廉 娟 綜述，劉 毅審校

（1.蘭州大學第二臨床醫(yī)學院 甘肅 蘭州 730030；2.蘭州軍區(qū)總醫(yī)院燒傷整形科 甘肅 蘭州 730050）

?綜述?

脂肪肉瘤干細胞表面標志物研究

廉 娟1綜述，劉 毅2審校

（1.蘭州大學第二臨床醫(yī)學院 甘肅 蘭州 730030；2.蘭州軍區(qū)總醫(yī)院燒傷整形科 甘肅 蘭州 730050）

脂肪肉瘤中存在一種具有自我更新、擴增能力，并具有癌變傾向的異質(zhì)性細胞，這種細胞被稱為脂肪肉瘤干細胞。脂肪肉瘤干細胞對脂肪肉瘤的發(fā)生、發(fā)展有著十分重要的作用。明確脂肪肉瘤干細胞的特異標志物可使其準確分離，并對其特性及通路的研究有一定作用。本文對脂肪肉瘤干細胞標志物的研究進展進行概述，旨在為脂肪肉瘤的早期診斷、改善治療方法、提高患者的生存及預后提供可借鑒的理論依據(jù)。

脂肪肉瘤干細胞；干細胞表面標志物；治療靶點；檢測方法

脂肪肉瘤是最常見的軟組織肉瘤，占所有軟組織肉瘤的15%。發(fā)生在四肢的軟組織肉瘤中，脂肪肉瘤占24%；位于腹膜后的軟組織肉瘤中，脂肪肉瘤占45%。世界衛(wèi)生組織（WHO）將脂肪肉瘤分成四種亞型：非典型脂肪瘤性腫瘤/高分化脂肪肉瘤（ALT/WDLPS），去分化脂肪肉瘤(DDLPS)，粘液性脂肪肉瘤(MLPS)和多形性脂肪肉瘤(PLS)。脂肪肉瘤可發(fā)生于任何部位，于四肢及腹膜后多發(fā)，其中原發(fā)性粘液性脂肪肉瘤和多形性脂肪肉瘤多見于四肢，腹膜后比較罕見，而非典型脂肪瘤性腫瘤/高分化脂肪肉瘤和去分化脂肪肉瘤好發(fā)于腹膜后。治療多以手術(shù)切除為主，還有化療、放療及分子靶向治療等其他輔助治療方式[1-2]。

腫瘤干細胞是腫瘤細胞中具有無限自我更新能力，并促進腫瘤形成的細胞。1997年Bonnet第一次在急性髓性白血病(acute myeloid leukaemia,AML)中分離出腫瘤干細胞[3]。相關(guān)研究表明，脂肪肉瘤中也存在這種具有自我更新及擴增能力，并具有癌變傾向的異質(zhì)性細胞，稱為脂肪肉瘤干細胞。明確脂肪肉瘤干細胞的特異標志物可使其準確分離，并對其特性及通路的研究有一定作用。本文擬就脂肪肉瘤干細胞標志物的研究進展作一綜述。

1 脂肪肉瘤干細胞主要標志物

1.1 與脂肪間充質(zhì)干細胞相關(guān)標志物：脂肪間充質(zhì)干細胞來源于脂肪組織，迄今為止仍未有特異性標記物。根據(jù)2013年國際細胞治療協(xié)會和國際脂肪應(yīng)用技術(shù)協(xié)會達成的共識，脂肪間充質(zhì)干細胞的表型是CD31-、CD34+、CD45+、CD235a-，其中經(jīng)體外培養(yǎng)的脂肪間充質(zhì)干細胞表型為CD31-、CD44+、CD45-、CD73+、CD90+、CD105+[4]。Stratford[5]等通過對來自于四種亞型的9種脂肪肉瘤細胞系中CD90，CD105，CD73和CD44的表達進行測定分析，得出這9種脂肪肉瘤細胞系中，除了去分化脂肪瘤細胞系中只有較小細胞群（5%～30%）表達CD90外，其余細胞系幾乎每個細胞均表達CD90。CD105和CD44在所有細胞系中普遍表達，但去分化細胞中不表達CD105。CD105表達差異的相關(guān)機制尚不清楚，可能與其脂肪肉瘤的癌細胞功能相關(guān)。研究表明，CD73的高表達與其他腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和降低患者的存活率相關(guān)。雖然實驗中CD73的表達在不同亞型的脂肪肉瘤變化比較大，但是沒有觀察到CD73表達與脂肪肉瘤侵襲能力之間有相關(guān)性。Yan[6]等人通過對脂肪肉瘤細胞系Lipo863的培養(yǎng)，篩選出表達CD36-及CD36+的細胞，得出這兩種細胞均表達CD73、CD90以及CD105，表明該種細胞與脂肪間充質(zhì)干細胞具有一定的相似性。其次將這兩種細胞進行異種移植入小鼠體內(nèi)，均有腫瘤生長，將腫瘤切除后進行免疫熒光分析該腫瘤中CD36-及CD36+細胞分布，表明腫瘤形成能力與CD36表達無關(guān)。

1.2 CD133：CD133（也稱為AC133和prominin-1）是細胞膜蛋白超家族成員，是由865個氨基酸構(gòu)成，其分子機構(gòu)包括5個跨膜結(jié)構(gòu)域和2個大胞外環(huán)狀結(jié)構(gòu)[7]。Singh等人首次提出CD133可做為腦膜瘤干細胞表面標志物，運用CD133標記分選出腦腫瘤干細胞[8]。研究表明CD133與其他干細胞標記物共同表達可分選腫瘤干細胞[9]。Stratford[10]等通過分選了共表達ALDH1和CD133脂肪肉瘤細胞亞群，發(fā)現(xiàn)該細胞亞群具有自我更新能力增強、成脂能力增加的致瘤性。向裸鼠注射少量該細胞亞群細胞即可形成腫瘤，說明該類細胞具有干細胞能力。所有這些發(fā)現(xiàn)證實腫瘤干細胞在脂肪肉瘤中的存在，兩者共同表達可分選脂肪肉瘤干細胞，并提供了新的腫瘤干細胞的特異性治療的靶點。相關(guān)研究表明CD133高表達與腫瘤化療的耐藥性、復發(fā)及患者生存率均有關(guān)。雖然對CD133的功能尚不清楚，可通過CD133靶向治療來殺傷腫瘤干細胞。Stratford[11]等人研究表明由于CD133也存在于正常細胞內(nèi)，全身用藥可造成嚴重的副作用。通過將作用與CD133的免疫抑制藥物CD133-皂草素與PCI光照技術(shù)相結(jié)合，可降低對正常細胞的殺傷作用，實驗可見脂肪肉瘤細胞SW872存活及增殖能力均受到影響，動物實驗中2/3小鼠表現(xiàn)出腫瘤形成延遲，1/6表現(xiàn)出無腫瘤生長，故得出該方式可降低細胞活力和增殖能力及在體外形成集落和體內(nèi)形成腫瘤的能力。

1.3 乙醛脫氫酶1（ALDH1）：ALDH1是乙醛脫氫酶家族成員之一，是一組將多種細胞內(nèi)醛氧化成其相應(yīng)的羧酸的酶。ALDH1與環(huán)磷酰胺化學耐藥性有關(guān)[9]。Ginestier[12]等發(fā)現(xiàn)高ALDH1活性已被用于篩選腫瘤干細胞群體，包括人多發(fā)性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、胰腺癌和乳腺癌等。因此，ALDH1可用作惡性干細胞群體的常見標記[13]。Lohberger[14]等人研究表明ALDH1高表達的肉瘤細胞在體外表現(xiàn)出更高的增殖速率、克隆形成效率，提高了ABC轉(zhuǎn)運蛋白能力以及增加了化療藥物的耐藥性。相關(guān)研究表明，提高ALDH1的表達水平和活性可增強肉瘤的致瘤性。同時證明了ALDH1可作為肉瘤干細胞的表面標記物，可在肉瘤進展期及治療期間對腫瘤干細胞亞群的惡性程度進行評估[15]。相關(guān)研究通過從人類肉瘤細胞系（纖維肉瘤，脂肪肉瘤，滑膜肉瘤，軟骨肉瘤和尤因肉瘤）中分選出高表達ALDH1的細胞。并表明高表達ALDH1的細胞具有高增殖率，可形成集落并表達干細胞標記物如β-連環(huán)素、Sox2和Nanog。這表明ALDH1可作為肉瘤干細胞的潛在標志物[16]。

1.4 整合素α6（CD49f）：整合素是一類跨膜糖蛋白，通過與細胞外基質(zhì)結(jié)合，調(diào)節(jié)細胞遷移及侵襲能力。整合素是一種由18種α亞基和8種β亞基構(gòu)成的異質(zhì)二聚體蛋白，總共形成24種不同的異質(zhì)二聚體整合素蛋白。CD49f由基因ITGA6編碼，與β1或β4結(jié)合形成α6β1或α6β4二聚體，與細胞外基質(zhì)蛋白結(jié)合，影響細胞內(nèi)生物學過程。研究表明，CD49f與乳腺癌干細胞的致瘤性有關(guān)，并可作為膠質(zhì)母細胞瘤干細胞的標記物[17-18]。Wang[19]等人通過對CD49f表達含量高的脂肪肉瘤細胞及CD49f表達含量低的細胞致瘤性對比，及復發(fā)患者脂肪肉瘤標本中CD49f測定，發(fā)現(xiàn)CD49f可促進脂肪肉瘤生長，并與脂肪肉瘤復發(fā)有關(guān)，這可能與激活的FAK/Src/ERK信號傳導有關(guān)。這提示CD49f參與了脂肪肉瘤細胞的自我復制、集落形成及腫瘤的發(fā)生。

1.5 氨基肽酶-N（APN/CD13）：APN是普遍存在的具有高分子量的外肽酶，是鋅粘合金屬蛋白家族的一員CD13的表達與信號肽的調(diào)節(jié)相關(guān)，并且與多種細胞的遷移有相關(guān)。最初是作為髓細胞表面標志物而被發(fā)現(xiàn)的,隨后發(fā)現(xiàn)其廣泛分布于多種細胞表面。APN的許多功能與正常發(fā)育（例如骨髓祖細胞的）和惡性過程如腫瘤細胞侵襲，分化，增殖，凋亡，運動和血管生成的各個方面相關(guān)[20]。CD13已被證明為Ras信號通路的轉(zhuǎn)錄位點，在腫瘤進展中起重要作用，并參與細胞粘附與侵襲[21-23]。Wang[19]等研究發(fā)現(xiàn)敲除CD13相關(guān)基因，可誘導脂肪肉瘤細胞凋亡，運用CD13抑制劑可抑制脂肪肉瘤細胞的生長。不僅可以作為細胞表面標志物，還可作為治療脂肪肉瘤的新的治療靶點。

1.6 內(nèi)皮唾液酸蛋白或腫瘤內(nèi)皮標記物1（CD248）：CD248是單通道跨膜受體，最早發(fā)現(xiàn)于1992年，其配體是細胞外基質(zhì)分子。CD248與周細胞和成纖維細胞的增殖和遷移有關(guān)。CD248是在腫瘤微血管周細胞上特異性高表達的分子，而在正常組織微血管周細胞和內(nèi)皮細胞上并不表達[24-28]。CD248在結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、腦腫瘤、黑色素瘤和鱗狀細胞癌過度表達。有關(guān)研究表明敲除CD248基因的小鼠，其腹部腫瘤表現(xiàn)出生長緩慢，侵襲性及轉(zhuǎn)移性均降低[24]。Rouleau[29]等人通過對42個人類肉瘤細胞系研究發(fā)現(xiàn)22個細胞系中內(nèi)皮唾液酸蛋白為陽性，并且mRNA和蛋白質(zhì)水平之間具有正相關(guān)性。當植入體內(nèi)時，內(nèi)皮唾液酸蛋白在所有傳播部位表達。證據(jù)表明內(nèi)皮唾液酸蛋白可以在晚期肉瘤中檢測到，并且可作為不良預后和晚期疾病的合適的治療靶標。Cecile[30]等人通過對250個腫瘤標本進行CD248檢測，得出80%的滑膜肉瘤標本和70%的脂肪肉瘤標本表達內(nèi)皮唾液酸蛋白，并得出皂草素結(jié)合IgG抗體可選擇性地抑制內(nèi)皮唾液酸蛋白陽性細胞的生長，可作為脂肪肉瘤及其他內(nèi)皮唾液酸蛋白陽性肉瘤可能的分子標記物及治療方法。

2 臨床意義

2.1 靶向治療：脂肪肉瘤的治療主要是以手術(shù)切除為主，但是手術(shù)切除后仍有很高的復發(fā)率，并且對于脂肪肉瘤復發(fā)及不能完全切除的脂肪肉瘤放療和化療治療效果仍有爭議的，靶向治療則成為脂肪肉瘤全身治療的關(guān)鍵。已有研究[31]運用相關(guān)基因表達蛋白的拮抗劑，如MDM2、CDK4及HIV蛋白酶等，從基因水平上對其進行治療。表面標志物同樣也可以通過這種方式抑制脂肪肉瘤的生長，相關(guān)研究表明靶向運用免疫抑制CD133藥物與PCI技術(shù)相結(jié)合可作為治療脂肪肉瘤的潛在的治療方法。其他實驗表明CD13為Ras信號通路的轉(zhuǎn)錄位點，敲除CD13相關(guān)基因，可誘導脂肪肉瘤細胞凋亡，運用CD13抑制劑（Bestatin）可抑制脂肪肉瘤細胞的生長，可作為脂肪肉瘤的新的治療靶點[12]。

2.2 檢測指標：脂肪肉瘤干細胞表面標志物是檢測脂肪肉瘤的關(guān)鍵，雖然可通過對整合素α6檢測觀察腫瘤復發(fā)情況，但是目前仍未找到其特異性的表面標志物?，F(xiàn)可通過聯(lián)合多種標志物來診斷，從而提高脂肪肉瘤診斷的敏感性。目前研究表明可通過CD133與ALDH共同表達對脂肪肉瘤干細胞進行分選，通過觀察是否共同表達CD133與ALDH，對脂肪肉瘤干細胞進行鑒定。多標志物檢測可提高診斷的準確性，為進一步研究表面標志物的主要方向。

3 展望

目前，對于脂肪肉瘤干細胞仍未有最特異性表面標志物。聯(lián)合多種表面標志物可提高腫瘤干細胞的分離純度，以便對研究脂肪肉瘤干細胞生物學特性及作用機制提供良好的基礎(chǔ)并有利于找尋脂肪肉瘤的其他治療方式，提高該疾病的治愈率及遠期的存活率。同時，聯(lián)合多種標志物表達表面標志物可提高診斷的準確性，更好的對該疾病的診斷及預后的進行評估。

[1]Alessandro DV,Laura M,Federica R,et al.Current classification, treatmentoptions,and new perspectives in the management of adipocytic sarcomas[J]. Onco Targets Ther,2016(9):6233-6246.

[2]Crago AM,Dickson MA.Liposarcoma:Multimodality Management and Future Targeted Therapies[J].Surg Oncol Clin N Am,2016,25(4):761-773.

[3]Bonnet D,Dick JE.Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell[J].Nat Med,1997,3(7):730-737.

[4]Merilovich M.The Isolation and Differentiation of Adipose Derived Mesenchymal Stem Cells[D].St.Catharines,Ontario:Biological Sciences,Brock University, 2016:1-127.

[5]Stratford E W,Castro R,Daffinrud J,et al.Characterization of liposarcoma cell lines for preclinical and biological studies[J]. Sarcoma,2011, 2012(2012):148614.

[6]Yan Z,Young ED,Bill K,et al.Heterogeneity and immunophenotypic plasticity of malignant cells in human liposarcomas[J].Stem Cell Res,2013,11(2):772-781.

[7]Wu Y,Wu PY.CD133 as a marker for cancer stem cells: progresses and concerns[J]. Stem Cells Dev,2009,18(8):1127-1134.

[8]Singh SK,Clarke ID,Terasaki M,et al.Identif l cation of a cancer stem cell in human brain tumors[J].Cancer Res,2003,63(18):5821-5828.

[9]Ma S,Chan KW,Lee KW,et al.Aldehyde Dehydrogenase Discriminates the CD133 Liver Cancer Stem Cell Populations[J]. Mol Cancer Res,2008,6(7):1146-1153.

[10]Stratford EW,Castro R,Wennerstrom A,et al.Liposarcoma cells with aldefluor and CD133 activity have a cancer stem cell potential[J]. Clin Sarcoma Res,2011,1(1):8-8.

[11]Stratford EW,Bostad M,Castro R,et al.Photochemical internalization of CD133-targeting immunotoxins eff l ciently depletes sarcoma cells with stem-like properties and reduces tumorigenicity [J].Biochim Biophys Acta,2013, 1830(8):4235-4243.

[12]Ginestier C,Min HH,Charafejauffret E,et al.ALDH1 is a marker of normal and malignant human mammary stem cells and a predictor of poor clinical outcome[J].Cell Stem Cell,2007,1(5):555-567.

[13]Rahadiani N,Ikeda JI,Mamat S,et al.Expression of aldehyde dehydrogenase 1 (ALDH1) in endometrioid adenocarcinoma and its clinical implications[J].Cancer Sci, 2011,102(4):903-908.

[14]Lohberger B,Rinner B,Stuendl N,et al.Aldehyde dehydrogenase 1,a potential marker for cancer stem cells in human sarcoma[J].PLoS One,2012,7(8):e43664.

[15]Martinezcruzado L,Tornin J,Santos L,et al.Aldh1 Expression and Activity Increase During Tumor Evolution in Sarcoma Cancer Stem Cell Populations[J].Sci Rep, 2016,13(6):27878.

[16]Nakahata K,Uehara S,Nishikawa S,et al.Aldehyde Dehydrogenase 1 (ALDH1) Is a Potential Marker for Cancer Stem Cells in Embryonal Rhabdomyosarcoma[J].PLoS One, 2015,10(4):e0125454.

[17]陸微,楊剛龍,薛鵬,等.整合素α6在不同轉(zhuǎn)移潛能膀胱癌細胞中的定量差異表達分析[J].生物化學與生物物理進展,2015(5):468-475.

[18]Takeyama H,Funahashi H,Sawai H,et al.Expression of alpha6 integrin subunit is associated with malignancy in gastricgastrointestinal stromal tumors[J].Med Sci Monit,2007,13(2):51-56.

[19]Wang L,Wang L,Gu Y,et al.Integrin α6high Cell Population Functions as an Initiator in Tumorigenesis and Relapse of Human Liposarcoma[J].Mol Cancer Ther, 2011, 10(12):2276-2286.

[20]Schmitt C,Voegelin M,Marin A,et al.Selective aminopeptidase-N (CD13) inhibitors with relevance to cancer chemotherapy[J].Bioorg Med Chem,2013, 21(7):2135-2144.

[21]Bhagwat SV,Petrovic N,Okamoto Y,et al.The angiogenic regulator CD13/APN is a transcriptional target of Ras signaling pathways in endothelial morphogenesis[J]. Blood,2003,101(5):1818-1826.

[22]Minaosorio P,Shapiro LH,Ortega E.CD13 in cell adhesion: aminopeptidase N (CD13) mediates homotypic aggregation of monocytic cells[J].J Leukoc Biol,2006,79(4):719-730.

[23]Petrovic N,Schacke W,Gahagan JR,et al.CD13/APN regulates endothelial invasion and filopodia formation[J]. Blood,2007,110(1):142-150.

[24]何福果,陳晏林,林曉,等.CD105與CD248在星形細胞膠質(zhì)瘤組織中的表達及其意義[J].中國生物制品學雜志,2015,28(6):593-597.

[25]Naylor AJ,Mcgettrick HM,Maynard WD,et al.A differential role for CD248 (Endosialin) in PDGF-mediated skeletal muscle angiogenesis[J].PLoS One,2014,9(9):e107146-e107146.

[26]Naylor AJ,Azzam E,Smith S,et al.The mesenchymal stem cell marker CD248 (endosialin) is a negative regulator of bone formation in mice[J].Arthritis Rheum, 2012,64(10):3334–3343.

[27]Hardie D L,Baldwin M J,Naylor A,et al.The stromal cell antigen CD248 (endosialin) is expressed on naive CD8+ human T cells and regulates proliferation[J].Immunology, 2011,133(3):288-295.

[28]劉培焱,王崇.CD248/內(nèi)皮唾酸蛋白在慢性肝損傷過程中通過血小板衍生生長因子調(diào)節(jié)機制顯著促進肝星狀細胞增殖簡[J].臨床肝膽病雜志,2016(10):1950-1950.

[29]Rouleau C,Smale R,Fu Y S,et al.Endosialin is expressed in high grade and advanced sarcomas:evidence from clinical specimens and preclinical modeling[J].Int J Oncol, 2011,39(1):73-89.

[30]Rouleau C,Curiel M,Weber W,et al.Endosialin protein expression and therapeutic target potential in human solid tumors:sarcoma versus carcinoma[J].Clin Cancer Res, 2008,14(22):7223-7336.

[31]Guan Z,Yu X,Wang H,et al.Advances in the targeted therapy of liposarcoma[J]. Onco Targets Ther,2015,5(8):125-136.

The Research Progress of Tumor Stem Cell Markers in Liposarcoma

LIAN Juan1，LIU Yi2
(1.The Second Clinical Medical College of Lanzhou University,Lanzhou 730030,Gansu,China; 2.The Center of Burns and Plastic Surgery,Lanzhou Command General Hospital of PLA, Lanzhou 730030,Gansu,China)

Liposarcoma stem cells are a kind of cells which have an increased ability to self-renew compared to the others and increased tumourigenicity in vivo.They are important for Liposarcoma occurrence and development.The specif l c marker scanaccurately isolate liposarcoma stem cells and have a certain role in the study of its characteristics and mechanism. This review aims to explore the Liposarcoma stem cell markers,in order to provide the theoretical basis for Liposarcoma diagnosis,improving the treatment methods and existence and prognosis.

liposarcoma stem cells;stem cell markers;therapy target;detection method

R730.262

A

1008-6455（2017）04-0125-03

2017-01-19

2017-03-23

編輯/張惠娟

甘肅省自然科學基金（編號：1506RJZA303）

劉毅，蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院全軍燒傷整形外科中心主任醫(yī)師、教授；E-mail:liuyi196402@163.com

廉娟，蘭州大學第二臨床醫(yī)學院在讀碩士研究生；E-mail:lianjuan0430@163.com