茅衛(wèi)鋒，趙 茜，關(guān)家偉 （大連醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧大連116044）

針對(duì)人PTEN基因異常腫瘤個(gè)體化治療的分析

茅衛(wèi)鋒，趙 茜，關(guān)家偉 （大連醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧大連116044）

PTEN基因是一個(gè)具有雙重特異磷酸酶活性的抑癌基因，可影響細(xì)胞周期調(diào)控和細(xì)胞增殖．異常PTEN可導(dǎo)致PI3K通路失調(diào)，細(xì)胞異常增殖．多種腫瘤中可檢測(cè)到異常的PTEN突變．最近的研究顯示，除了在PI3K通路中的作用外，PTEN還具有DNA損傷修復(fù)等其它生物學(xué)功能，PTEN缺陷腫瘤細(xì)胞對(duì)DNA損傷藥物敏感．因此，針對(duì)PTEN基因異常腫瘤可采取PI3K抑制劑、DNA損傷化療藥物等治療方法聯(lián)合使用的個(gè)體化治療策略，本文對(duì)人PTEN基因異常腫瘤的個(gè)體化治療進(jìn)行初步分析．

PTEN基因；抑癌基因；PI3K信號(hào)通路；DNA修復(fù)；抗腫瘤藥物

0 引言

PTEN（phosphatase and tensin homolog）作為一種抑癌基因，在人類(lèi)多種癌癥中如子宮癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌等癌癥中都具有非常高的突變頻率．PTEN基因在細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、粘附、遷移、浸潤(rùn)等方面也具有重要作用．PTEN的脂磷酸酶酶活性將細(xì)胞膜上PIP3去磷酸化成PIP2，進(jìn)而拮抗磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）信號(hào)通路．隨后的研究發(fā)現(xiàn)，PTEN不但在細(xì)胞質(zhì)中具有重要作用，還能通過(guò)多種修飾調(diào)節(jié)作用進(jìn)入細(xì)胞核，核內(nèi)的PTEN在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、維持染色體組的穩(wěn)定性及在DNA損傷修復(fù)中都具有重要作用．本文概述了PTEN基因結(jié)構(gòu)和PTEN蛋白翻譯后修飾對(duì)其功能的影響；其次總結(jié)了PTEN在PI3K信號(hào)通路和DNA損傷修復(fù)中的功能，并分析了PTEN異常腫瘤中的個(gè)體化治療策略．

1 PTEN基因結(jié)構(gòu)

PTEN是一種抑癌基因，位于人染色體10q23．3［1］．PTEN最初于1997年被報(bào)道，隨后的研究發(fā)現(xiàn)PTEN基因與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，同時(shí)在細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、粘附、遷移、浸潤(rùn)等方面也具有重要作用［2-4］．PTEN基因全長(zhǎng)200 kb，其中包含9個(gè)外顯子和8個(gè)內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄出的mRNA長(zhǎng)5．5 kb，cDNA長(zhǎng)1212 bp，編碼了一個(gè)含有403個(gè)氨基酸的蛋白，可得到一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量約為55 kD的蛋白［5］．該蛋白含有一個(gè)磷酸酶結(jié)構(gòu)域，是其主要的活性區(qū)域，位于N-端的190個(gè)氨基酸；一個(gè)C2結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域能夠介導(dǎo)PTEN與脂的結(jié)合和膜定位，同時(shí)可維持PTEN的穩(wěn)定性；C端50個(gè)氨基酸尾區(qū)含蛋白相互作用區(qū)（PDZ），參與蛋白間的結(jié)合和相互作用，調(diào)控PI3K去磷酸化．

2 PTEN翻譯后修飾

PTEN蛋白在細(xì)胞質(zhì)中的翻譯后修飾包括泛素化、小泛素化、磷酸化、乙酰化等［6-7］．CREB結(jié)合蛋白（CREB-binding protein，CBP）可乙酰化 PTEN蛋白Lys402，而P300／CBP相關(guān)因子［p300／CREB-binding protein（CBP）-associated factor，PCAF］作為一種重要的組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶，可促進(jìn)Lys125和Lys128兩位點(diǎn)的乙?；阴；腜TEN降低了其磷酸酶活性［8］．PTEN的磷酸化位點(diǎn)包括 Ser299，Thr321，Tyr336，Thr366，Ser370，Ser380，Thr382，Thr383，Ser385等［9］，這些特定位點(diǎn)的磷酸化、調(diào)節(jié)PTEN的活性及穩(wěn)定性．RAK蛋白是SRC家族成員，對(duì)乳腺癌具有抑制作用．RAK的抑癌作用主要是通過(guò)調(diào)節(jié)PTEN翻譯后修飾實(shí)現(xiàn)，RAK可以磷酸化PTEN蛋白的Tyr336氨基酸，抑制E3泛素化連接酶NEDD4-1介導(dǎo)的PTEN降解途徑，因此維持了PTEN在細(xì)胞質(zhì)中的穩(wěn)定性，從而起到了抑癌作用［10］．

泛素化修飾的PTEN對(duì)于維持其穩(wěn)定性，促進(jìn)其在細(xì)胞核中的定位具有重要意義．PTEN泛素化主要包含兩個(gè)位點(diǎn)，一個(gè)是Lys13，另一個(gè)為L(zhǎng)ys289．這兩個(gè)位點(diǎn)在多聚泛素化作用時(shí)啟動(dòng)了蛋白降解途徑，而在單泛素化修飾時(shí)則增強(qiáng)了PTEN蛋白的穩(wěn)定性，同時(shí)，促進(jìn)了PTEN進(jìn)入細(xì)胞核，實(shí)現(xiàn)PTEN在細(xì)胞核內(nèi)的作用．這種PTEN蛋白的多聚泛素化和單泛素化作用共同維持了細(xì)胞質(zhì)中和細(xì)胞核中PTEN蛋白的穩(wěn)定，同時(shí)也維持了PTEN在細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)量．研究［9］顯示，除了泛素化修飾的PTEN外，小泛素化修飾也可實(shí)現(xiàn)PTEN在細(xì)胞核中的定位．PTEN的小泛素化位點(diǎn)包括Lys254和Lys266．兩位點(diǎn)被小泛素化修飾時(shí)，可以促進(jìn)PTEN的進(jìn)核，當(dāng)兩位點(diǎn)突變時(shí)，細(xì)胞核中的PTEN量顯著降低．PTEN蛋白翻譯后修飾影響PTEN細(xì)胞內(nèi)定位和功能．

3 PTEN在PI3K信號(hào)通路中的功能和個(gè)體化治療策略的分析

PTEN脂磷酸酶活性在拮抗PI3K信號(hào)通路中的功能已被深入研究．在PI3K通路中，PI3K脂質(zhì)激酶將細(xì)胞膜上脂質(zhì)受體磷脂酰肌醇4，5-二磷酸（PIP2）轉(zhuǎn)變?yōu)榱字＜〈?，4，5-三磷酸（PIP3）．PIP3作為第二信使結(jié)合包含PH結(jié)構(gòu)域的蛋白，例如AKT，活化的AKT可激活下游蛋白，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂、凋亡等．PTEN通過(guò)對(duì)PIP3的3’端去磷酸化，阻斷PI3P下游AKT信號(hào)通路，從而抑制細(xì)胞增殖．PTEN缺陷導(dǎo)致細(xì)胞膜上PIP3積累，下游AKT／mTOR信號(hào)通路持續(xù)激活，細(xì)胞異常增殖．有研究報(bào)道PI3K通路靶向藥物，包括PI3K抑制劑BKM120，AKT／mTOR通路的抑制劑西羅莫司 （temsirolimus），雷帕霉素 （rapamycin）等針對(duì)PTEN缺陷細(xì)胞有較明顯的治療效果［11］．有研究顯示PTEN野生型細(xì)胞中，PI3K的p110α和p110β亞基都參與PIP3信號(hào)通路；而PTEN缺陷的細(xì)胞主要依靠p110β亞基在 PIP3信號(hào)通路中起作用，因此針對(duì)p110β亞基的特異性抑制劑為PTEN缺陷腫瘤細(xì)胞的潛在治療靶點(diǎn)［12］．然而，并非所有PI3K通路靶向藥物對(duì)PTEN缺陷細(xì)胞都有顯著療效．Her2陽(yáng)性乳腺癌患者可采用一種曲妥珠單抗（trastuzumab）的靶向治療藥物，該藥物是Her2的單克隆抗體，能夠特異性與Her2結(jié)合，阻斷PI3K通路中酪氨酸激酶，從而達(dá)到治療作用．曲妥珠單抗對(duì)約35%的Her陽(yáng)性的乳腺癌患者有效，5%的患者出現(xiàn)了嚴(yán)重的副作用，40%左右的患者出現(xiàn)了其他不良癥狀．有研究表明，曲妥珠單抗激活PTEN，通過(guò)限制Src酪氨酸激酶的活性抑制PTEN的磷酸化，保證了PTEN的磷酸酶活性，實(shí)現(xiàn)了抗腫瘤作用．因而在PTEN功能缺失的乳腺癌患者中，曲妥珠單抗的作用明顯降低［13］．因此，針對(duì)腫瘤細(xì)胞中PTEN的異常，即使在選用靶向PI3K通路的抑制劑也需要針對(duì)PTEN突變的情況而采用不同的個(gè)體化治療策略．

4 PTEN在DNA損傷修復(fù)中的功能和個(gè)體化治療策略的分析

PTEN在DNA損傷修復(fù)和維持基因組穩(wěn)定方面有重要作用，并且其DNA損傷修復(fù)的功能不依賴(lài)于磷酸酶活性．PTEN與組蛋白H1結(jié)合維持基因組穩(wěn)定，還有研究報(bào)道顯示PTEN和核內(nèi)CENP-C蛋白結(jié)合保護(hù)細(xì)胞在有絲分裂時(shí)染色體穩(wěn)定，此外，PTEN在核內(nèi)通過(guò) cyclin D1控制細(xì)胞周期生長(zhǎng)及結(jié)合APC-CDH1增強(qiáng)其活性［14-15］．PTEN缺陷細(xì)胞顯示出DNA修復(fù)能力降低，并對(duì)DNA損傷類(lèi)腫瘤藥物敏感．有報(bào)道顯示PTEN缺陷，乳腺癌細(xì)胞中Rad51表達(dá)下調(diào)，同源重組修復(fù)能力降低，對(duì)順鉑等DNA損傷藥物敏感［15］．PTEN在DNA損傷修復(fù)中的作用和其核內(nèi)定位密切相關(guān)，并且受到翻譯后修飾的調(diào)控，如PTEN的泛素化和小泛素化影響其入核能力，因此針對(duì)這些翻譯后修飾位點(diǎn)異常PTEN突變的腫瘤細(xì)胞，可嘗試應(yīng)用DNA損傷類(lèi)化療藥物或放射治療方法．

多聚腺嘌呤核糖聚合酶［poly（ADP-ribose）polymerase，PARP］在DNA損傷修復(fù)中有修飾DNA修復(fù)因子，參與DNA修復(fù)的重要作用，因而PARP抑制劑在臨床上應(yīng)用于BRCA1和BRCA2缺陷的乳腺癌和卵巢癌細(xì)胞的治療［16］．由于PTEN缺失會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞同源重組修復(fù)能力降低，有研究顯示在PTEN缺失細(xì)胞中抑制多聚腺嘌呤核糖聚合酶會(huì)導(dǎo)致協(xié)同性致死（synthetic lethality）［17］．有臨床報(bào)道顯示，BRCA1／BRCA2正常但PTEN缺陷的子宮內(nèi)膜細(xì)胞對(duì)PARP抑制劑olaparib敏感［18］．盡管PARP1針對(duì)PTEN異常腫瘤的作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究，PARP1抑制劑已逐漸成為治療DNA同源重組修復(fù)異常腫瘤的一種前景藥物．

5 針對(duì)PTEN異常腫瘤治療展望

PTEN基因是人類(lèi)腫瘤組織中缺失和突變率很高的抑癌基因，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界關(guān)于PTEN基因各方面都研究得很多，PTEN作為一個(gè)重要的“節(jié)點(diǎn)”不僅在細(xì)胞生長(zhǎng)信號(hào)通路中起作用，而且在很多生物學(xué)行為中起關(guān)鍵作用．針對(duì)PTEN異常腫瘤尋找能夠協(xié)同作用的靶點(diǎn)，調(diào)節(jié)PTEN細(xì)胞內(nèi)定位、調(diào)節(jié)PTEN轉(zhuǎn)錄和翻譯后修飾的藥物都是PTEN異常腫瘤個(gè)體化治療的研究方向．針對(duì)腫瘤患者PTEN基因情況，采用特定的診斷、治療和預(yù)后判斷方法，并采用特定的PI3K抑制劑和DNA損傷化療藥物的個(gè)體化治療為前景較好的PTEN異常腫瘤臨床治療方案．

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Analysis of individual therapeutic strategies in the treatment of tumors with PTEN mutants

MAO Wei-Feng，ZHAO Qian，GUAN Jia-Wei

Basic Medical College of Dalian Medical University， Dalian 116044，China

PTEN is a tumor suppressor gene characterizing with dual phosphatase activities，which can affect cell cycle regulation and cell proliferation．Aberrant PTEN results in dis-regulation of PI3K cascade pathway and abnormal cell proliferation．Coincidently，PTEN mutants were detectable in various types of cancers．Besides of its effect in PI3K pathway，recent reports demonstrate PTEN also functions in DNA repair and other biological activities；while PTEN deficient tumor cells are sensitive to DNA damage drugs．Thus，PI3K inhibitors and DNA damage drugs can be combined to target tumor cells with different PTEN mutants，which would be a promising personalized therapy．This paper primarily analyzes the individual therapeutic strategies to tumors with PTEN mutants．

PTEN；tumor suppressor gene；PI3K pathway；DNA repair；antitumor drug

R392．12

A

2095-6894（2017）05-74-03

2016-10-24；接受日期：2016-11-12

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81201563，31371254）

茅衛(wèi)鋒．副教授．E-mail：maoweife＠hotmail．com