姜 騫，韓凌霞，司昌德，林 歡，高彩霞，郭東春，張 偉，劉家森，曲連東

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，哈爾濱 150069)

專題研究

SPF巴馬小型豬的培育及應(yīng)用

姜 騫，韓凌霞，司昌德，林 歡，高彩霞，郭東春，張 偉，劉家森，曲連東*

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，哈爾濱 150069)

利用我國自有資源巴馬小型豬群，完成了疫病凈化，建立了無特定病原體巴馬小型豬實驗豬群。制定了飼育標(biāo)準(zhǔn)、實驗豬遺傳學(xué)檢測標(biāo)準(zhǔn)和微生物質(zhì)量控制技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，制訂了黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)《無特定病原體豬微生物學(xué)監(jiān)測技術(shù)規(guī)范》，對建立的豬群進行了遺傳學(xué)和微生物質(zhì)量控制。建立了豬瘟病毒(CSFV)和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)感染巴馬小型豬感染模型。擴增了巴馬小型豬重要細(xì)胞因子及固有免疫相關(guān)的重要分子，從分子水平進一步證明巴馬小型豬可以代替家豬進行豬病感染實驗。目前建立的豬群已廣泛應(yīng)用在豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬圓環(huán)病毒等豬重要疫病防控及致病機理的研究，實現(xiàn)了共享利用。本項目的完成解決了實驗用豬瓶頸問題，提升了動物疫病研究水平，提供了新型實驗動物，實現(xiàn)了優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源共享利用，加速了生命科學(xué)研究和生物制品產(chǎn)業(yè)發(fā)展，推動了農(nóng)業(yè)實驗動物的行業(yè)進步。

巴馬小型豬；無特定病原體；培育；感染模型

1 研究背景

無特定病原體(SPF)豬是指經(jīng)過人工培育，對其攜帶的微生物和寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚的用于科學(xué)研究的特定豬，是生命科學(xué)研究、生物制品生產(chǎn)的重要實驗材料和原材料。我國盡管是養(yǎng)豬大國，但在豬只微生物質(zhì)量控制等方面仍然落后發(fā)達(dá)國家。國際上發(fā)達(dá)國家早在上世紀(jì)50年代就開始了SPF豬的培育，目前少數(shù)國家已具備成熟的繁育技術(shù)，建立了標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量控制技術(shù)，大量應(yīng)用于生命科學(xué)研究，并形成市場化。

盡管我國的實驗動物資源及其標(biāo)準(zhǔn)化取得了長足進步，但是還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，尤其是缺少優(yōu)質(zhì)實驗用豬資源，成為制約畜牧業(yè)養(yǎng)殖業(yè)及科學(xué)研究的瓶頸。在實際科研實踐中，用普通農(nóng)場生產(chǎn)豬，甚至用小農(nóng)戶散養(yǎng)的豬代替實驗用豬的問題相當(dāng)普遍，不僅遺傳背景雜亂、攜帶病原體和寄生蟲質(zhì)量參差不齊，而且來源混亂，隨意性很大，導(dǎo)致實驗結(jié)果重復(fù)性差，離散度高，實驗失敗的幾率增大，既造成人力財力的浪費，又嚴(yán)重滯后了畜牧業(yè)發(fā)展和疫病防控，局限了豬病防控的科學(xué)研究進程。

2 研究目的

小型豬在體型、大小、生理學(xué)及疾病發(fā)展等方面與人有較大的相似性，是理想的實驗動物模型，在探索人的生命活動規(guī)律以及研究人類疾病的致病機制治療、預(yù)防、藥物篩選等方面均顯示出獨特的優(yōu)勢。美國在50年代初開始了小型豬的培育開發(fā)研究，我國對小型豬的研究開始于20世紀(jì)80年代初，雖然起步較晚，但是我國小型豬原始資源十分豐富，目前我國的小型豬品種主要有: 五指山小型豬 貴州小型香豬，藏豬版納微型豬，廣西巴馬小型豬等；其中，廣西巴馬小型豬則具有國內(nèi)其他品種小型豬的絕大部分優(yōu)點。我國目前缺少病原微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)質(zhì)量控制、遺傳學(xué)背景清晰的SPF 豬種群，缺少質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。巴馬小型豬在分類學(xué)上與普通家豬相同，屬于哺乳綱，偶蹄目，野豬科，豬屬動物。小型豬由于它體型矮小、性成熟早、遺傳性穩(wěn)定、繁殖性能強、性情溫馴、部分生理生化指標(biāo)與人類相似等這些特有的生物學(xué)特性，易于實驗操作，適合實驗動物模型的建立。作為實驗動物，巴馬小型豬在人用豬源生物活性材料生產(chǎn)以及胚胎移植等研究中起著重要作用，實驗用巴馬小型豬有望取代猴、犬等成為被大量使用的新型實驗動物。微生物學(xué)質(zhì)量控制是實驗動物標(biāo)準(zhǔn)化的重要內(nèi)容之一，由于微生物感染實驗動物可不同程度地干擾試驗結(jié)果，污染試驗材料，影響實驗動物生產(chǎn)，甚至威脅人類健康。巴馬小型豬的微生物學(xué)質(zhì)量在一定程度上限制了其推廣應(yīng)用， 培育SPF巴馬小型豬基礎(chǔ)群及核心群已迫在眉睫。

因此，本項目開展了SPF巴馬小型豬的培育及應(yīng)用研究，解決實驗用豬瓶頸問題，提升我國動物疫病防控能力，實現(xiàn)種質(zhì)資源共享利用。

3 創(chuàng)新點

本項目通過阻斷外界病原體的再感染、豬病的凈化等措施，凈化了豬瘟等15種豬病，微生物學(xué)質(zhì)量可控，成功培育了無特定病原體巴馬小型豬。提出了豬微生物學(xué)質(zhì)量控制監(jiān)測技術(shù)，首次制定了無特定病原體豬微生物學(xué)監(jiān)測技術(shù)規(guī)范(地方標(biāo)準(zhǔn))，已頒布實施。建立了遺傳學(xué)微衛(wèi)星位點監(jiān)測技術(shù)，遺傳學(xué)分析表明培育的無特定病原體豬符合遺傳學(xué)封閉群特征。建立了高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)感染巴馬小型豬模型和豬瘟病毒(CSFV)感染巴馬小型豬模型。進行了重要細(xì)胞因子及固有免疫相關(guān)的重要分子比較分析，巴馬小型豬與家豬具有較高的同源性。確定了豬群的SLA單倍型并獲得了ISAG SLA命名委員會的官方命名。開發(fā)了新型豬用隔離器，解決了豬糞便經(jīng)常堵塞排污管的問題，降低了糞尿混合滋生細(xì)菌的風(fēng)險，獲得了實用新型專利。

4 討論

本項目主要以我國自有巴馬小型豬為基礎(chǔ)豬群，采用自繁自養(yǎng)封閉交配的方式繁育，飼養(yǎng)在正壓隔離環(huán)境及屏障環(huán)境條件下，通過控制飼料和飲水質(zhì)量，以及人員流動和物品流動等措施，阻斷外界病原體的再感染；通過滅活疫苗免疫，抗生素治療和疫病監(jiān)測，凈化了主要病原體，成功培育了無特定病原體巴馬小型豬核心群；制定了適合我國自身的巴馬小型豬的飼育標(biāo)準(zhǔn)，用于豬群的飼育；制定了黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)《無特定病原體豬微生物學(xué)監(jiān)測技術(shù)規(guī)范》，并頒布實施；制定了巴馬小型豬遺傳學(xué)檢測標(biāo)準(zhǔn)，建立了遺傳學(xué)微衛(wèi)星位點監(jiān)測技術(shù)，對豬群進行了遺傳學(xué)監(jiān)測，符合豬封閉群遺傳特征；分析了巴馬小型豬豬群SLA單倍型特征，獲得ISAG SLA命名委員會官方命名1份；進行了巴馬小型豬重要細(xì)胞因子和主要固有免疫相關(guān)分子的同源性序列分析，從分子水平證明了巴馬小型豬代替家豬作為理想實驗豬的可行性；選擇無特定病原體巴馬小型豬，通過觀察臨床癥狀、觀察組織臟器的病理變化、檢測血清中抗體及檢測組織臟器中病毒載量，評價了巴馬小型豬對豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征病毒的敏感性，建立了豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征病毒巴馬小型豬感染模型。建立的無特定病原體巴馬小型豬已廣泛應(yīng)用于豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬傳染性胃腸炎、豬圓環(huán)病毒等豬重要疫病的科學(xué)研究、疫苗生產(chǎn)及檢驗。本項目的完成解決了實驗用豬瓶頸問題，提升了動物疫病研究水平，提供了新型實驗動物，實現(xiàn)了優(yōu)質(zhì)實驗動物種質(zhì)資源的共享利用。

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Breeding and application of SPF Bama miniature pig

JIANG Qian，HAN Ling-xia，SI Chang-de，LIN Huan，GAO Cai-xia， GUO Dong-chun，ZHANG Wei，LIU Jia-sen，QU Lian-dong*

(State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150069, China)

In this study, a Specific Pathogen-Free (SPF) Bama miniature pig herd was established. The standards for breeding experimental pigs, genetic test and microbiological quality control had been drafted. The local standards of Heilongjiang province “SPF” technical specifications for microbiological monitoring of pigs had been formulated. The genetic and microbiological quality criterion had been used to control of the SPF pig herd. Classical swine fever virus (CSFV) and highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) infection models of Bama miniature pigs were established, especially the infection miniature pig model of PRRSV was used to evaluated commercially vaccine. The comparison of the cytokine homology between Bama miniature pigs and domestic pigs showed that the Bama miniature pigs can be used to instead of domestic pigs as an ideal experiental animal. At present the SPF Bama miniature pig colonies have been widely used to study the mechanism of prevention and pathogenic in the classical swine fever virus, porcine reproductive and respiratory syndrome virus and porcine transmissible gastroenteritis virus and porcine circovirus and so on. The completion of the project solved the bottleneck problem of the experimental pig usage which provided a new ideal experimental animal for animal disease and life science research.

Bama miniature pig; Specific Pathogen-Free; Breeding; Infection model

中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項(2008-04,2009-15)；黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)項目(2014-38)；黑龍江省科技攻關(guān)(PC08S01)。

姜騫(1975-)，女，助理研究員，研究方向：實驗動物病毒學(xué)。E-mail： jiangqian623@sina.com.cn

曲連東(1964-)，男，研究員，研究方向：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)、實驗動物學(xué)。E-mail： qld@hvri.ac.cn

R-33

A

1671-7856(2017) 05-0001-03

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.05.001

2016-11-11