李巖 （山東省平邑縣畜牧獸醫(yī)局流峪畜牧獸醫(yī)站 273300）

蒙山黑山羊李氏桿菌與弓形體混合感染診治報告

李巖 （山東省平邑縣畜牧獸醫(yī)局流峪畜牧獸醫(yī)站 273300）

弓形體是人畜共患的寄生蟲病，經(jīng)常引起豬的感染發(fā)病，山羊較少感染發(fā)病，尤其與李氏桿菌混合感染實屬罕見。臨沂市平邑縣某黑山羊養(yǎng)殖戶發(fā)生了一起黑山羊弓形體與李氏桿菌混合感病例，現(xiàn)就其發(fā)病與診治情況報告如下。

1 流行病學(xué)調(diào)查

2016年7月14日該養(yǎng)羊戶飼養(yǎng)的52只黑山羊始陸續(xù)發(fā)病，至16d發(fā)病16只，死亡8只。發(fā)病后曾用青霉素、鏈霉素、板藍(lán)根注射液肌肉注射治療兩天，治療效果不好，陸續(xù)又有4只羊先后死亡。我們對該病的發(fā)生進(jìn)行臨床流行病學(xué)調(diào)查分析，綜合臨床診斷結(jié)果和實驗室診斷結(jié)果確診本次疾病的發(fā)生，是由弓形體與李氏桿菌混合感染導(dǎo)致。

2 臨床癥狀

多數(shù)病羊有體溫升高現(xiàn)象，病羊體溫高達(dá)39～41℃，發(fā)病羊離群獨立一偶，食欲不佳，個別病羊食欲廢絕，鼻鏡干燥無光澤，個別羊鼻液呈膿性，有的出現(xiàn)流涎和腹瀉，疾病后期有的病羊出現(xiàn)小便失禁情況，初期有的羊呈現(xiàn)短暫的神經(jīng)興奮期，出現(xiàn)煩躁不安的癥狀。疾病發(fā)展到中后期往往出現(xiàn)精神郁狀態(tài)，最后病羊臥地不起，起立后不愿行走，共濟失調(diào)及后軀麻痹，眼結(jié)膜出現(xiàn)潮紅，病羊眼有膿性的分泌物。一般維持2～4d后死亡。

3 剖檢變化

對發(fā)病死亡的4只黑山羊進(jìn)行剖檢，剖檢結(jié)果顯示，病死羊皮下均有出血性膠凍樣淡黃色浸潤，前肢腋下較重，心肌柔軟，心臟內(nèi)膜出血，心包有淡黃積液，胸腔液增多呈淡黃紅色，腸系膜淋巴結(jié)水腫增大，結(jié)腸段黏膜肥厚，真胃呈輕度卡他性炎癥。肝質(zhì)地變硬發(fā)脆，表面有淡黃色的壞死灶，膽囊腫大。脾、腎等實質(zhì)器官萎縮有出血點。腦、脊髓有出血點。

4 實驗室診斷

4.1 病料涂片染色鏡檢

取病死羊肝、脾、胸腔積液進(jìn)行涂片，然后分別進(jìn)行革蘭氏和姬姆薩染色干燥鏡檢。結(jié)果顯微鏡下各涂片中均發(fā)現(xiàn)散在、成對構(gòu)成 “V”型或 “Y”型排列的細(xì)菌，有的幾個菌體堆在一起，細(xì)菌兩端鈍圓，革蘭氏染色為稍彎曲的陽性小球桿菌。鏡檢該菌未發(fā)現(xiàn)莢膜和芽胞，有2～4根鞭毛[1]。姬姆薩染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)有數(shù)量不等的一端鈍圓，另一端稍尖，呈弓形或呈香蕉形的蟲體，胞漿呈淺藍(lán)色，內(nèi)含有顆粒，核染成深藍(lán)紫色，偏向鈍圓的一端，每個顯微鏡視野中可見單個、成雙或多個蟲體存在[2]。

4.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無菌采取病死羊的肝、脾、胸腔積液接種血液葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平皿中，然后放置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18～24h后取出觀察結(jié)果。結(jié)果可見培養(yǎng)基上生長有圓形、露滴狀、透明、邊緣整齊的菌落，菌落周圍有β溶血環(huán)。用45°斜射透光顯微鏡觀察菌落形態(tài)，可見菌落呈藍(lán)綠色閃光。取呈藍(lán)綠色閃光的典型菌落穿刺接種到明膠高層培養(yǎng)基中，可見細(xì)菌沿穿刺線成云霧狀生長，并且瓊脂表面以下3～5mm處形成一特殊傘狀，根據(jù)細(xì)菌的生長情況，可確定該細(xì)菌有鞭毛。

4.3 生化試驗

無菌條件下，用接種針取分離菌接種于葡萄糖、果糖、蕈塘、麥芽糖、M.R、V-P、硫化氫和靛基質(zhì)微量生化管中，然后放置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果，該菌發(fā)酵葡萄糖、果糖、蕈塘和麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。M.R和V-P反應(yīng)陽性，不產(chǎn)生硫化氫和靛基質(zhì)。

4.4 病理組織學(xué)檢驗

取新鮮病死黑山羊的肝臟、肺臟組織用10%的福爾馬林固定，石蠟包埋，切片，染色鏡檢，可見肝小葉內(nèi)有散在大小不等的壞死灶，壞死灶部位的肝細(xì)胞的輪廓清楚，細(xì)胞核已經(jīng)碎裂或溶解消失，在肝小葉的竇狀隙內(nèi)有弓形體的滋養(yǎng)體；在枯否氏細(xì)胞內(nèi)可見弓形體假囊呈圓形或橢圓形。肺泡壁毛細(xì)血管擴張充血，肺泡內(nèi)可見均勻紅染的漿液，在肺泡上皮和塵埃細(xì)胞內(nèi)可見弓形體的假囊。

4.5 動物接種試驗

取新鮮病死羊的肝臟、淋巴結(jié)，以1∶5的比例加入生理鹽水研磨，制成生理鹽水乳劑，再按每毫升加入青霉素1000U、鏈霉素100mg。然后室溫中放置1h，用前振蕩，待顆粒沉淀后，取上清液接種于小白鼠。取10只20g左右的小白鼠隨機分成試驗組和對照組，每組5只。試驗組每只腹腔接種0.5ml上述乳劑；對照組腹腔注射0.5ml生理鹽水。接種后每天進(jìn)行觀察，接種27h后試驗組有一只小白鼠發(fā)病，到66h后5只小白鼠全部發(fā)病，病鼠食欲廢絕，腹部膨大，有大量腹水，最后死亡；對照組無異常變化。采集病鼠的腹水涂片染色鏡檢，可發(fā)現(xiàn)典型的弓形體和李氏桿菌，鏡檢結(jié)果同4.1。

4.6 血清學(xué)診斷結(jié)果

采用色素試驗 （染色試驗DT），這是弓形體病特有的血清學(xué)診斷方法，特異性較高，是標(biāo)準(zhǔn)的診斷方法。抽取接種死亡的小白鼠腹水加生理鹽水反復(fù)離心洗滌2～3次，做成每毫升含有弓形體500萬個左右的標(biāo)準(zhǔn)抗原；取發(fā)病羊的血清，置 56℃水浴中滅能 30min， 用生理鹽水做 1∶2， 1∶4， 1∶8，1∶16， 1∶32， 1∶64， 1∶128 倍的稀釋， 而后各取 0.1ml， 加入正常人血清0.2ml，再加抗原0.1ml。置37℃恒溫箱中作用12h，取出待冷，加美藍(lán)染色液2～4滴，振蕩5～6min后取出鏡檢。判斷標(biāo)準(zhǔn)為在400倍下鏡檢，如50%以上不被染色為陽性。結(jié)果大部分1∶64或1∶128為陽性 （注：此試驗應(yīng)同時設(shè)3個對照，并符合判定標(biāo)準(zhǔn)），說明羊已感染弓形體[3]。

4.7 藥敏試驗

采用紙片擴散法 （K-B法）對細(xì)菌進(jìn)行的敏感性試驗。以涂布法接種分離的菌株，采用無菌吸管吸取24 h細(xì)菌肉湯培養(yǎng)液0.2ml，滴在普通瓊脂平板表面的中央位置，用無菌涂棒將細(xì)菌懸液沿各個方向涂布均勻，室溫下放置5min，使細(xì)菌液充分吸附培養(yǎng)基。然后將藥敏紙片貼在培養(yǎng)基上，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，測量抑菌圈直徑。結(jié)果如下 （括號內(nèi)數(shù)值為抑菌圈直徑)。氟苯尼考 （25mm）、鹽酸左旋氧氟沙星 (20.5mm)、乳酸環(huán)丙沙星 (18mm)、恩諾沙星 (11mm)、氟哌酸 (10mm)、頭孢唑啉 (19mm)、磺胺嘧啶鈉 (10mm)、卡那霉素 (13mm)、慶大霉素 (10mm)、鏈霉素 (6mm)，對紅霉素、青霉素G、痢菌凈耐藥。

根據(jù)疾病流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化和實驗室診斷結(jié)果綜合判定，本次疾病的流行是由弓形體與李氏桿菌混合感染引起。

5 防治措施

對羊舍及周邊環(huán)境用百勝-30（絡(luò)合碘制劑）消毒液按1∶800比例稀釋，每天早晚各全面消毒1次；對污染的用具用1～2%的氫氧化鈉溶液浸泡進(jìn)行徹底清洗消毒。對病死羊挖坑撒生石灰進(jìn)行深埋處理。

發(fā)病黑山羊用氟苯尼考注射液5～10mg/kg體重的劑量肌肉注射，1次/d，連用4d。同時配合維生素B1及維生素C注射液各5ml混合一次肌注。精飼料中用磺胺嘧啶鈉10～20mg/kg體重拌料飼喂。

加強飼養(yǎng)管理，對未發(fā)病的黑山羊在日糧中適量的多維素及微量元素，增強機體抵抗力。同時在日糧中添加復(fù)方磺胺嘧啶。每20mg/kg，2次/d。連飲3～5d。疾病得到有效控制后要及時添加微生態(tài)制劑以調(diào)理瘤胃內(nèi)正常的微生物菌群。

6 討論與小結(jié)

本病的控制是加強生物安全措施，加強飼養(yǎng)管理，平時注意消毒工作。該病發(fā)生后要早診斷，早治療，后期治療效果不佳。

貓是弓形體的終末宿主，帶蟲而不發(fā)病。所以養(yǎng)殖場內(nèi)要應(yīng)嚴(yán)禁飼養(yǎng)貓，并做好滅鼠工作。當(dāng)貓糞便污染飼料及飲水。羊食用了被污染的飼料和飲水就會引起感染發(fā)病，引起本病的暴發(fā)和性流行。

該羊圈與豬圈毗鄰，豬場已于6月份發(fā)生李氏桿菌與弓形體混合感染，這是造成該次疾病流行的主要原因。因此，在養(yǎng)殖場建設(shè)時要充分考慮生物安全問題，避免相互感染傳播。

弓形體病和李氏桿菌均可以引起人感染發(fā)病，是人畜共患性疾病。因此，在剖檢診斷及治療時，要采取一定的保護(hù)措施和消毒工作，防止人的感染發(fā)病。

[1]楊金艷.梅花鹿弓形體與李氏桿菌混合感染的診治[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2009(7):109.

[2]李海斌.豬附紅細(xì)胞體病與豬弓形體病混合感的診[J].中國畜禽種業(yè),2012(11):106-107.

[3]陳明陽,陳志杰,李峰.豬瘟和弓形體病混合感染的診斷與防治[J].鄭州牧業(yè)工程高等?？茖W(xué)校學(xué)報,2011,31(3):25-27.