張克瑩 都 健 單風平

(中國醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院內分泌科,沈陽110032)

蛋氨酸腦啡肽的免疫調節(jié)作用及應用新進展①

張克瑩 都 健 單風平

(中國醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院內分泌科,沈陽110032)

蛋氨酸腦啡肽(Methionine enkephalin,MENK)最早在1975年被Hughes發(fā)現(xiàn)，由前腦啡肽衍生而來的5個氨基酸組成的內源性阿片肽[1]，正常體內含量極低，每毫升血漿含50～150 pg[2]。對MENK的早期研究是將其作為鎮(zhèn)痛劑和神經遞質來進行的，隨著內分泌和免疫系統(tǒng)關系的研究發(fā)現(xiàn)，當抗原或有絲分裂原刺激免疫細胞時，淋巴細胞、巨噬細胞和自然殺傷細胞等免疫細胞可以分泌產生MENK，MENK還可以調節(jié)某些細胞因子的分泌水平[3]，阿片受體在中樞神經系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)及某些腫瘤組織和正常組織細胞中均有分布；隨著神經化學和分子生物學技術的發(fā)展，尤其是基因剔除鼠的應用，許多研究證實阿片肽與細胞表面不同的受體結合后可以產生不同的生物效應，如調節(jié)免疫功能，抑制腫瘤細胞生長等，這些結果說明MENK參與免疫和神經內分泌系統(tǒng)的調節(jié)，具有免疫調節(jié)作用，也是一類重要的細胞因子。MENK的生物學功能使其在免疫系統(tǒng)相關疾病和腫瘤疾病的治療上發(fā)揮重要的作用，并取得了一定的進展[4]。

1 MENK的免疫調節(jié)作用

內分泌系統(tǒng)通過控制刺激信號分子的表達調節(jié)免疫系統(tǒng)活性，同時反饋作用于內分泌系統(tǒng)，而且免疫細胞間也能通過細胞因子網(wǎng)絡環(huán)相互作用，這有助于我們理解MENK對免疫系統(tǒng)的調節(jié)作用。蛋氨酸腦啡肽受體又稱阿片生長因子受體(OGFr)，均為G蛋白偶聯(lián)的7次跨膜螺旋結構，包括μ、δ和κ受體等幾種亞型，適宜濃度下MENK與免疫細胞表面κ和δ受體結合，參與cAMP-PKA、Ca2+-鈣調蛋白、PKC等信號調節(jié)通路，產生免疫調節(jié)作用[5]。

1.1 對巨噬細胞的作用 巨噬細胞屬于專職抗原提呈細胞，具有抗原提呈、細胞毒性作用、細胞碎片清除、調節(jié)炎癥反應維持穩(wěn)態(tài)等生理功能[6]。MENK作為調節(jié)分子可使巨噬細胞通過自分泌或旁分泌方式調節(jié)其吞噬作用及表型極化。巨噬細胞具有2種極化表型，即經典活化的M1表型和替代性活化的M2表型。M1表型能產生促炎癥分子如TNF-α、IL-12，主要誘導Th1應答，有利于清除細胞內病原體和腫瘤。M2表型主要產生抗炎癥分子，例如IL-10、IL-1受體拮抗劑中和炎癥反應，主要誘導Th2應答。1984年研究發(fā)現(xiàn)MENK可雙向調節(jié)鼠腹腔巨噬細胞功能[7]。MENK在低劑量(10-9～10-7mol/L)可以增加抗體依賴的細胞介導的細胞毒性作用，此時MENK與δ受體特異結合，它的活性與鳥苷酸環(huán)化酶水平正相關。在高劑量(10-6～10-5mol/L)時作用相反，此時MENK活性不被特異δ阿片受體介導，而是通過鈣離子通道，腺苷酸環(huán)化酶激活[8]。細胞表面的配體-受體相互作用在調節(jié)和表達巨噬細胞功能上起著重要作用，阿片受體也包括在這些巨噬細胞膜受體中。近期研究發(fā)現(xiàn)MENK與受體結合可刺激腹腔巨噬細胞的吞噬功能并刺激巨噬細胞釋放H2O2和NO的產生，這兩種活性物質與巨噬細胞殺菌和抗腫瘤作用相關[9]。另外，MENK增加巨噬細胞產生IL-1、IL-6和TNF等細胞因子，增加巨噬細胞和中性粒細胞的趨化作用[10]。Shan的團隊研究表明在體內實驗MENK能下調腫瘤相關巨噬細胞CD206的表達和精氨酸酶-1(M2標志物)的產生，同時上調CD64、MHC Ⅱ的表達和NO合酶(M1標志物)的產生，在體外MENK可促進骨髓源性巨噬細胞介導的細胞毒性作用[11]。MENK可通過抑制由IL-4介導的STAT6信號通路的激活，有效上調NF-κB的表達，有利于M1型細胞因子和NF-κB位點的結合，從而有效調控巨噬細胞由M2型向M1型轉化[12]?？傊?，MENK能有效地誘導M2巨噬細胞極化為M1型巨噬細胞，繼而調節(jié)宿主免疫系統(tǒng)Th1細胞免疫應答，顯著促進巨噬細胞介導的細胞毒性作用。

1.2 對T淋巴細胞的作用 1979年Wybran等[13]發(fā)現(xiàn)人血T淋巴細胞表面存在MENK受體將神經內分泌與免疫系統(tǒng)聯(lián)系在一起。有實驗表明，MENK體內外應用均能增加小鼠CD4+T細胞數(shù)量，CD4+T細胞mRNA表達量，說明可促進CD4+T細胞增殖[14]。MENK可以通過T細胞有絲分裂加強淋巴細胞增殖[15]，還可增加活性T細胞玫瑰花節(jié)形成率而增加T淋巴細胞活性，同時MENK還可以加強人外周血T淋巴細胞的遷移，這種活性可能依賴肽的NH2終端序列，尤其是對δ和μ阿片受體。Shan等[16]發(fā)現(xiàn)當MENK單獨使用、MENK與IL-2或IFN-γ聯(lián)用時，可以顯著增加CD4+T細胞的擴增及分子表達，通過直接或間接途徑促使其他免疫細胞如巨噬細胞、樹突狀細胞分泌IL-2、IFN-γ；還發(fā)現(xiàn)MENK可以激活T細胞，增加對鼠S180腫瘤細胞的細胞毒性作用，增加鼠的生存率[17]。分子顯像證實δ受體和κ阿片受體在T細胞表面主要呈現(xiàn)可調節(jié)表達。MENK體外刺激能促進小鼠CD4+T細胞阿片受體mRNA轉錄的高表達[18]；Li等[17]通過研究發(fā)現(xiàn)，MENK與表達增多的阿片受體結合后在CTL活化中起到關鍵作用；Zagon[19]證明阻斷阿片受體軸能抑制T細胞增殖?？梢奙ENK對免疫細胞的調節(jié)作用，不僅能增加CD4+T細胞的數(shù)量，同時也通過增加其表面阿片受體的含量來間接調節(jié)。CD4+Foxp3+調節(jié)性T細胞是一類控制體內自身免疫反應性的T細胞亞群。最近，在大鼠及人類腫瘤模型表明Foxp3+Tregs的數(shù)量在外周血、骨髓、腫瘤外周淋巴結和腫瘤組織均有所增加[20]。因此Tregs成為腫瘤免疫治療的一個致命障礙。我們的研究認為MENK能抑制大鼠Tregs的活性和通過下調Tregs抑制腫瘤的進展[4]，還能通過抑制Tregs調節(jié)腫瘤患者外周血淋巴細胞亞群，延長大多數(shù)腫瘤患者的生命[21]。

1.3 對NK細胞的作用 NK細胞具有直接殺傷靶細胞的作用，能夠通過釋放含穿孔素蛋白和顆粒酶的顆粒或FasL誘導凋亡的非特異性殺傷，還可以通過抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)，利用細胞表面的IgG Fc受體來識別與抗體特異性結合的靶細胞。因此，作用于任何途徑都能調節(jié)NK細胞介導的殺傷活性，使調節(jié)NK細胞能應用于腫瘤及免疫相關疾病的治療。1988年Faith[22]發(fā)現(xiàn)MENK能激活NK細胞、加強NK細胞的活性、抑制肺轉移癌進展。Hua等[23]發(fā)現(xiàn)在10-12mol/L時，MENK實驗組的NK細胞陽性率明顯增高。在研究癌癥患者免疫細胞時，通過FCM檢測NK細胞(CD16+、CD56+)表面標志物發(fā)現(xiàn)用MENK治療后癌癥患者體內NK細胞百分率明顯增加[21]。體內注射MENK能增強流感病毒A感染小鼠的NK細胞活性[24]。接下來的許多研究支持MENK在適宜濃度時能加強正常機體和癌癥患者外周血中NK細胞活性，上調免疫系統(tǒng)功能，特別是對于NK細胞水平很低的患者，這種活性的提升更為顯著，促進分泌細胞因子如IL-2、IL-12和TNF-α[25,26]。

1.4 對樹突狀細胞的作用 樹突狀細胞(DC)是一類成熟時具有許多樹突樣突起的、能夠識別、攝取和加工外源性抗原并將抗原提呈給初始T細胞并誘導T細胞活化增殖的、功能最強的抗原提呈細胞。成熟DC可加強組織相容性復合體MHC和共刺激分子CD40、CD80/CD86高表達、遷移到次級淋巴器官激活T細胞分化為Th1及Th2，因此促進DC成熟有助于發(fā)揮其體內免疫調節(jié)作用[27]。Meng等[28]發(fā)現(xiàn)MENK具有雙向調節(jié)的作用，在生理濃度為10-15～10-11mol/L時能促進DC細胞增殖成熟，當濃度高達10-6或低于10-18mol/L時會延遲樹突狀細胞的生長。MENK刺激下，DC的突起增多、CD40、CD80和MHCⅡ共刺激分子的表達增加，提示MENK促進了DC的成熟，增強其免疫學功能成熟，RT-PCR實驗顯示MENK能夠增加骨髓源性樹突狀細胞δ、κ受體的表達，分泌更高水平的促炎細胞因子IL-12P70、TNF-α[29-31]。體內外實驗表明MENK可以誘導DCs主要極化為髓樣樹突狀細胞mDC亞型，而不是漿樣樹突狀細胞pDC，這有利于Th1細胞介導的免疫反應[31]。Toll樣受體(TLRs)表達于樹突狀細胞表面，可以通過上調DC表面的MHC Ⅱ 類分子和共刺激分子，促進DC的成熟，指導抗原特異的免疫應答尤其是Th1型反應的產生。MENK可以促進樹突狀細胞TLR-4的表達，TLR-4活化后激活NF-κB信號通路，上調了Th1型細胞因子的表達和釋放，激活獲得性免疫系統(tǒng)將病原體及其產物清除[32]。

1.5 對B淋巴細胞的作用 B細胞在骨髓內發(fā)育歷經從淋巴樣前體細胞到未成熟的B細胞，之后遷移到外周免疫器官與組織如淋巴結、脾發(fā)育成熟至細胞表面出現(xiàn)完整的IgM、IgD分子，具有分泌抗體、提呈抗原和免疫調節(jié)等功能。Gabrilovac等[15]在對雌性和雄性鼠分別予以MENK后發(fā)現(xiàn)，雄性鼠LPS刺激的脾源性B淋巴細胞的增殖能力增強，但在雌鼠中作用相反；同時，若在注射MENK之前注射納曲酮該增殖作用會被可逆性抑制。Zagon等[33]研究發(fā)現(xiàn)MENK對B細胞生長具有雙向調控作用，即在低濃度時抑制細胞生長，高濃度時卻促進細胞生長。適宜濃度的MENK能通過與受體作用增加CD2、CD4、CD8等受體分子的表達。

1.6 對細胞因子的作用 MENK通過影響細胞因子的釋放間接調控免疫反應和細胞增殖。IL-2是免疫調節(jié)中起重要作用的細胞因子，它能激活多種免疫細胞，特別是誘導T淋巴細胞增殖，發(fā)揮免疫效應；同時能促進巨噬細胞和NK細胞等的增殖，還具有誘生分泌多種細胞因子等免疫活性物質的作用，通過復雜的免疫調節(jié)使機體表現(xiàn)出抗感染、抗腫瘤、改善免疫功能和狀態(tài)等。有研究發(fā)現(xiàn)，MENK能促進人T細胞IL-2分泌和IL-2受體高表達[16]。MENK還能夠增強DC對IL-12的分泌，IL-12是DC的功能性產物，其含量的增高以及抗原提呈功能方面的成熟和形態(tài)學上的成熟是對應的，IL-12含量的增加可以進一步促進CD4+T細胞增殖，增強CTL殺傷活性，刺激T細胞和NK細胞產生IFN-γ，抑制IgE合成[30]。IFN-γ是一種具有免疫調節(jié)作用的干擾素，主要由活化的Th細胞和NK細胞產生，其生物學功能主要是免疫調節(jié)，誘導多種抗原提呈細胞表達MHCⅠ/Ⅱ類分子，活化單核-巨噬細胞、中性粒細胞、NK細胞，促進Th1細胞發(fā)育和抑制Th2細胞活化和增殖，刺激B細胞產生的抗體類型向調理素方向轉變。

2 對免疫相關疾病的作用

2.1 抗腫瘤 1980年后大量研究發(fā)現(xiàn)MENK參與腫瘤細胞生長調控。Zagon等[18]使用多種癌細胞系，通過一系列體內外實驗證明，MENK通過與其受體結合抑制腫瘤細胞增殖。MENK治療一段時間可使腫瘤發(fā)生率降低，腫瘤周期延長，同時能延長施藥對象的生存期。阿片生長因子(OGF)是腫瘤形成的抑制因子，OGF-OGFr軸能通過延遲細胞周期G1/S期來緊張性地調節(jié)細胞增殖。對胰腺癌的研究發(fā)現(xiàn)，OGF亦可直接通過增加P21周期蛋白依賴抑制性激酶或減少細胞周期依賴性激酶CDK-2的作用方式抑制DNA合成和胰腺癌細胞增殖[34]。Donahue等[35]在研究卵巢癌時發(fā)現(xiàn)，對荷瘤鼠以MENK治療后腫瘤結節(jié)數(shù)量減少42%，腫瘤累積重量減少69%，可以看出OGF能在很大程度上抑制腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。肝母細胞瘤是2歲以下兒童最常見的惡性肝臟腫瘤，手術聯(lián)合化療能顯著提高生存率，但傳統(tǒng)化療藥物的毒性誘導中性粒細胞減少，嚴重增加全身性感染的幾率及其并發(fā)癥，而應用MENK在抑制腫瘤細胞生長的同時不會引起類似副反應[36]。對甲狀腺癌的研究發(fā)現(xiàn)，OGF-OGFr軸也存在于甲狀腺未分化癌ATC細胞中，可逆性地以受體介導的劑量依賴性方式，10-6mol/L時96 h的周期內OGF對腫瘤細胞復制抑制率達到13%-30%[37]。神經母細胞瘤是兒童最常見的顱外腫瘤，屬于神經內分泌性腫瘤，MENK對SH-SY5Y瘤細胞的生長有明顯的抑制作用，主要將細胞抑制于生長周期的G0/G1期，并通過影響細胞周期相關蛋白及酶類表達和活性(p21Waf1/Cip1、p16INK4a蛋白表達量增加，磷酸Rb蛋白表達量降低，細胞內SOD酶活性增加)和鈣離子濃度等多種途徑發(fā)揮抑制細胞增殖的作用[38,39]。體外實驗還證實MENK與化療藥物聯(lián)用可增強藥物的抗腫瘤效果[40,41]。MENK通過將細胞抑制于生長周期的G0/G1期對乳腺癌MCF-7/ADR細胞發(fā)揮抑制細胞生長作用[42]?；贛ENK 對免疫細胞的調節(jié)恢復作用，對于因放療化療免疫系統(tǒng)受損的癌癥患者而言，MENK將有望作為治療物幫助恢復紊亂的免疫系統(tǒng)，同時可輔助化療，減少其副作用。

2.2 抗自身免疫病 多發(fā)性硬化癥是一種慢性、炎癥性、自身免疫性疾病，由于目前病因未明仍缺乏特異性療法。MENK被報道可以改善小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎癥狀，治療機制與抑制星形膠質細胞增殖有關[3]。應用代謝組學分析顯示，MENK治療后通過配體-受體途徑可增加細胞內酪氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸及甘氨酰甘氨酸含量，甘氨酰甘氨酸可抑制星形膠質細胞細胞增殖，增加髓鞘再生相關基因的表達，從而發(fā)揮對多發(fā)性硬化癥的神經保護作用[43]。OGF-OGFr軸可通過與P16、P21這一類周期素依賴性激酶抑制物相互作用，而在細胞分裂的G1期參與調節(jié)，最終抑制細胞增殖，以緊張性激活的方式抑制用PHA植物素刺激的T細胞增殖，嚴格地維持著細胞更新與恢復機制，從而抑制小鼠的實驗性自身免疫性腦脊髓炎，進而調節(jié)自身免疫病[19]。

2.3 抗AIDS 獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起的，患者受到HIV感染后體內CD4+T細胞顯著減少，導致體液和細胞免疫功能均出現(xiàn)缺陷，感染者免疫力低下，因此提高機體免疫力可減少機會感染、延長HIV感染者的生存時間。有報道刺激OGFr可抑制淋巴細胞中該病毒的增殖[44]。在對AIDS患者應用MENK治療后發(fā)現(xiàn)外周血中的CD4+T細胞亞群的活性和數(shù)量有顯著增加，可以延緩病程、減輕癥狀[45]，MENK所具有的鎮(zhèn)痛作用還有利于緩解患者晚期的疼痛。Li等[46]研究MENK延長猿免疫缺陷病毒(SIV)感染淋巴細胞生存的信號通路，結果顯示MENK明顯增加細胞內鈣含量并保持在高水平，同時提高PKC活性水平和磷酸化的胞間信號調節(jié)激酶水平，所以MENK使細胞生存率顯著增加可能是通過Ca2+-PKC-MAPK級聯(lián)作用在病毒感染早期階段發(fā)揮作用。多年研究總結出一套有效提高機體免疫力的方案，該方案是通過間歇使用MENK來誘導可持續(xù)的免疫應答，可應用于所有與免疫力低下有關的疾病的治療[45]。

2.4 抗炎癥、抗微生物感染作用 炎癥是機體對損傷因子產生的防御性的反應，是一種損傷與抗損傷的統(tǒng)一表現(xiàn)。MENK 通過調節(jié)促炎癥和抗炎癥細胞因子來調節(jié)炎癥反應[47]。白細胞分泌的MENK在炎癥反應中起到鎮(zhèn)痛和免疫調節(jié)的重要作用[48]。Owczarek等[49]通過對比潰瘍性結腸炎及克羅恩氏病患者腸炎病灶切片后發(fā)現(xiàn)，MENK的含量明顯高于非炎癥部位。Spetea等[50]研究發(fā)現(xiàn)關節(jié)炎接種鼠的紋狀體、額皮質和枕皮質組織MENK含量增加，最為明顯的是腰部脊髓中MENK增加達到232%。有文獻報道，適宜劑量的MENK與重組小鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子聯(lián)合應用，對瘧原蟲感染的小鼠具有較好的療效，該治療組小鼠巨噬細胞的吞噬活性顯著增強[51]。MENK在流感病毒感染的小鼠中能通過免疫調節(jié)發(fā)揮間接抗病毒作用[52]。以上發(fā)現(xiàn)均表明MENK在炎癥反應與抗炎癥反應的平衡調節(jié)中發(fā)揮著重要的作用。

2.5 肥胖癥的治療 新興的研究表明免疫細胞包括單核細胞、粒細胞和淋巴細胞可以調控代謝穩(wěn)態(tài)及肥胖癥。兩組先天淋巴細胞(ILC2s)存在于人類白色脂肪組織，研究發(fā)現(xiàn)ILC2s可產生MENK直接作用于脂肪細胞上調Ucp1的表達、促進白色脂肪組織褐色化，增加熱量消耗從而限制肥胖癥；同時發(fā)現(xiàn)內生的IL-33對于維持正常白色脂肪組織內ILC2反應和限制自發(fā)性肥胖癥的發(fā)展是必要的，IL-33刺激后ILC2產生MENK量明顯增加[53]。因此對于IL-33/ILC2/褐色化途徑的目標調節(jié)可以為肥胖和肥胖相關疾病的治療提供新方法。

MENK的生物學功能已經比較確定，其臨床應用也取得了一定進展。糖尿病患病率在全球快速增長并成為嚴重危害我國人民身體健康的疾病，2型糖尿病是一種免疫相關性慢性炎癥性疾病，免疫細胞介導的β細胞的免疫損傷可能在2型糖尿病的發(fā)生與發(fā)展中起核心作用?；贛ENK介導的免疫干預作用，所以從理論上對于存在免疫損傷缺陷的糖尿病患者而言，MENK將有望作為治療物來幫助恢復紊亂的免疫系統(tǒng)，起到輔助降糖作用提供一個新的思考方向。相信隨著對MENK研究的不斷深入，將進一步闡明其免疫調節(jié)機制，提高MENK的治療效果和擴大其應用領域。

[1] Ball R.Opioid peptides and psychiatric illness[J].Br J Hosp Med,1987,37(1):49-50，52.

[2] Plotnikoff NP,Faith RE,Murgo AJ,etal.Methionine enkephalin:a new cytokine-human studies[J].Clin Immunol Immunopathol,1997,82(2):93-101.

[3] Campbell AM,Zagon IS,McLaughlin PJ.Astrocyte proliferation is regulated by the OGF-OGFr axis in vitro and in experimental autoimmune encephalomyelitis[J].Brain Res Bull,2013,90:43-51.

[4] Li X,Meng Y,Plotnikoff NP,etal.Methionine encephalin(MENK)inhibits tumor growth through regulating CD4+Foxp3+regulatory T cells(Tregs)in mice[J].Cancer Biol Ther,2015,16(3):450-459.

[5] Zagon IS,Verderame MF,McLaughlin PJ.The biology of the opioid growth factor receptor(OGFr)[J].Brain Res Brain Res Rev,2002,38(3):351-376.

[6] Valdes-Tovar M,Escobar C,Solis-Chagoyan H,etal. Constant light suppresses production of Met-enkephalin-containing peptides in cultured splenic macrophages and impairs primary immune response in rats[J].Chronobiol Int,2015,32(2):164-177.

[7] Foris G,Medgyesi GA,Gyimesi E,etal.Met-enkephalin induced alterations of macrophage functions[J].Mol Immunol,1984,21(8):747-750.

[8] Foris G,Medgyesi GA,Hauck M.Bidirectional effect of met-enkephalin on macrophage effector functions[J].Mol Cell Biochem,1986,69(2):127-137.

[9] Vujic V,Stanojevic S,Dimitrijevic M.Methionine-enkephalin stimulates hydrogen peroxide and nitric oxide production in rat peritoneal macrophages:interaction of mu,delta and kappa opioid receptors[J].Neuroimmunomodulation,2004,11(6):392-403.

[10] Zhao D,Plotnikoff N,Grifin N,etal.Methionine encephalin,its role in immunoregulation and cancer therapy[J].Int Immunopharmacol,2016,37:59-64.

[11] Chen W,Liu J,Meng J,etal.Macrophage polarization induced by neuropeptide methionine encephalin(MENK) promotes tumoricidal responses[J].Caner Immunol Immunother,2012,61(10):1775-1768.

[12] 陳文娜,劉金玲,賈連群，等.蛋氨酸腦啡肽調控骨髓巨噬細胞前體分化信號通路的研究[J].中國藥學雜志,2013,48(18):1550-1554.

[13] Wybran J,Appelboom T,Famaey JP,etal.Suggestive evidence for receptors for morphine and methionine-enkephalin on normal human blood T lymphocytes[J].J Immunol，1979,123(3):1068-1070.

[14] 夏燕杰,孫立群,李榮輝，等.蛋氨酸腦啡肽單獨或聯(lián)合IL-2、IFN-γ對小鼠CD4+T細胞作用的研究[J].微生物學雜志,2013,33(2):33-38.

[15] Gabrilovac J,Marotti T.Gender-related differences in murine T- and B-lymphocyte proliferative ability in response to in vivo[Met(5)]enkephalin administration[J].Eur J Pharmacol,2000,392(1-2):101-108.

[16] Shan F,Xia Y,Wang N,etal.Functional modulation of the pathway between dendritic cells(DCs) and CD4+T cells by the neuropeptide:methionine enkephalin (MENK)[J].Peptides,2011,32(5):929-937.

[17] Li W,Chen W,Herberman RB,etal.Immunotherapy of cancer via mediation of cytotoxic T lymphocytes by methionine enkephalin(MENK)[J].Cancer Lett,2014,344(2):212-222.

[18] 夏燕杰,于 晶,梁金花.不同濃度蛋氨酸腦啡肽對小鼠CD4+T細胞表面三種阿片受體作用的比較研究[J].微量元素與健康研究,2013,30(3):4-6.

[19] Zagon IS,Donahue RN,Bonneau RH,etal.T lymphocyte proliferation is suppressed by the opioid growth factor([Met(5)]-enkephalin)-opioid growth factor receptor axis:implication for the treatment of autoimmune diseases[J].Immunobiology,2011,216(5):579-590.

[20] Ge Y,Domschke C,Stoiber N,etal.Metronomic cyclophosphamide treatment in metastasized breast cancer patients:immunological effects and clinical outcome[J].Cancer Immunol Immunother,2012,61(3)：353-362.

[21] Wang Q,Gao X,Yuan Z,etal.Methionine encephalin(MENK) improves lymphocyte subpopulations in human peripheral blood of 50 cancer patients by inhibiting regulatory T cells(Tregs)[J].Hum Vaccin Immunother,2014,10(7):1836-1840.

[22] Faith RE,Murgo AJ.Inhibition of pulmonary metastases and enhancement of natural killer cell activity by methionine-enkephalin[J].Brain Behav Immun,1988,2(2):114-122.

[23] Hua H,Lu C,Li W,etal.Comparison of stimulating effect on subpopulations of lymphocytes in human peripheral blood by methionine enkephalin with IL-2 and IFN-γ[J].Hum Vaccin Immunother,2012,8(8):1082-1089.

[24] Burger RA.Role of vascular endothelial growth factor inhibitors in the treatment of gynecologic malignancies[J]. J Gynecol Oncol,2010,21(1):3-11.

[25] McLaughlin PJ,Zagon IS.The opioid growth factor-opioid growth factor receptor axis:homeostatic regulator of cell proliferation and its implications for health and disease[J]. Biochem Pharmacol,2012,84(6):746-755.

[26] Zalys R,Zagon IS,Bonneau RH,etal.In vivo effects of chronic treatment with [MET5]-enkephalin on hematological values and natural killer cell activity in athymic mice[J].Life Sci,2000,66(9):829-834.

[27] Hargadon KM,Forrest OA,Reddy PR.Suppression of the maturation and activation of the dendritic cell line DC2.4 by melanoma-derived factors[J].Cell Immunol,2012,272(2):275-882.

[28] Meng Y,Wang Q,Zhang Z,etal.Synergistic effect of methionine encephalin (MENK) combined with pidotimod(PTD) on the maturation of murine dendritic cells (DCs)[J].Hum Vaccin Immunother,2013,9(4):773-783.

[29] 魏 澍,劉金玲,單風平,等.蛋氨酸腦啡肽對GM-CSF誘導的小鼠骨髓來源樹突狀細胞成熟及TLR-4表達的協(xié)同作用[J].現(xiàn)代免疫學,2013,33(2):94-99.

[30] 王 寧,夏燕杰,單風平.蛋氨酸腦啡肽對樹突狀細胞表型及功能的影響[J].中國免疫學雜志,2010,26(9):814-817.

[31] Liu J,Chen W,Meng J,etal.Induction on differentiation and modulation of bone marrow progenitor of dendritic cell by methionine enkephalin(MENK) [J]. Cancer Immunol Immunother,2012,61(10):1699-1711.

[32] 劉金玲,單風平.蛋氨酸腦啡肽對GM-CSF誘導的小鼠骨髓來源樹突狀細胞TLR-4和TNF-α表達影響[J].東北農業(yè)大學學報,2013,44(3):5-10.

[33] Zagon IS,Donahue RN,Bonneau RH,etal.B lymphocyte proliferation is suppressed by the opioid growth factor-opioid growth factor receptor axis:Implication for the treatment of autoimmune diseases[J].Immunobiology, 2011,216(1-2):173-183.

[34] Zagon IS,McLaughlin PJ.Targeting opioidergic pathways as a novel biological treatment for advanced pancreatic cancer[J].Expert Rev Gastroenterol Hepatol, 2012,6(2):133-135.

[35] Donahue RN,McLaughlin PJ,Zagon IS.The opioid growth factor (OGF) and low dose naltrexone (LDN) suppress human ovarian cancer progression in mice[J].Gynecol Oncol,2011,122(2):382-388.

[36] Rogosnitzky M,Finegold MJ,McLaughlin PJ,etal.Opioid growth factor (OGF) for hepatoblastoma:a novel non-toxic treatment[J].Invest New Drugs,2013,31(4):1066-1070.

[37] McLaughlin PJ,Zagon IS,Park SS,etal.Growth inhibition of thyroid follicular cell-derived cancers by the opioid growth factor (OGF)-opioid growth factor receptor (OGFr) axis[J].BMC Cancer,2009,9:369.

[38] 劉霏霏,梁宇光,廖 麗,等.蛋氨酸腦啡肽對SH-SY5Y細胞的生長抑制作用及其對細胞內鈣離子濃度的影響[J].中國臨床藥理學雜志,2012,28(11):834-836.

[39] 李彥博,劉霏霏,劉 垚,等.蛋氨酸腦啡肽對神經母細胞瘤細胞生長周期的影響及其機制研究[J].中國藥物應用于監(jiān)測,2013,10(5):261-264.

[40] 李彥博,劉霏霏,曲恒燕.蛋氨酸腦啡肽與多柔比星聯(lián)用對神經母細胞瘤SH-SY5Y的生長抑制劑凋亡作用的研究[J].中國藥物應用于監(jiān)測,2015,12(5):265-267.

[41] 劉 璐,游如旭,單風平，等.蛋氨酸腦啡肽小鼠體內抗癌活性初探[J].華中科技大學學報(醫(yī)學版),2015,44(5):524-527.

[42] 田 力,劉霏霏,劉澤源.蛋氨酸腦啡肽對MCF-7/ADR生長抑制作用機制的初步研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志,2014,24(3):6-10.

[43] Zhao C,Du H,Xu L,etal.Metabolomic analysis revealed glycylglycine accumulation in astrocytes after methionine encephalin ad ministration exhibiting neuron protective effects[J].J Pharm Biomed Anal,2015,115(11):48-54.

[44] Peterson PK,Gekker G,Lokensgard JR,etal.Kappa-opioid receptor agonist suppression of HIV-1 expression in CD4+lymphocytes[J].Biochem Pharmacol,2001,61(9):1145-1151.

[45] Smith JP,Bingaman SI,Mauger DT,etal.Opioid growth factor improves clinical benefit and survival in patients with advanced pancreatic cancer[J].Open Access J Clin Trials,2010,2010(2):37-48.

[46] Li PF,Hao YS,Zhang FX,etal.Signaling pathway involved in methionine enkephalin-promoted survival of lymphocytes infected by simian immunodeficiency virus in the early stage in vitro[J].Int Immunopharmacol,2004,4(1):79-90.

[47] Blalock JE.The immune system as the sixth sense[J].J Intern Med,2005,257(2):126-138.

[48] Janson W,Stein C.Peripheral opioid analgesia[J].Curr Pharm Biotechnol,2003,4(4):270-274.

[49] Owczarek D,Cibor D,Mach T,etal.Met-enkephalins in patients with inflammatory bowel diseases[J].Adv Med Sci,2011,56(2):158-64.

[50] Spetea M,Rydelius G,Nylander I,etal.Alteration in endogenous opioid systems due to chronic inflammatory pain conditions[J].Eur J Pharmacol,2002,435(2-3):245-252.

[51] Kaur A,Kinhikar AG,Singh PP.Bioimmunotherapy of rodent malaria:co-treatment with recombinant mouse granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and an enkephalin fragment peptide Tyr-Gly-Gly[J].Acta Trop,2004,91(1):27-41.

[52] 鄂 爽,單風平.蛋氨酸腦啡肽(MEK)抗B型流感病毒感染作用的研究[J].微生物學雜志,2009,29(6):83-87.

[53] Brestoff JR,Kim BS,Saenz SA,etal.Group 2 innate lymphoid cells promote beiging of white adipose tissue and limit obesity[J].Nature,2015,519(3):242-246.

[收稿2016-12-20 修回2017-01-18]

(編輯 張曉舟)

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.05.034

①本文受遼寧省科技廳公益項目(2014001016)和遼寧省教育廳項目(L2015567)資助。

張克瑩(1985年-)，女，在讀博士，主治醫(yī)師，主要從事糖尿病與免疫調節(jié)治療方面的研究，E-mail：drzhangky@163.com。

及指導教師：都 健(1962年-)，女，博士，教授，博士生導師，主要從事糖尿病治療研究， E-mail：dujian.com@medmail.com.cn。 單風平(1959年-)，男，博士,教授，博士生導師，主要從事抗腫瘤免疫研究， E-mail：profshan9@163.com。

R392.6

A

1000-484X(2017)05-0788-05