帥云飛,李鑫,王孟清,荀春錚,曾慶佳,李雪冰

(湖南中醫(yī)藥大學(xué) 1. 第一附屬醫(yī)院兒科，2.中醫(yī)診斷學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410007 )

五虎湯對(duì)病毒誘發(fā)幼年哮喘大鼠炎性細(xì)胞因子表達(dá)影響

帥云飛1,李鑫2,王孟清1,荀春錚1,曾慶佳1,李雪冰1

(湖南中醫(yī)藥大學(xué) 1. 第一附屬醫(yī)院兒科，2.中醫(yī)診斷學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410007 )

RSV(respiratory syncytial virus, 呼吸道合胞病毒)感染介導(dǎo)的Th1/Th2、Th17/Treg失衡誘導(dǎo)兒童支氣管哮喘的發(fā)生發(fā)展[1-2]。五虎湯是由麻黃、杏仁、石膏、甘草、細(xì)茶葉組成的治療小兒哮喘的經(jīng)典名方。前期研究表明，五虎湯抑制哮喘患兒CD80、CD86及IL-4、IL-5表達(dá)，促進(jìn)IL-2表達(dá)[4]。因此，本文擬采用RSV誘導(dǎo)聯(lián)合OVA(ovalbumin, 卵清白蛋白)致敏復(fù)制幼年大鼠哮喘模型，研究五虎湯對(duì)Th1/Th2、Th17/Treg 介導(dǎo)IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-17炎性細(xì)胞因子影響，明確其治療病毒誘發(fā)哮喘的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 受試藥物 五虎湯由本院藥劑科提供。制備方法：6倍水先煎麻黃30 min ，去上沫，納杏仁、石膏、甘草，細(xì)茶葉煎1 h，連續(xù)提取2次，分別濃縮至含4.752、2.376、1.188 g生藥·kg-1。

1.2 儀器、試劑及病毒 酶標(biāo)儀，318C+型，上海沛歐分析儀器有限公司；低溫臺(tái)式高速離心機(jī)，HR/T 16M型，赫西儀器裝備有限公司。IL-10、IL-12、IFN-γ及IL-17ELISA試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司提供，批號(hào)：EK0418、EK0520、EK0978、EK1527)。RSV，武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)部病毒研究所提供。1.3 動(dòng)物分組及給藥 SPF級(jí)SD大鼠60只，♂/♀，體質(zhì)量(60±10)g，湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[許可證號(hào)：SCXK(湘)2013-0004]。參照文獻(xiàn)[5]，制備RSV誘導(dǎo)OVA致敏大鼠哮喘模型。造模成功后，分層隨機(jī)分為五虎湯高、中、低劑量組、哮喘模型組及陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只。五虎湯高、中及低劑量組po給予4.752、2.376、1.188 g·(kg·d)-1藥液，空白對(duì)照組、哮喘模型組分別po等容積雙蒸水，陽(yáng)性對(duì)照組po地塞米松片2.4 mg·(kg·d)-1，2次/d，持續(xù)14 d。

1.4 檢測(cè)指標(biāo) 末次給藥后，禁食12 h，處死動(dòng)物，采集支氣管肺泡灌洗液(BALF)，檢測(cè)細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類計(jì)數(shù)；取肺組織，行組織病理學(xué)檢查；腹主動(dòng)脈采血， 3 000 r·min-1離心10 min，取血清，ELISA法檢測(cè)血清IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-17表達(dá)情況。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)肺組織病理影響 模型組可見支氣管壁大量炎性浸潤(rùn)，平滑肌層增厚，杯狀細(xì)胞增生，上皮細(xì)胞大量脫落。五虎湯治療后呈劑量依賴性明顯抑制支氣管壁炎性浸潤(rùn)，平滑肌層恢復(fù)正常，少量杯狀細(xì)胞分布，上皮細(xì)胞少量脫落。

2.2 對(duì)BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類計(jì)數(shù)影響 模型組白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞比例均較空白組明顯升高(P<0.01)。五虎湯高、中劑量白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞均明顯下降(P<0.01，P<0.05)。

2.3 對(duì)IFN-γ、IL-12、IL-10、IL-17表達(dá)影響 模型組較空白組IFN-γ、IL-12降低，IL-10、IL-17升高(P<0.05)。五虎湯治療后高、中劑量較模型組IFN-γ、IL-12升高，IL-10、IL-17降低(P<0.01，P<0.05)。

3 討論

五虎湯是治療小兒哮喘的經(jīng)典名方，前期研究表明其能抑制呼吸道合胞病毒復(fù)制，調(diào)控IL-2、IL-4 、IL-5等炎性因子表達(dá)[3，6]。RSV感染介導(dǎo)的Th1/Th2、Th17/Treg失衡是引起兒童支氣管哮喘的始動(dòng)因素[1-2]，IL-12誘導(dǎo)Th 1細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ[7]，而失衡的Th2細(xì)胞誘生IL-10，Th17細(xì)胞失衡則促進(jìn)IL-17的大量生成][8]。研究顯示，五虎湯能促進(jìn)IFN-γ、IL-12表達(dá)，抑制IL-10、IL-17表達(dá)，并劑量依賴性明顯抑制支氣管壁炎性浸潤(rùn)，平滑肌層恢復(fù)正常。結(jié)果提示，五虎湯能顯著抑制病毒誘發(fā)的幼年大鼠哮喘氣道炎癥，其作用機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-17等表達(dá)，使失衡的Th1/Th2、Th1/Treg恢復(fù)平衡有關(guān)。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)在湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，感謝實(shí)驗(yàn)室及課題組所有老師的幫助。)

[1] Rogala B, Bozek A, Gluck J, et al. Prevalence of IgE-mediated allergy and evaluation of Th1/Th2 cytokine profiles in patients with severe bronchial asthma[J].PostepDermAlergol, 2015,32(4):274-80.

[2] Tao B, Ruan G, Wang D, et al. Imbalance of peripheral Th17 and regulatory T cells in children with allergic rhinitis and bronchial asthma[J].IranJAllergyAsthmaImmunol, 2015,14(3):273-9.

[3] 楊靜宜, 王孟清, 黃 婷, 等. 五虎湯對(duì)哮喘嬰幼兒DC刺激T淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ的影響[J].新中醫(yī),2009,41(2):66-8.

[3] Yang J Y, Wang M Q, Huang T, et al. Effect of Wu-Hu Soup on IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ stimulated by dendritic cell in young rats with virus induced asthma[J].JNewChinMed,2009,41(2):66-8.

[4] 黃 婷, 王孟清, 羅銀河, 等. 五虎湯對(duì)嬰幼兒哮喘患兒外周血樹突狀細(xì)胞表面共刺激分子表達(dá)的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2009,29(10):889-91.

[4] Huang T, Wang M Q, Luo Y H, et al.Effect of Wuhu Decoction on surface co-stimulation molecule expression of peripheral dendritic cells in infants with asthma[J].ChinJIntegratTraditWesternMed,2009,29(10):889-91.

[5] Dyer K D, Garcia-Crespo K E, Glineur S, et al. The Pneumonia virus of mice (PVM) model of acute respiratory infection[J].Viruses, 2012,4(12):3494-510.

[6] 王孟清, 羅銀河, 陳錫軍, 等. 咳喘寧對(duì)病毒誘發(fā)哮喘患兒Th亞群的調(diào)節(jié)作用[J].中華中醫(yī)藥雜志,2007,22(7):481-3.

[6] Wang M Q, Luo Y H, Chen X L, et al. Effect of Kechuanning on adjusting cytokine in children with virus-induced asthma[J].ChinaJTraditChinMedPharm,2007,22(7):481-3.

[7] Yu S, Jia L, Zhang Y, et al. IL-12 induced the generation of IL-21- and IFN-γ-co-expressing poly-functional CD4+T cells from human naive CD4+T cells[J].CellCycle,2015,14 (21):3362-72.

[8] 李承德, 周文賓, 孫 艷, 等. 黃芪多糖對(duì)哮喘大鼠Th17/Treg細(xì)胞因子及肺部炎癥的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2013,29(9):1275-8.

[8] Li C D, Zhou W B, Sun Y, et al. Effects of astragalus polysaccharide on Thl7/Treg associated cytokines and airway inflammation in OVA-induced asthmatic rats[J].ChinPharmacolBull,2013, 29(9): 1275-8.

Effect of Wu-Hu Soup on serum inflammatory cytokines in young rats with virus induced asthma

SHUAI Yun-fei1, LI Xin2, WANG Meng-qing1, XUN Chun-zheng1, ZENG Qing-jia1, LI Xue-bing1

(1.DeptofPaediatrics,TheFirstHospitalofHunanUniversityofChineseMedicine,Changsha410007,China; 2.HunanProvincialKeyLaboratoryofDiagnosticsinChineseMedicine,HunanUniversityofChineseMedicine,Changsha410007,China)

五虎湯；呼吸道合胞病毒；幼年哮喘大鼠；IFN-γ；IL-10；IL-12；IL-17

Wu-Hu Soup; respiratory tract virus; young rats with virus induced asthma; IFN-γ;IL-10;IL-12;IL-17

時(shí)間：2016-12-27 16:13

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20161227.1613.052.html

2016-09-03,

2016-12-06

湖南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 13JJ3105)；湖南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(No 2015JC3076)

帥云飛(1980-)，男，主治醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)藥診治小兒呼吸疾病的基礎(chǔ)與臨床，E-mail:yuanshuai20063048@163.com; 王孟清(1963-)，男，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：小兒呼吸疾病的中醫(yī)藥防治，通訊作者,E-mail:wmqwmq2009@sina.com; 李 鑫(1986-)，男，助理研究員，研究方向：中藥及復(fù)方作用機(jī)制，通訊作者,E-mail:lixin20082005@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.01.026

A

1001-1978(2017)01-0145-02

R-332；R289.5；R373.1；R392.12；R725.622.505