□ 孫旭峰 廣州市番禺質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測(cè)所

液相色譜法檢測(cè)食品中水溶性維生素

□ 孫旭峰 廣州市番禺質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測(cè)所

維生素是維持人體正常機(jī)能不可或缺的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，然而部分維生素在人體體內(nèi)無(wú)法合成，或合成量不能滿足機(jī)體需要，這就需要從外界攝取一定量的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化食品，以滿足人體正常機(jī)能的生長(zhǎng)需要。根據(jù)溶解度的不同，維生素分為水溶性和脂溶性兩類(lèi)，水溶性維生素主要有維生素C、B1（硫胺素）、B2（核黃素）、B3（煙酰胺、煙酸）、B5（泛酸）、B6（吡哆醇、吡哆胺、吡哆醛）、B7（生物素）、B11（葉酸）和B12（鈷胺素）。不同水溶性維生素的結(jié)構(gòu)化特征差異較大，化學(xué)性質(zhì)較不穩(wěn)定，分離檢測(cè)較為復(fù)雜困難，多采用高效液相色譜法測(cè)定。在普通高效液相色譜的基礎(chǔ)上研究出一種新型檢測(cè)方法，即超高效液相色譜法，不僅在分離測(cè)定有機(jī)物占據(jù)更大的優(yōu)勢(shì)，而且在檢測(cè)食品中多種水溶性維生素的效果較明顯。

高效液相色譜儀測(cè)定食品水溶性維生素的過(guò)程分析

設(shè)備與材料

（1）設(shè)備。高效液相色譜儀WAterS1525；超純水機(jī)Mi l li-Q；高速臺(tái)式離心機(jī)tGL-10B，上海安亭科學(xué)儀器廠tGL-10B；智能控制超聲波清洗儀GT-2013 Q TS，深圳固特。

（2）材料。乙腈，色譜純，美國(guó)FiSherSCien ti fiC公司；磷酸二氫鉀，特級(jí)純，日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社；其他試劑均為分析純，水為超純水。

（3）配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。稱(chēng)取吡哆醇、煙酰胺、泛酸鈣、氰鈷胺、硫胺標(biāo)準(zhǔn)樣品50m g，丙酮定容，配制成質(zhì)量濃度2m g/m L的儲(chǔ)備液；稱(chēng)取維生素C樣品250m g，丙酮定容，配制成質(zhì)量濃度為10m g/m L的儲(chǔ)備液；稱(chēng)取維生素功能飲料制品、復(fù)合維生素片、維生素營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化大米各50m g，丙酮定容，配制成質(zhì)量濃度為2m g/m L的儲(chǔ)備液；儲(chǔ)備液避光，置于4 ℃冰箱。

（4）樣品處理。吸取30m L維生素功能飲料樣品，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后分析；若干復(fù)合維生素片劑碾壓至粉末狀，稱(chēng)取2g，丙酮定容，超聲提取25 mi n，超聲提取液0.45μm微孔濾膜過(guò)濾備用；維生素C用超聲提取液0.45μm微孔濾膜后備用。

半制備型技術(shù)參數(shù)分析

（1）色譜柱。S u n fireC185μm，4.6×1 50m m；流動(dòng)相A：25 m mol/L磷酸二氫鉀緩沖液，PH調(diào)至2.5；B：乙腈；采用二元高壓梯度泵：雙柱塞并聯(lián)補(bǔ)償往復(fù)泵，采用非圓齒輪技術(shù)，自調(diào)芯柱塞；兩種溶劑經(jīng)二元溶劑泵后高壓混合，流速控制在0.001~22.5 m L/mi n，最大耐受壓力為4.1×104kPA；柱溫：30℃；自動(dòng)進(jìn)樣器：四通閥方式；進(jìn)樣體積：25 μL。

（2）檢測(cè)波長(zhǎng)。紫外可見(jiàn)檢測(cè)器（2489），可變波長(zhǎng)為190～700 n m，可見(jiàn)光源為氚燈；光譜帶寬為5 n m，采樣速率控制在80H z，四個(gè)波長(zhǎng)分別為25 6.7、379.0、521.5、656.1 n m。通過(guò)對(duì)多種維生素在波長(zhǎng)區(qū)間內(nèi)的紫外光譜掃描，得到維生素的最大吸收379.0 n m波長(zhǎng)作為檢測(cè)的最佳波長(zhǎng)。

（3）優(yōu)化色譜條件。維生素C、煙酰胺等幾種物質(zhì)以離子形式存在于水溶液中，不易長(zhǎng)時(shí)間停留在C18色譜柱上，一般實(shí)驗(yàn)室會(huì)采用在流動(dòng)相內(nèi)加入磺酸鹽離子對(duì)試劑的方法延長(zhǎng)維生素的極性保留時(shí)間，然而離子對(duì)試劑會(huì)破壞色譜柱的平衡性，導(dǎo)致分析物發(fā)生漂移運(yùn)動(dòng)，從而降低定性定量結(jié)果的分析準(zhǔn)確率。但在本實(shí)驗(yàn)中采用離子交換機(jī)，增強(qiáng)離子在色譜柱中的穩(wěn)定性，保證分析物發(fā)生漂移運(yùn)動(dòng)，從而提高定量結(jié)果的分析準(zhǔn)確率。

表1 功能飲料樣品加標(biāo)回收率表

表2 復(fù)合維生素片樣品加標(biāo)回收率表

結(jié)果分析

精密度分析

準(zhǔn)確量取100倍稀釋度的維生素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別進(jìn)行6次重復(fù)性試驗(yàn)，各組分的色譜峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.7 5%、0.25%、1.1 8%、0.8 3%、0.4 5%和1.0 5%，保留時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.7 5%、1.6%、1.2%、1.5 5%、1.7 8%和2.0 5%，充分證明該方法檢測(cè)結(jié)果的精密度良好。

加標(biāo)回收率分析

向功能飲料、復(fù)合維生素片中添加一定濃度的上述儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)液，進(jìn)行加標(biāo)回收率的測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1～23。