趙軍

中藥材黃芩對幽門螺桿菌體外抗菌活性的作用分析

趙軍

目的分析中藥材黃芩對幽門螺桿菌(Hp)體外抗菌活性的作用, 為治療Hp感染胃病患者提供科學的參考數(shù)據(jù)。方法采用熱回流方法從黃芩粗粉中提取黃芩乙醇提取物以及黃芩苷, 經過高效液相色譜(HPLC)鑒定黃芩苷的濃度, 再采用試管二倍稀釋法選擇合適的培養(yǎng)基, 通過體外藥敏試驗分析黃芩苷與黃芩乙醇提取物對 Hp的體外抗菌活性作用機制。結果從120 g黃芩粉中所攝取的6.02 g黃芩苷經過HPLC鑒定后其純度達到95.88%, 通過試管二倍稀釋法藥敏試驗測定黃芩乙醇提取物對10株Hp的最低抑菌濃度(MIC)90、MIC50值分別為2.61 mg/ml、3.25 mg/ml, 黃芩苷對10株 Hp的MIC90、MIC50值分別為1.31 mg/ml、1.05 mg/ml, 黃芩苷與黃芩乙醇提取物均具有良好的體外抗Hp活性, 黃芩苷對Hp的MIC90、MIC50值優(yōu)于黃芩乙醇提取物。結論中藥材黃芩對 Hp體外抗菌活性的作用比較顯著, 具有重要的實驗研究價值, 值得推廣研究。

黃芩；幽門螺桿菌；體外抗菌活性；作用

黃芩屬于草本植物, 將黃芩的根入藥處理能夠具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎的功效。在已經發(fā)現(xiàn)的黃酮類化合物中, 含量最高且作用最為明顯的是黃芩苷。本研究將根據(jù)相關工作經驗, 分析黃芩乙醇提取物以及黃芩苷對 Hp體外抗菌活性的作用機制, 為治療Hp感染胃病患者提供科學的參考數(shù)據(jù)?，F(xiàn)總結如下。

1 材料與方法

1. 1 試劑與藥材試劑：95%乙醇、硫酸、氫氧化鈉等；藥材：黃芩；HPLC材料：黃芩苷對照品；實驗菌株：選取一些胃黏膜組織, 將10株Hp臨床Ⅰ～Ⅳ型胃黏膜組織均勻的涂在SKINOW培養(yǎng)基上, 與此同時放置在36.8℃的環(huán)境中, 適量加入催化劑, 孵育1 d后, 觀察菌落形態(tài)以及生化反應, 且快速進行實驗, 最終鑒定為Hp。

1. 2 方法

1. 2. 1 制備黃芩乙醇提取物稱取25 g黃芩, 干燥粉碎之后收集于標本瓶中, 加入已經配置好的70%乙醇中, 以浸沒黃芩為宜；用70%乙醇熱回流提取≥2次, 合并提取液, 減壓回收乙醇至無醇味提取物, 濃度為0.45 g/ml。

1. 2. 2 制備黃芩苷稱取120 g黃芩粗粉, 以10倍水煎煮2次, 25 min/次, 合并煎煮2次后的液體, 加入濃鹽酸, 在80℃溫度下靜置1 d, 將沉淀液放入燒杯中, 加120 ml水進行攪拌, 使得黃芩苷全部溶解, 加入90%乙醇, 攪拌后加熱濾液至48℃, 以濃酸進行調配, 抽濾沉淀物, 50℃真空干燥,最終制得黃芩苷。

1. 2. 3 黃芩苷的含量、純度測定稱取0.88 mg黃芩苷置于12 ml容量瓶中, 加入適量甲醇搖勻, 對照品溶解且稀釋至0.21 mg/ml儲備液中；配制對照品溶液。稱取0.88 mg黃芩苷置于12 ml容量瓶中, 加入適量甲醇搖勻, 對照品溶解且稀釋至0.21 mg/ml儲備液中；測定樣品含量。取供試品溶液,量取15 μl進入到HPLC中, 記錄HPLC色譜峰面積；與此同時稱取15 μl樣品進入到HPLC中, 按照外標法計算峰面積,得出黃芩苷含量, 與對照品相比較則為黃芩苷純度。

1. 2. 4 體外藥敏試驗Hp臨床菌株的分離培養(yǎng)和鑒定。通過抑菌試驗發(fā)現(xiàn), 使用簡單的煎煮法提取藥物進行相關抑菌試驗能夠觀察到黃芩和黃芩苷對Hp的體外抗菌活性。藥敏試驗：采用試管二倍稀釋法, 取12支無菌試管, 每一支試管中均加入0.88 ml布氏肉湯, 第1支試管中加入制備藥液0.95 ml, 倍比稀釋至第10支試管中, 第11支試管與第12支試管不添加任何藥液, 作為對照試驗。12支試管分別加入已經制備好的Hp菌液中, 大約有1020個細菌, 在38℃微氧環(huán)境為6%～9% CO2、6%～8% O2、33.4% H2下進行培養(yǎng), 在2 d后觀察其培養(yǎng)結果。

1. 3 觀察指標分析黃芩乙醇提取物與黃芩苷對10株 Hp的MIC90、MIC50值, 將檢測所得MIC值從低到高進行累計分布率計算, 累計分布率≥50%時的最低MIC值為MIC50,≥90%時最低MIC值為MIC90。

2 結果

從120 g黃芩粉中所攝取的6.02 g黃芩苷經過HPLC鑒定后其純度達到95.88%, 通過試管二倍稀釋法藥敏試驗測定黃芩乙醇提取物對10株 Hp的MIC90、MIC50值分別為2.61 mg/ml、3.25 mg/ml, 黃芩苷對10株 Hp的MIC90、MIC50值分別為1.31 mg/ml、1.05 mg/ml, 黃芩苷與黃芩乙醇提取物均具有良好的體外抗Hp活性, 黃芩苷對Hp的MIC90、MIC50值優(yōu)于黃芩乙醇提取物。

3 討論

Hp是一種螺桿狀細菌, 目前最為推崇的一種治療方法是三聯(lián)療法, Hp根除率達到89.9%以上［1］。Hp是一種特殊的胃黏膜表面細菌, 采用西藥治療費用過高, 藥物的副作用較大, 因此給患者帶來了最巨大的經濟壓力和精神壓力。

黃芩的主要成分有黃芩素、漢黃芩素以及黃芩苷等, 主治溫熱病、上呼吸道感染以及肺熱咳嗽、胎動不安等疾病,其臨床抗菌性好, 且不產生抗藥性。本文的相關實驗中, 從120 g黃芩粉中所攝取的6.02 g黃芩苷經過HPLC鑒定后其純度達到95.88%, 通過試管二倍稀釋法藥敏試驗測定黃芩乙醇提取物對10株 Hp的MIC90、MIC50值分別為2.61 mg/ml、3.25 mg/ml, 黃芩苷對10株 Hp的MIC90、MIC50值分別為1.31 mg/ml、1.05 mg/ml。由此可見, 由黃芩配伍的中藥復方具有較強的抗Hp作用。

富含黃芩成分的滅幽湯治療Hp胃病患者能夠具有顯著效果［8］, 能夠在一定程度上幫助修復胃黏膜。富含黃芩的三黃瀉心湯和黃芩苷不受到Hp的生長曲線影響［2］, 可有效抑制胃腺癌細胞中的白細胞介素-6(IL-6)的表達［3］。黃芩聯(lián)合埃索美拉唑治療Hp感染胃病患者能夠顯著優(yōu)于三聯(lián)治療法［4,5］, 在一定程度上提高Hp感染胃病患者的免疫力, 毒副作用小, 因此黃芩具有代替抗生素的功能與價值。

綜上所述, 中藥材黃芩對 Hp體外抗菌活性的作用比較顯著, 具有重要的實驗研究價值, 值得推廣研究。

［1］ 彭學. 幽門螺旋桿菌感染及非甾體抗炎藥對消化性潰瘍出血的影響研究. 實用心腦肺血管病雜志, 2011, 19(2):220-221.

［2］ 王莉萍. 埃索美拉唑三聯(lián)療法對Hp陽性消化性潰瘍患者的治療效果. 求醫(yī)問藥(學術版), 2012, 10(6):112-113, 471.

［3］ 陳維存. 消化性潰瘍復發(fā)因素的探討與綜合防治. 中國農村衛(wèi)生事業(yè)管理, 2011, 31(8):866-867.

［4］ 華利霞, 山努佳. 辛開苦降法治療慢性胃炎的Meta分析. 中國繼續(xù)醫(yī)學教育, 2015, 18(19):189-191.

［5］ 韋永光. 黃芪建中湯治療幽門螺旋桿菌陽性胃潰瘍37例臨床觀察. 中國民族民間醫(yī)藥, 2015, 18(11):99, 101.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.08.098

2017-02-14］

110000 沈陽市第九人民醫(yī)院藥劑科