劉彥莉，王 萍， 張 磊，孫 巍，米曉蘭

(1.天津天士力制藥股份有限公司，天津 300402)

氣相色譜法測(cè)定復(fù)方丹參滴丸給藥制劑中異龍腦和龍腦含量

劉彥莉，王 萍， 張 磊，孫 巍，米曉蘭

(1.天津天士力制藥股份有限公司，天津 300402)

目的：使用氣相法測(cè)定復(fù)方丹參滴丸給藥制劑中異龍腦、龍腦含量。方法：采用氣相色譜法測(cè)定, 乙酸乙酯為溶劑, 水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)。色譜柱為HP-5型5%PHMEsiloxana石英毛細(xì)管柱(30 m× 0.32 mm，0.25 μm)，載氣為氮?dú)猓至鞅?0∶1。FID檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度：250 ℃；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；柱溫：100 ℃保持12 min。進(jìn)樣體積1 μl。結(jié)果：異龍腦在0.010～0.30 mg/ml(r=0.999 9)、龍腦在0.020～0.60 mg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系, 異龍腦平均回收率為98.51%，RSD為0.67%；龍腦平均回收率為98.54%，RSD為0.95%。結(jié)論：方法快速、準(zhǔn)確、可靠，可用于復(fù)方丹參滴丸給藥制劑中異龍腦、龍腦含量的檢測(cè)。

石英毛細(xì)管氣相色譜，復(fù)方丹參滴丸給藥制劑，異龍腦，龍腦

本文中復(fù)方丹參滴丸給藥制劑是復(fù)方丹參滴丸水溶液。復(fù)方丹參滴丸是由丹參、三七和冰片組成，具有活血化瘀、理氣止痛之功效，用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛[1]。為深入研究處方中冰片的藥理藥效、科學(xué)闡述臨床效果，建立了氣相色譜法測(cè)定給藥制劑中異龍腦、龍腦含量，二者加和即為冰片含量。

1 儀器與試藥

Agilent 7890A 氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器。龍腦對(duì)照品(批號(hào)BCBM2364V，供含量測(cè)定用)、異龍腦對(duì)照品(批號(hào)MKBJ9230V，供含量測(cè)定用)、水楊酸甲酯對(duì)照品(批號(hào)MKBL3283V，供含量測(cè)定用)，均來源于Sigam。乙酸乙酯為色譜純。復(fù)方丹參滴丸給藥制劑(批號(hào)CV-13、CV-14、CV-15，由天士力毒理所提供)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Hp-5型5%PHMEsiloxana石英毛細(xì)管柱(30 m× 0.32 mm，0.25 μm)，柱溫：100 ℃保持12 min，總程序12 min；FID氫火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度：250 ℃；載氣：氮?dú)猓涣魉伲?.0 ml/min；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；分流比：10∶1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液制備 精密稱取水楊酸甲酯對(duì)照品適量于量瓶中，加乙酸乙酯制成8 mg/ml的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 取龍腦對(duì)照品，分別精密稱定16、20和24 mg于100 ml量瓶中，分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液4 ml，加乙酸乙酯制成3種濃度的龍腦對(duì)照品溶液。取異龍腦對(duì)照品，分別精密稱定8、10和12 mg于100 ml量瓶中，分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液4 ml，加乙酸乙酯制成3種濃度的異龍腦對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備 移取給藥制劑10 ml于50 ml塑料離心管中，加25 ml乙酸乙酯劇烈振搖萃取，若乳化可加0.25 g NaCl 破乳，離心5 min，用吸管吸取萃取液置50 ml量瓶中。依法用乙酸乙酯分別萃取兩次，每次10 ml(后兩次萃取時(shí)若仍有乳化，還可加0.25 g NaCl 破乳)，合并萃取液，精密加入內(nèi)標(biāo)液2 ml，最后用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.4 陰性溶液制備 依據(jù)處方，取丹參、三七加水煎煮，煎液濾過，濾液濃縮，加入乙醇，靜置使沉淀，取上清液，回收乙醇，濃縮成稠膏備用。取聚乙二醇適量，加熱使熔融，加入上述稠膏混勻，滴入冷卻的液體石蠟中制成包薄膜衣滴丸，即得陰性樣品[2]。稱取陰性樣品0.2 g于50 ml塑料離心管中，之后按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備得陰性溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取空白溶劑、陰性對(duì)照溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液各1 μl 注入氣相色譜儀，測(cè)定，用內(nèi)標(biāo)法計(jì)算含量即得。在選定色譜條件下，空白溶劑、陰性樣品對(duì)給藥制劑中龍腦和異龍腦含量測(cè)定均無(wú)影響。見圖1。

1.異龍腦 2.龍腦 3.水楊酸甲酯

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 取龍腦對(duì)照品約100 mg精密稱定，于50 ml量瓶中，加乙酸乙酯定容制成2 mg/ml龍腦對(duì)照品母液。分別精密吸取上述溶液15、10、5、2、1和0.5 ml，于50 ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液2 ml，配制成6個(gè)濃度龍腦對(duì)照品溶液。以龍腦濃度為橫坐標(biāo)(X)，以K龍腦峰面積/水楊酸甲酯峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取異龍腦對(duì)照品約50 mg精密稱定，于50 ml量瓶中，加乙酸乙酯制成1 mg/ml異龍腦對(duì)照品母液。分別精密吸取上述溶液15、10、5、2、1和0.5 ml，于50 ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液2 ml，配制成6個(gè)濃度異龍腦對(duì)照品溶液。以異龍腦濃度為橫坐標(biāo)(X)，以K異龍腦峰面積/水楊酸甲酯峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。龍腦回歸方程為：Y=4.781 66X+0.002 75(r=0.999 9)；異龍腦回歸方程為：Y= 4.691 27X+ 0.001 08(r=0.999 9)。龍腦在0.020～0.60 mg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，異龍腦在0.010～0.30 mg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取同批號(hào)給藥制劑(批號(hào)CV13)制備6份供試品溶液(上、中、下層各取樣品2份)，在選定色譜條件下進(jìn)行檢測(cè)。測(cè)得樣品中冰片平均含量為0.356 mg/ml，RSD為0.86%。表明精密度良好。

2.6 均一性 從給藥制劑上、中、下層各取樣品2份，制備6份供試品溶液，在選定色譜條件下進(jìn)行檢測(cè)。測(cè)定樣品中冰片平均含量為0.356 mg/ml，RSD為0.86%。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 移取給藥制劑5 ml于50 ml塑料離心管中，共9份，分別精密加入濃度為0.6 mg/ml的異龍腦標(biāo)準(zhǔn)液0.5、1.0和1.5 ml，平行做3份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供異龍腦回收率試驗(yàn)溶液。移取給藥制劑5 ml于50 ml塑料離心管中，共9份，分別精密加入濃度為1.2 mg/ml的龍腦標(biāo)準(zhǔn)液0.5、1.0和1.5 ml，平行做3份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供龍腦回收率試驗(yàn)溶液。在選定色譜條件下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果異龍腦的平均回收率為98.51%，RSD為0.67%；龍腦的平均回收率為98.54%，RSD為0.95%。見表1、表2。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取3個(gè)濃度的異龍腦和龍腦對(duì)照品溶液，密閉室溫下放置，于0、24、36和48 h，在選定色譜條件下檢測(cè)，以K異龍腦峰面積/水楊酸甲酯峰面積和K龍腦峰面積/水楊酸甲酯峰面積進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。龍腦對(duì)照品溶液K龍腦峰面積/水楊酸甲酯峰面積RSD分別為0.98%、0.70%和0.59%；異龍腦對(duì)照品溶液K異龍腦峰面積/水楊酸甲酯峰面積RSD分別為0.49%、0.48%和0.43%。取同一份供試品溶液，密閉室溫放置，分別于0、24、36和48 h，在選定色譜條件下檢測(cè)，計(jì)算冰片含量RSD為0.98%。表明48 h內(nèi)異龍腦和龍腦對(duì)照品溶液及供試品溶液穩(wěn)定。

表1 異龍腦加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表2 龍腦加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.9 樣品測(cè)定 取3批給藥制劑，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在選定色譜條件下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果見表3。

表3 含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 溶劑的選擇 選擇溶解性能好且干擾小的乙酸乙酯作為溶劑，既能很好溶解樣品又能避免空白溶劑干擾。

3.2 內(nèi)標(biāo)物的選擇 理想內(nèi)標(biāo)物應(yīng)滿足下列要求：完全溶解于樣品中，且不與待測(cè)組分發(fā)生化學(xué)作用；盡可能與待測(cè)組分峰位靠近，但能與待測(cè)組分完全分開(R≥1.5)；在其周圍不應(yīng)有過多干擾峰存在。水楊酸甲酯出峰位置無(wú)干擾，峰形較好，與異龍腦、龍腦峰分離度高，是很好的內(nèi)標(biāo)物。本文所建立的異龍腦、龍腦含量檢測(cè)方法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證準(zhǔn)確可靠，完全符合非臨床含量方法驗(yàn)證[3]要求，可用于復(fù)方丹參滴丸給藥制劑中異龍腦、龍腦含量檢測(cè)。

1 孫國(guó)祥，宋宇晴. 復(fù)方丹參滴丸HPLC數(shù)字化指紋圖譜研究[J]. 中成藥，2009，31(8)：1152-1155

2 中國(guó)藥典[S].一部.2015：1219

3 Monica Lee Whitmire,Peter Bryan,Teresa R Henry,etal. NonClinical dose formulation analysis method validation and sample analysis[J].The AAPS Journal,2010,12(4)：628-634

Determination of Iso-borneol and borneol in compound danshen dripping pill by capillary gas chromatography

Liuyanli1，Wangping1，Zhanglei1，Sunwei1，Mixiaolan1

(1. Tasly Pharmaceutical Co.Ltd., Tianjin, 300402)

Objectives： To establish a method of a capillary gas chromatography for determination of iso-borneol and borneol contents in compound Danshen dripping pill. Methods： a gas chormatographic method was developed with HP-5 capillary column (30 m×0.32 mm, 0.25 μm) as stationary phase and nitrogen as carrier gas. The compounds were determined with FID. The temperature of the injector and detector were set at 200℃ and 250 ℃, respectively. Column temperature was at 100 ℃ for 12 minutes. The injection volume was 1 μl. Results： The calibration curves showed a good linear relationship within the range of 0.010～0.30 mg/ml of iso-borneol and 0.020～0.60 mg/ml of borneol with good precision and accuracy,respectively. 98.51% of isoborneol and 98.54% of borneol was recovered from the samples, respectively. Conclusions： With excellent accuaracy, high sensitivity and reliability, the method can be applied to determine the contents of iso- and borneol in compound Danshen dripping pill.

capillary gas chromatography, FID detector, compound Danshen dripping pill, iso-borneol,borneol

2016-01-14

R927.2

A

1006-5687(2016)02-0013-03