高 盼，王 蕓，張穎睿，時東方

（1.長春師范大學(xué)化學(xué)學(xué)院，吉林 長春 130032；2.長春師范大學(xué)中心實驗室，吉林 長春 130032）

白鮮皮乙醇提取物殺蟲活性初探

高 盼1，王 蕓1，張穎睿1，時東方2

（1.長春師范大學(xué)化學(xué)學(xué)院，吉林 長春 130032；2.長春師范大學(xué)中心實驗室，吉林 長春 130032）

通過對白鮮皮的醇提物來測定其對鱗翅目昆蟲黏蟲、苜蓿夜蛾、菜青蟲和鞘翅目昆蟲二十八星瓢蟲、雙斑螢葉甲、榆紫葉甲、綠豆象的殺蟲活性。采用ASE快速萃取技術(shù)，以乙醇為主要的提取溶劑，對白鮮皮中殺蟲活性成分進(jìn)行高效提取，初步探索了其醇提物殺蟲活性。

白鮮皮；醇提物；殺蟲活性

白鮮皮又名蘚皮、北鮮皮、臭根皮，其原植物為蕓香科白鮮屬植物白鮮（Dictamnus dasycar pus Turcz.）和狹葉白鮮（D.angu s tifoliusG.Doc），為吉林省常見道地藥材，干燥根皮入藥，味苦性寒，歸脾、胃、膀胱、小腸經(jīng)。一般生于山坡林緣、疏林灌叢，在春、秋二季采挖根部，除去泥沙及粗皮，剝?nèi)「?、干燥儲存?zhèn)溆谩Ｖ饕植荚趤啔W大陸，在中國則分布于東北、華北、華東及河南等地。目前的研究熱點集中在生物堿類和黃酮類化合物的提取分離，特別是在白鮮堿的提取分離工藝方面上具有廣泛的研究[2，3]。

作者采用ASE快速萃取技術(shù)，以乙醇為主要的提取溶劑，對白鮮皮中殺蟲活性成分進(jìn)行高效提取，初步探索了其醇提物殺蟲活性。

1 試驗材料與試驗方法

1.1 試驗材料

樣品：白鮮皮藥材，購于吉林同仁堂大藥房。乙醇、甲醇等試劑均為分析純（北京北化）。

供試?yán)ハx：雙斑螢葉甲、苜蓿夜蛾、榆紫葉甲、二十八星瓢蟲、黏蟲、菜青蟲、綠豆象。

儀器設(shè)備：手術(shù)鑷子、刮刀（玻璃材質(zhì)）、移液管、膠頭滴管、打孔器、自制濾紙等。

1.2 試驗設(shè)備

醫(yī)生在錄入門診特殊病相關(guān)材料或書寫電子病歷時操作失誤、信息錄入錯誤，又未仔細(xì)核對，導(dǎo)致患者病歷號、病理報告等信息錯誤，患者來回奔波于醫(yī)生和醫(yī)保辦之間修改信息，導(dǎo)致不滿投訴。

電熱恒溫培養(yǎng)箱（中國，南京電器）；超凈工作臺（中國，北京哈東聯(lián)）；立式高壓蒸汽滅菌器（中國，上海博訊）；水浴恒溫振蕩器（中國，江蘇金壇儀器）；鼓風(fēng)干燥箱（中國，上海福瑪設(shè)備）；大型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國，Heidolph）；循環(huán)水式多用真空泵（中國，鄭州長城）；電熱蒸餾水器（中國，上海躍進(jìn)）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（中國，上海浦東物理光學(xué)儀器）；電子天平（德國，Sartorius AG）；超聲清洗器（德國，Elma公司）；加樣槍（德國，Sigma公司）；0.45 μm濾膜（美國，Agilent公司）；純水器（韓國，YoungLin Instrument）；ASE快速溶劑萃取儀（美國，DE公司）。

2 試驗方法

2.1 待測樣品溶液的制備

采用快速溶劑萃取法以80%的乙醇溶液為提取溶劑，對白鮮皮中主要活性成分進(jìn)行提取，具體方法如下：準(zhǔn)確稱取15 g白鮮皮粉末，置于35 mL反應(yīng)釜中，以80%乙醇溶液為提取溶劑，提取時間5 min，提取溫度70℃，提取3次，將提取液過濾，減壓濃縮至無醇味，水浴鍋蒸干，稱重后定容至15 mL容量瓶中，置于4℃冰箱中冷藏備用。

2.2 活性初篩

根據(jù)本省常見農(nóng)業(yè)害蟲及林業(yè)害蟲侵染情況，選擇鱗翅目昆蟲黏蟲(Mythimna separata)、苜蓿夜蛾(Heliothis dipsacea)、菜青蟲(Pieris rapae Linnaeus)和鞘翅目昆蟲二十八星瓢蟲(Henosepilachna vigintioctopunctata)、雙斑螢葉甲(Monolepta hieroglyphica)、榆紫葉甲(Ambrostoma quadriimpressum Motschulsky)、綠豆象（Callosobruchus chinensis Linnaeus）為殺蟲活性供試?yán)ハx，對醇提液的活性進(jìn)行初步篩選[4，5]。

選擇雙斑螢葉甲的成蟲作為供試?yán)ハx，要求為室內(nèi)飼養(yǎng)后，個體大小一致且運動活躍作為測試對象；根據(jù)黏蟲的特性，其飼養(yǎng)條件為養(yǎng)蟲箱內(nèi)人工飼養(yǎng)，飼料喂干凈新鮮玉米幼葉，飼養(yǎng)條件為相對濕度≥75%，飼養(yǎng)溫度≤25℃，光照條件光暗比為14∶10[6]；其余待試?yán)ハx均為野外采集、室內(nèi)人工培養(yǎng)，選擇條件為個體大小基本一致，且比較活躍。

表1 白鮮皮醇提物對7種受試?yán)ハx的活性測定

2.3 白鮮皮醇提物對雙斑螢葉甲等待試?yán)ハx觸殺活性的篩選

對觸殺活性的測定采用點滴法，其具體操作步驟為鋪濕潤濾紙于直徑5 cm的培養(yǎng)皿中，供試?yán)ハx選擇標(biāo)準(zhǔn)為個體大小一致且活潑，醇提液經(jīng)稀釋至不同濃度梯度，超聲波清洗器高頻振蕩后充分溶解，點滴器（1μL）點滴藥液于供試?yán)ハx背部，點同劑量純水作陰性對照。定時觀察，并記錄供試?yán)ハx的死亡情況，于12 h后檢查供試?yán)ハx的死亡情況，利用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，并依據(jù)以下公式計算提取液對各供試?yán)ハx的死亡率及校正死亡率，同樣采用點滴法對供試黏蟲進(jìn)行觸殺活性測定。

死亡率（%）=死亡蟲數(shù)/總試蟲數(shù)×100

校正死亡率（%）=（處理死亡率-對照死亡率）（/1-對照死亡率）×100

采用毒片定量飼喂法進(jìn)行供試?yán)ハx的胃毒活性測定，挑選3～4齡黏蟲為研究對象，每皿1頭置于培養(yǎng)皿中，饑餓處理24 h，將供試液和過濾后的供試液配制成濃度梯度分別為100%、50%、25%，滴定管將供試液（1 μL）涂于1 cm×1 cm的玉米新葉上，即制成載毒葉片，每次處理5頭，每頭飼喂1片，同時以純凈水作陰性對照，記錄其死亡率及拒食情況。

3 試驗結(jié)果

3.1 醇提物殺蟲活性的初篩

經(jīng)初步篩選的結(jié)果看（見表1），白鮮皮醇提物對黏蟲具有觸殺毒性，且表現(xiàn)出具有強(qiáng)烈的拒食活性，其胃毒活性有待進(jìn)一步測定；對二十八星瓢蟲和苜蓿夜蛾無觸殺活性；對雙斑螢葉甲具有觸殺活性；對榆紫葉甲有胃毒，無觸殺活性；對菜青蟲和綠豆象有觸殺毒性。

3.2 白鮮皮醇提物對雙斑螢葉甲的殺蟲活性[4,5]

白鮮皮醇提物對雙斑螢葉甲幼蟲的殺蟲活性情況見表2，施液量為1 μL/頭。

從表2可以看出，白鮮皮乙醇提取物對雙斑螢葉甲幼蟲具有極為顯著的殺蟲活性，見圖1。

表2 白鮮皮醇提物對雙斑螢葉甲幼蟲的殺蟲活性

圖1 白鮮皮醇提物處理雙斑螢葉甲幼蟲后的中毒癥狀

施藥時間≥1 d、藥液濃度為A時，觸殺作用的平均校正死亡率已經(jīng)超過50%；當(dāng)施藥時間達(dá)3 d、藥液濃度為B時，最高矯正死亡率已經(jīng)達(dá)到66.9%，表現(xiàn)出較為明顯的殺蟲活性。

3.3 白鮮皮醇提物對黏蟲的殺蟲活性[6]

白鮮皮醇提物對黏蟲幼蟲（2～3齡）的殺蟲活性情況見表3。

表3 白鮮皮醇提物對黏蟲幼蟲的殺蟲活性

從表3可以看出，白鮮皮乙醇提取物對黏蟲有殺蟲活性。施藥時間≥2 d、藥液濃度為B時，觸殺作用的平均校正死亡率均超過50%，白鮮皮醇提物對黏蟲幼蟲的觸殺作用遠(yuǎn)強(qiáng)于胃毒作用，但是顯示有明顯的拒食活性。

4 結(jié)論

農(nóng)業(yè)生產(chǎn)一般是通過化學(xué)合成藥物的方法來進(jìn)行害蟲的防治，它擁有易合成、殺毒效率高、價格較為便宜的優(yōu)點，但是也會產(chǎn)生消極的一方面，會有農(nóng)藥殘留，導(dǎo)致環(huán)境污染，進(jìn)而破壞生態(tài)平衡。

隨著科技的發(fā)展，人類對食品安全也越來越重視，因此，尋找污染小、對自然平衡破壞力小的方法是解決這類問題的鑰匙，而作為生物防治措施之一的植物性殺蟲劑恰巧具有所必需的優(yōu)點。因為植物性殺蟲劑具有在自然環(huán)境中易于降解、無殘留等優(yōu)點，導(dǎo)致其具有不污染的特性，所以，它可以保證人和家畜的安全，且對天敵無毒害作用。因此，其對生命安全、環(huán)境保護(hù)及生態(tài)平衡方面具有重要意義，其發(fā)展也必將會越來越廣泛，越來越得到重視。

[1]李永夫,羅安程.植物源農(nóng)藥的研究和應(yīng)用進(jìn)展[J].科技通報, 2003,19（5）:434-438.

[2]康勝利，王素賢，朱廷儒.中藥白鮮皮活性成分的研究[J].沈陽藥學(xué)院學(xué)報，1983,18(6):11-14.

[3]王兆全,徐鳳鳴,安詩友.白鮮皮的化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志,1992,17(9):551-556.

[4]李志剛.雙斑螢葉甲危害春玉米花絲對結(jié)實率影響的調(diào)查分析[J].北京農(nóng)業(yè)，2007,11(4):21-23.

[5]史慶馨,方明,聶凱,等.大白菜雙斑螢葉甲的發(fā)生與防治[J].北方園藝,2010,(24):169-172.

[6]余洋,王高平.黏蟲的實驗室飼養(yǎng)方法研究[J].河南農(nóng)業(yè),2011, 11(6):45-47.

1005-2690（2016）11-0114-03

：S482.39

：B

2016-10-30）

吉林省發(fā)改委項目（項目編號2013C002）；長春師范大學(xué)自然科學(xué)基金項目（長師院自科合字[2015]第011號）

高盼(1996-），女，吉林扶余人，主要從事天然產(chǎn)物研究方面工作。

時東方(1978-)，男，副教授，主要從事天然產(chǎn)物研究。