檢驗技術(shù)，在食品檢驗中的應(yīng)用，能鑒別出病毒，在維護(hù)公共衛(wèi)生上具有突出作用?；诖?，本文研究核酸探針和PCR技術(shù)在食品檢驗中的應(yīng)用。

核酸探針的應(yīng)用原理和在食品檢驗中的應(yīng)用

核酸探針的應(yīng)用原理

核酸探針技術(shù)主要是借助核酸分子鏈的特異性識別病毒基因。當(dāng)兩個來源不同的核酸鏈具有互補(bǔ)的堿基序列時，這兩個核酸鏈能實現(xiàn)配對，相互結(jié)合成為分子雜交鏈。在堿基配對過程中，可用探針標(biāo)記特定的堿基序列，常用的探針標(biāo)記法有同位素標(biāo)記法、生物素標(biāo)記法?；蛱结樀拇嬖谀苤苯訖z驗出未知樣品中是否含有與其相同的序列，并分析探針基因與被檢驗基因的同源程度。制備核酸探針需要注意兩個問題：第一，選擇無交叉反應(yīng)特異性強(qiáng)的核酸片段；第二，標(biāo)記物的選擇，常用的同位素有32P、125I、35S等。

核酸探針在食品檢驗中的應(yīng)用

核算探針在食品檢驗中的應(yīng)用，根據(jù)不同的劃分方法有不同的應(yīng)用類型。但無論哪種類型都能發(fā)揮出核酸探針檢驗疾病的作用。將核酸探針作為特異性目的基因進(jìn)行檢驗環(huán)節(jié)中，核酸探針技術(shù)的應(yīng)用較廣泛。在基因工程中，很多基因鏈特異性明顯，借助核酸探針的特異性，能直接檢驗出目的片段。對于基因的重組，需借助核酸分子雜交過程鑒定，在該環(huán)節(jié)中能直接確定出樣品的雜項，直接剔除樣品中對人體有害的物質(zhì)。

PCR技術(shù)的應(yīng)用原理和在食品檢驗中的應(yīng)用

PCR技術(shù)的應(yīng)用原理

PCR技術(shù)又被稱為基因體外擴(kuò)增法，其基本原理是在體外擴(kuò)增特定的雙鏈d NA片段，該擴(kuò)增十分迅速。d NA雙鏈在受熱后，變性為兩個單鏈，在其中加入兩段人工合成、并與靶d NA目的序列兩端互補(bǔ)的核苷酸片段作為左右引物，經(jīng)變性、退火、延伸的循環(huán)，使d NA實現(xiàn)大量擴(kuò)增。在d NA分子鏈擴(kuò)增中，靶d NA分子呈幾何級數(shù)增加。在擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)增加的基礎(chǔ)上，d NA增加，酶分子逐漸被消耗。在一次擴(kuò)增中能將靶d NA擴(kuò)增近百萬倍。

PCR技術(shù)在食品檢驗中的應(yīng)用

將PCR技術(shù)應(yīng)用食品檢驗中，主要是因為PCR技術(shù)的反應(yīng)迅速，具有較強(qiáng)的特異性，生物靈敏性較強(qiáng)。因此將該技術(shù)應(yīng)用到食品檢驗中，具有較大的潛力。該技術(shù)的具體應(yīng)用中可檢驗多種類型的病原體，具體的內(nèi)容如下。

1.單核細(xì)胞增多癥李氏桿菌

檢驗食品中單核細(xì)胞增多癥李氏桿菌時，傳統(tǒng)的食品檢驗方法為分離鑒定技術(shù)，在實際克隆環(huán)節(jié)中需要花費(fèi)2～4周時間，檢驗不及時。而采用PCR技術(shù)后，可有效地提升檢驗效率，對于食品中的李氏桿菌溶液進(jìn)行基因擴(kuò)增處理，結(jié)果能在12h內(nèi)完成。該技術(shù)提升了食品檢驗的實際效率，在待測樣本上包含5～5 0個細(xì)菌也可被檢出。

2.黃金色葡萄球菌

黃金色葡萄球菌腸毒素在食品中誤被人食用，將會引起食物中毒。其中內(nèi)毒素將會引發(fā)中毒體休克綜合征。科學(xué)家借助PCR技術(shù)對于食品中該種病毒進(jìn)行檢驗，能在較短的時間內(nèi)檢驗出毒素，避免人們食物中毒。由此可見，以PCR技術(shù)的特異性和靈敏性，可為食物內(nèi)部的病毒檢驗帶來便利。

3.沙門氏菌

沙門氏菌在食品中的出現(xiàn)將會引發(fā)腹瀉等問題，將PCR技術(shù)應(yīng)用其中，克隆出基因特異性序列，設(shè)定引物，能夠比較快速的檢驗處標(biāo)記食品中的沙門氏菌。該技術(shù)的準(zhǔn)確率可達(dá)100%。

雖然PCR技術(shù)的在食品檢驗中的效率較高，具有較強(qiáng)的靈敏性，但在實際應(yīng)用中也存在著一些問題，如污染問題。如果在實驗條件控制不當(dāng)?shù)那闆r下，將會生成非目的產(chǎn)物，降低檢驗的靈敏度。

結(jié)語

食品安全給人們的生活帶來嚴(yán)重的影響，將核酸探針技術(shù)和PCR技術(shù)應(yīng)用到食品檢驗中，能夠借助生物技術(shù)的反應(yīng)靈敏性，檢驗出食品中的不安全因素。在本研究中，將核酸探針作為特異性目的基因檢驗中，核酸探針技術(shù)的應(yīng)用較廣泛。將PCR技術(shù)應(yīng)用食品檢驗中，主要是因為PCR技術(shù)的反應(yīng)迅速，具有較強(qiáng)的特異性，生物靈敏性較強(qiáng)。