何振伯 王洪娟 張建平 高 瑜

（天津市寶坻區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 301800）

血清學(xué)檢測(cè)在疫病防控中的應(yīng)用

何振伯 王洪娟 張建平 高 瑜

（天津市寶坻區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 301800）

血清學(xué)檢測(cè)在動(dòng)物疫病免疫效果評(píng)估、疫病診斷、流行病學(xué)調(diào)查以及動(dòng)物疫情預(yù)警預(yù)報(bào)等方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。本文主要介紹了獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測(cè)的目的，實(shí)際生產(chǎn)中血清的采集制備以及常用的血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)。

血清學(xué)檢測(cè) 應(yīng)用

動(dòng)物疫病是影響?zhàn)B殖業(yè)快速發(fā)展、危害人民健康和社會(huì)安定的重要因素之一。動(dòng)物疫病，是指動(dòng)物被病毒、致病菌或寄生蟲感染而發(fā)生的傳染病。對(duì)人與動(dòng)物危害嚴(yán)重，需要采取緊急、嚴(yán)厲的強(qiáng)制預(yù)防、控制、撲滅等措施，否則可能造成重大經(jīng)濟(jì)損失。從世界衛(wèi)生組織的資料顯示，75%的動(dòng)物疫病可以傳染給人，70%人的疫病至少可以傳染給一種動(dòng)物。

近些年來，隨著國際國內(nèi)動(dòng)物疫病對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)、人民身體健康和社會(huì)衛(wèi)生安全的危害越來越大，動(dòng)物疫病免疫及監(jiān)測(cè)技術(shù)的用于也越來越廣泛。通過疫病檢測(cè)，能夠準(zhǔn)確分析出動(dòng)物疫病的流行態(tài)勢(shì)，同時(shí)對(duì)其可能造成的危害進(jìn)行預(yù)警預(yù)測(cè)，從而有針對(duì)性的采取措施進(jìn)行疫病控制，避免疫病暴發(fā)造成的傷害。因此，科學(xué)開展疫病檢測(cè)，尤其是開展血清學(xué)檢測(cè)，可有效地預(yù)防疫病的發(fā)生，進(jìn)一步提高疫病的防控效果。

1 血清學(xué)檢測(cè)的目的

1.1 疫病監(jiān)測(cè)預(yù)警預(yù)報(bào)

血清學(xué)檢測(cè)是疫病監(jiān)測(cè)預(yù)警預(yù)報(bào)的重要手段之一，通過分批、分期、分階段地對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的家禽進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，可以準(zhǔn)確地了解掌握養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)家禽的免疫效果、健康狀況，從而制定相應(yīng)的疫病防控措施，提高防控效果。

1.2 免疫評(píng)估

養(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)家禽過程中，疫苗免疫是必不可少的一部分，而運(yùn)用血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)開展疫苗免疫效果評(píng)估又是重中之重，血清學(xué)檢測(cè)可有效評(píng)估疫苗免疫是否可靠、免疫方式是否合理有效、免疫程序是否需要調(diào)整等。天津地區(qū)，各級(jí)疫病防控機(jī)構(gòu)每年開展春、秋2次集中采樣檢測(cè)和日常月檢測(cè)，這些檢測(cè)都在動(dòng)物群體的免疫評(píng)估中發(fā)揮了重要作用。

今年，我們?cè)诙c(diǎn)示范點(diǎn)跟蹤分批分階段采集了家禽的血清學(xué)樣品進(jìn)行雞新城疫和雞傳染性支氣管炎抗體檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果指導(dǎo)養(yǎng)殖戶及時(shí)對(duì)免疫抗體偏低的雞群進(jìn)行補(bǔ)免，確保雞群長(zhǎng)期處于較高的免疫保護(hù)內(nèi)。寶坻區(qū)內(nèi)有很多規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)都在養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中定期開展血清學(xué)疫病檢測(cè)，準(zhǔn)確掌握飼養(yǎng)畜禽的疫病流行狀況，以便及時(shí)調(diào)整防控措施，進(jìn)行特定的免疫工作，提高免疫效果，已經(jīng)取得了良好的效果。隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，養(yǎng)殖場(chǎng)戶越來越重視抗體監(jiān)測(cè)，有的已經(jīng)深刻認(rèn)識(shí)到免疫抗體檢測(cè)與評(píng)估對(duì)制定本場(chǎng)的免疫程序和評(píng)定疫苗免疫效果的重要性及開展不同疫苗比對(duì)檢測(cè)在指導(dǎo)畜牧業(yè)生產(chǎn)中的重要作用。

1.3 修訂免疫程序

家禽的一生要接種很多疫苗，由于各種傳染病的易感日齡不一樣，并且有些疫苗之間存在相互干擾，不同的疫苗免疫后其抗體消長(zhǎng)規(guī)律又不同，這就要求養(yǎng)殖場(chǎng)要根據(jù)自己的實(shí)際情況制動(dòng)適合本場(chǎng)的免疫程序。準(zhǔn)確選擇免疫時(shí)間是制定免疫程序的關(guān)鍵，因?yàn)橐呙缧枰诿庖邉?dòng)物體內(nèi)進(jìn)行一定的增殖方可激發(fā)良好的免疫效果。

規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)在生產(chǎn)中根據(jù)本場(chǎng)疫情制定符合自己實(shí)際生產(chǎn)需要的免疫程序，同時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行，同時(shí)根據(jù)血清抗體檢測(cè)結(jié)果及時(shí)調(diào)整免疫程序。但是要充分考慮到雛雞階段母源抗體的影響，最好的方法是通過血清學(xué)檢測(cè)來評(píng)估母源抗體的實(shí)際效價(jià)，進(jìn)一步確定最佳的免疫時(shí)間。多方研究和實(shí)踐證明，雛雞體內(nèi)母源抗體水平到臨界值時(shí)是免疫最佳時(shí)間，如果母源抗體水平較高時(shí)免疫，會(huì)中和掉母源抗體，導(dǎo)致疫苗免疫失敗。而當(dāng)雛雞體內(nèi)母源抗體過低時(shí)再免疫，就會(huì)形成一個(gè)免疫空擋，無形中加大了感染疫病的風(fēng)險(xiǎn)。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中，定期開展血清學(xué)檢測(cè)對(duì)做好疫病防控是非常必要的，選擇合適的免疫程序，就會(huì)大大增加免疫成果的概率，提高抗病水平，降低發(fā)病率，提高經(jīng)濟(jì)效益。

1.4 疫病凈化

通過對(duì)動(dòng)物群體進(jìn)行病原特異性抗體檢測(cè)，排除掉免疫產(chǎn)生的抗體，檢測(cè)后確診為陽性個(gè)體的，進(jìn)行撲殺、深埋等無害化處理，這就是凈化疫病。實(shí)際生產(chǎn)中，通過特異性抗體檢測(cè)進(jìn)行動(dòng)物疫病凈化，縮短了對(duì)動(dòng)物疫病的控制時(shí)間，達(dá)到消滅動(dòng)物疫病的目標(biāo)，全面提升動(dòng)物疫病防控技術(shù)水平。

2 血清樣品的制備

進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)時(shí)，首先制備血清樣品。通常采用獸用采血器進(jìn)行采血，用于血清學(xué)檢測(cè)的樣品不加抗凝劑，采血量少時(shí)可在翅靜脈采血，采血量多時(shí)家禽可心臟采血。采血后將采血管傾斜30°～45°角放置，室溫靜置2～4h，待血液完全凝固，血清自然析出，冬季需要保溫，夏季需要降溫，切記采血管不能暴曬和冷凍保存，不能立即離心，確保才幾點(diǎn)額血清樣品不溶血、清亮透明。自然析出的清亮血清用吸管吸出放于塑料帶蓋離心管中，做好標(biāo)記，此時(shí)的血清可冷凍保存。

3 常用的血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)

血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)是建立在抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的基礎(chǔ)上的檢測(cè)技術(shù)，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和提高，血清學(xué)檢測(cè)方法也是不斷更新，如凝集試驗(yàn)、瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等，這些血清學(xué)檢測(cè)方法已被大多是實(shí)驗(yàn)室熟練掌握并投入使用，最常用的血清學(xué)檢測(cè)方法是凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等。

3.1 凝集試驗(yàn)

某些微生物顆粒性抗原（如細(xì)菌、紅細(xì)胞等），或吸附在乳膠、白陶土、離子交換樹脂和紅細(xì)胞的抗原與含有相應(yīng)的特異性抗體的血清混合，在有適當(dāng)電解質(zhì)存在下，抗原與抗體結(jié)合。經(jīng)過一定時(shí)間，形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊，這種現(xiàn)象稱為凝集。凝集試驗(yàn)用于測(cè)定血清中抗體含量時(shí)，將血清連續(xù)稀釋后，加等量的抗原；測(cè)定抗原含量時(shí)，將抗原連續(xù)稀釋后加等量的抗體。抗原抗體反應(yīng)時(shí)，出現(xiàn)明顯反應(yīng)終點(diǎn)的抗血清或抗原制劑的最高稀釋度稱為效價(jià)或滴度。凝集試驗(yàn)根據(jù)抗原性質(zhì)、反應(yīng)方式可分為直接凝集試驗(yàn)、間接凝集試驗(yàn)、血凝與血凝抑制試驗(yàn)等。血凝與血凝抑制試驗(yàn)是農(nóng)業(yè)部指定的禽流感的血清抗體檢測(cè)方法。

3.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

ELISA是當(dāng)前應(yīng)用最廣、發(fā)展最快的一項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)。ELISA基本原理是將抗原或抗體與某種標(biāo)記酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，讓受檢樣品和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與樣品中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與樣品中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據(jù)反應(yīng)顏色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

許多動(dòng)物疫病的診斷及監(jiān)測(cè)都是通過實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手段來實(shí)現(xiàn)，而ELISA方法又是實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物疫病檢測(cè)的主要方法之一。ELISA具有高度的敏感性和特異性，與常規(guī)的化學(xué)、生物學(xué)的檢測(cè)方法相比，具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、干擾性小、安全性高等特點(diǎn)，在防控動(dòng)物疫病中發(fā)揮著不可缺少的作用。

當(dāng)前國內(nèi)外建立的ELISA反應(yīng)體系或市售的試劑盒大多應(yīng)用于抗體水平的檢測(cè)，通過檢測(cè)抗體水平來判斷群體感染狀況或疫苗免疫效果，應(yīng)用ELISA檢測(cè)新城疫抗體、雞傳染性支氣管炎抗體、禽白血病抗體、減蛋綜合征抗體等檢測(cè)方法均已成熟并應(yīng)用于臨床，這些方法不僅具有很高的敏感性和特異性，并以其操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)樣品量大的優(yōu)勢(shì)正逐漸在基層單位普及。

利用ELISA方法定期對(duì)畜禽群體進(jìn)行常見病和多發(fā)病的普查，及時(shí)清除隱形感染個(gè)體，可以防患于未然，最大限度地降低動(dòng)物疫病帶來的損失，為動(dòng)物疫病的最終消滅打下良好的基礎(chǔ)。例如，對(duì)非免疫群體通過定期檢測(cè)，逐步淘汰抗體陽性的個(gè)體，對(duì)免疫群體應(yīng)適時(shí)進(jìn)行抗體檢測(cè)，及時(shí)進(jìn)行防疫或修訂免疫程序，從根本上根除疫病的蔓延。

目前，國內(nèi)畜禽傳染病還沒有從根本上得到控制，如雞的新城疫、馬立克氏病等仍然頻頻發(fā)生，給畜牧業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為做好疫病的防控，血清學(xué)檢測(cè)以其敏感、特異而廣泛地應(yīng)用于各種疫病的快速診斷和抗體水平檢測(cè)中，相信隨著酶標(biāo)記技術(shù)和各種單克隆抗體的出現(xiàn)，血清學(xué)檢測(cè)尤其是ELISA檢測(cè)技術(shù)將會(huì)有更廣闊的應(yīng)用前景。

天津市科委資助項(xiàng)目《蛋雞綠色健康養(yǎng)殖關(guān)鍵技術(shù)集成與應(yīng)用》（15ZXBFNC00140）

何振伯（1973-），男，高級(jí)獸醫(yī)師，本科，主要從事動(dòng)物疫病防控、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣等工作。