孫麗娜，吳春華，王 淼

(大連農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，遼寧大連 116036)

帚石楠組培快繁研究

孫麗娜，吳春華*，王 淼

(大連農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，遼寧大連 116036)

[目的]建立帚石楠組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)。[方法]以帚石楠為研究對象，從不同消毒方式及時間、不同生長調(diào)節(jié)劑配比、不同暗處理時間等方面研究帚石楠的組培快繁體系。[結(jié)果]處理帚石楠幼嫩莖段時，以0.1%升汞處理12 min較為適宜；最適的分化培養(yǎng)基為MS+BA 0.5 mg/L+1.0 mg/L 2，4-D；最適生根培養(yǎng)基為MS+IBA 0.15 mg/L+NAA 0.25 mg/L；接種后將接種苗進(jìn)行5 d暗處理可明顯提高生根率。[結(jié)論] 建立了帚石楠組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，為其規(guī)模化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

帚石楠；組織培養(yǎng)；暗培養(yǎng)

帚石楠(Callunavulgaris)為杜鵑花科彩萼石南屬落葉或常綠低矮灌木[1]，分布于歐洲西部及北部，喜光線充足，較耐寒，花朵小且芬芳，其根莖具有較強(qiáng)的藥用價值。我國北方地處溫帶，四季分明，特定的地理和氣候條件決定了我國北方植物景觀以落葉闊葉樹和常綠針葉樹為主[2]，從國外引進(jìn)適合我國北方地區(qū)的冬季開花地被植物，對滿足北方地區(qū)綠化建設(shè)具有重要意義。帚石楠自然生長較慢，種子成活率低，繁殖扦插較困難，且病蟲害較嚴(yán)重，采用組織培養(yǎng)方法繁育帚石楠是快速繁育的主要辦法。

近年來關(guān)于石楠屬組織培養(yǎng)和愈傷組織誘導(dǎo)的研究較多[3-6]，但針對帚石楠組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方差異很大。筆者通過組織培養(yǎng)和愈傷組織誘導(dǎo)2種途徑對帚石楠的繁殖方法進(jìn)行研究，從不同消毒方式及時間、不同生長調(diào)節(jié)劑配比、不同暗處理時間等方面 進(jìn)行試驗(yàn)，以期建立適合帚石楠的高效繁殖體系。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 外植體取自大連市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院花卉所溫室內(nèi)帚石楠帶頂芽的莖段。

1.2 外植體消毒 剪取帚石楠帶頂芽的莖段，用清水洗去表面灰塵，放入飽和洗潔精溶液中漂洗，再置于自來水下沖洗1～2 h，然后置于超凈工作臺上用75%乙醇消毒30 s，用無菌水沖洗3～4次，最后放入表1不同濃度NaClO及升汞溶液浸泡，期間每隔幾分鐘搖動1次，倒出消毒劑，用無菌水沖洗3～4次備用。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 不同消毒劑濃度及消毒時間對外植體污染率的影響。消毒劑分別為0.1%升汞溶液及2%、3%NaClO溶液，外植體為帶頂芽長約2 cm的帚石楠莖段，將此外植體采用不同濃度升汞及不同濃度NaClO分別處理相應(yīng)時間后，切面向下垂直接種于MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，每處理10瓶，每瓶接種5株，5 d后統(tǒng)計外植體污染率，試驗(yàn)設(shè)計見表1。

表1 不同滅菌處理試驗(yàn)設(shè)計

1.3.2 不同生長調(diào)節(jié)劑配比對愈傷組織誘導(dǎo)的影響。帚石楠愈傷組織的誘導(dǎo)以添加30 g/L蔗糖和6.8 g/L瓊脂的MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，pH 5.8，添加的生長調(diào)節(jié)劑配比見表2，每瓶接種5株，每處理接種10瓶。

表2 愈傷組織誘導(dǎo)不同生長調(diào)節(jié)劑配比

1.3.3 不同生長調(diào)節(jié)劑配比對生根的影響。將愈傷組織培養(yǎng)后產(chǎn)生的叢生芽接種至不同生長調(diào)節(jié)劑配比的MS培養(yǎng)基中，每處理10瓶，每瓶接種5株，60 d后統(tǒng)計生根率及平均生根數(shù)，具體激素配比：IBA為0.10、0.15、0.25 mg/L；NAA為0.10、0.15、0.25 mg/L；IBA/NAA為0.10/0.10、0.15/0.25、0.25/0.15。

1.3.4 暗處理對生根率和褐化率的影響。通過前期生根培養(yǎng)試驗(yàn)，篩選出生根率較低的培養(yǎng)基，每瓶接種5株，每處理10瓶，分別置于暗培養(yǎng)0、5、 8 d后，統(tǒng)計生根率、褐化率等。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒劑濃度及消毒時間對外植體污染率的影響 由圖1可知，NaClO溶液對外植體的消毒效果十分明顯，污染率保持在較低水平，但褐化率卻較高，可見NaClO處理相對于升汞處理對帚石楠幼嫩植株組織破壞性較大。

升汞溶液污染率相對于NaClO處理相對略高，但褐化率卻遠(yuǎn)低于NaClO溶液，因此，在處理帚石楠幼嫩莖段時，以0.1%升汞處理12 min較為適宜。

圖1 不同滅菌方式對污染率及褐化率的影響Fig.1 Effect of different explant pretreatment on pollution and browning rate

2.2 不同生長調(diào)節(jié)劑配比對帚石楠愈傷組織誘導(dǎo)的影響 由表3可知，BA濃度在0.5 mg/L時，愈傷組織誘導(dǎo)率明顯高于BA濃度0.3 mg/L的處理，加入2，4-D可明顯提高誘導(dǎo)率，但當(dāng)BA濃度不變時，愈傷組織誘導(dǎo)率隨2，4-D濃度的升高呈先升高后下降的趨勢，即當(dāng)BA濃度不變時，2，4-D濃度在1.0 mg/L時誘導(dǎo)率最高，當(dāng)2，4-D濃度增加到1.5 mg/L時，誘導(dǎo)率呈下降趨勢。因此，當(dāng)BA濃度為0.5 mg/L時,加入1.0 mg/L 2，4-D可明顯提高帚石楠愈傷組織的生成。

表3 不同生長調(diào)節(jié)劑配比對愈傷組織誘導(dǎo)的影響

2.3 不同生長調(diào)節(jié)劑配比對帚石楠生根的影響 由表4可知，單獨(dú)使用IBA及NAA對帚石楠生根具有一定的促進(jìn)作用，單獨(dú)使用IBA時，生根率隨著濃度升高而升高，當(dāng)濃度為0.15 mg/L時，生根效果最好，當(dāng)濃度升至0.25 mg/L時生根率下降。

單獨(dú)使用NAA也可以提高生根率，生根率隨NAA濃度升高而升高，當(dāng)NAA濃度為0.25 mg/L時生根效果較好。當(dāng)IBA及NAA混合使用時，可明顯提高帚石楠生根率，在3個激素配比組合中，以IBA 0.15 mg/L+NAA 0.25 mg/L效果最佳，生根率可達(dá)73.2%，說明IBA、NAA二者搭配使用可明顯促進(jìn)帚石楠生根，比單獨(dú)使用這2種激素效果好。

表4 不同生長調(diào)節(jié)劑配比對生根的影響

2.4 暗處理對帚石楠生根率及褐化率的影響 將帚石楠接種于生根率相對較低的2種生根培養(yǎng)基：NAA 0.1 mg/L+MS與IBA 0.25 mg/L+MS中，共接種10瓶，每瓶5株，分別置于暗培養(yǎng)0、5、8 d后取出，置于正常組培環(huán)境中培養(yǎng)，統(tǒng)計出根率、生根條數(shù)等，結(jié)果見表5。

表5 暗處理時間對帚石楠生根率及褐化率的影響

Table 5 Effect of culture in dark on rooting and browning rate ofCallunavulgaris

處理TeatmentIBAmg/LNAAmg/L暗培養(yǎng)時間Darkincubationtime∥d生根率Rootingrate∥%褐化率Browningrate∥%①—0．1023．829．5②—0．1535．219．7③—0．1811．775．6④0．25—027．342．9⑤0．25—541．835．4⑥0．25—818．692．3

由表5可知，適當(dāng)?shù)貙M培苗進(jìn)行暗處理有利于根部的發(fā)生，其中，以暗培養(yǎng)5 d較為適宜，當(dāng)暗處理時間延長至8 d時，組培苗生根率明顯降低，且組培苗出現(xiàn)黃化、衰老、落葉現(xiàn)象，褐化率明顯上升，遠(yuǎn)高于其他處理。這說明適當(dāng)?shù)貙χ闶M培苗進(jìn)行暗處理，可提高組培苗生根率，但暗處理時間不宜過長，否則褐化率升高。

3 結(jié)論與討論

該研究以帚石楠為研究對象，從不同消毒方式及時間、不同生長調(diào)節(jié)劑配比、不同暗處理時間等方面研究了帚石楠組培快繁體系，結(jié)果表明，處理帚石楠幼嫩莖段時，以0.1%升汞處理12 min較為適宜；適宜的分化培養(yǎng)基為BA 0.5 mg/L+1.0 mg/L 2，4-D；生根培養(yǎng)基為MS+IBA 0.15 mg/L+NAA 0.25 mg/L。帚石楠接種苗進(jìn)行5 d暗處理可明顯提高生根率。程家勝[7]認(rèn)為在試管苗誘導(dǎo)生根過程中，暗培養(yǎng)有利于根原基誘導(dǎo)。馮丹丹等[8]研究表明，暗培養(yǎng)比光培養(yǎng)更有利于水曲柳離體根尖的培養(yǎng)。該試驗(yàn)驗(yàn)證了前人的研究結(jié)果，但要注意控制暗處理時長，暗處理時間過長生根率下降，褐化率明顯上升。

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Tissue Culture and Rapid Propagation ofCallunavulgaris

SUN Li-na，WU Chun-hua*，WANGMiao

(Dalian City Agricultural Science Institute，Dalian,Liaoning 116036)

[Objective]The aim was to establish tissue culture and rapid propagation ofCallunavulgaris.[Method]This experiment was conducted to investigateinvitromicropropagation ofCallunavulgariswith the aptical buds excised from the mature elite plants. [Result]The results showed that the optimum disinfecting time was 12 min with 0.1%Mercuric chloride solution;and the optimum medium of following proliferation was MS+BA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L; When the MS+IBA0.15 mg/L+NAA 0.25 mg/L medium induced rooting; Culturing in dark for 5 days coluld promoted rooting. [Conclusion] The study establish tissue culture and rapid propagation ofCallunavulgaris, and provide theoretical basis for the mass production.

Callunavulgaris; Tissue culture; Rapid propagation

大連市科學(xué)技術(shù)局科技計劃項(xiàng)目“大連市食用菌種質(zhì)資源庫建立及栽培加工技術(shù)的產(chǎn)業(yè)鏈建設(shè)”(2014B11NC076)。

孫麗娜(1979- )，女，遼寧丹東人，中級農(nóng)藝師，碩士，從事植物組培工作。*通訊作者，副高級農(nóng)藝師，博士，從事植物不定根生物反應(yīng)器培養(yǎng)研究。

2016-10-19

S 603.6

A

0517-6611(2016)34-0150-02