徐 燕，何 濤,袁紅瑛

(1．河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院/河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南洛陽(yáng) 471003；2.河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室,河南洛陽(yáng) 471003)

cIAP與Caspase-7在子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系研究

徐 燕1，何 濤1,袁紅瑛2△

(1．河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院/河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南洛陽(yáng) 471003；2.河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室,河南洛陽(yáng) 471003)

目的 探索細(xì)胞凋亡抑制蛋白cIAP和凋亡蛋白Caspase-7在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系。方法 選取2009～2010年在河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院行子宮內(nèi)膜癌根治且術(shù)后病理證實(shí)為子宮內(nèi)膜腺癌患者55例，統(tǒng)計(jì)發(fā)病時(shí)組織學(xué)分類(lèi)、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡等參數(shù)，電話(huà)隨訪無(wú)瘤生存期及總生存期，取病理標(biāo)本石蠟切片行免疫組化，觀察cIAP與Caspase-7的表達(dá)，并分析其與各參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 cIAP與Caspase-7的表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌組織學(xué)分類(lèi)、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，而與肌層浸潤(rùn)、年齡無(wú)關(guān)(P>0.05)。cIAP與Caspase-7陽(yáng)性表達(dá)和陰性表達(dá)的患者總生存期之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 子宮內(nèi)膜腺癌患者cIAP與Caspase-7的表達(dá)水平與腫瘤分級(jí)、總生存期具有相關(guān)性，或可作為子宮內(nèi)膜腺癌預(yù)后檢測(cè)指標(biāo)。

子宮內(nèi)膜腫瘤；腺癌；凋亡抑制蛋白質(zhì)類(lèi)；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶7；免疫組織化學(xué)

凋亡抑制因子(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)是一類(lèi)高度保守的內(nèi)源性抗細(xì)胞凋亡因子家族，主要通過(guò)抑制凋亡因子Caspase家族的活性而抑制細(xì)胞凋亡。cIAP(包括cIAP-1和cIAP-2)是IAP家族的重要成員之一，不僅具有IAP家族的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)，還有其特殊結(jié)構(gòu)-胱冬肽酶募集結(jié)構(gòu)域 (caspase recruitment domain,CARD)[1]，參與多個(gè)細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)交互作用[2]，可直接抑制Caspase-3、Caspase-7和Caspase-9的活性，從而抑制細(xì)胞凋亡[3]，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及腫瘤耐藥性形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用。本研究采用免疫組化聯(lián)合檢測(cè)了cIAP、Caspase-7在子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達(dá)，以期尋找子宮內(nèi)膜癌新的分子治療靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1．1 一般資料 收集河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院2009～2010年刮宮和手術(shù)切除的55例子宮內(nèi)膜腺癌患者存檔石蠟標(biāo)本，根據(jù)組織學(xué)類(lèi)型分為正常增殖期子宮內(nèi)膜組織(12例)、子宮內(nèi)膜不典型增生組織(17例)與子宮內(nèi)膜腺癌組織(55例)。臨床分期按FIGO(2009年)：Ⅰ期～Ⅱ期37例，Ⅲ～Ⅳ期18例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例，未發(fā)生轉(zhuǎn)移37例。所有選取病例均無(wú)其他的惡性腫瘤，術(shù)前未進(jìn)行放療及化療，術(shù)后均經(jīng)過(guò)病理證實(shí)。通過(guò)查閱病例，術(shù)后門(mén)診復(fù)查患者登記和電話(huà)隨訪的方法，統(tǒng)計(jì)患者手術(shù)方式、化療方案及術(shù)后生存時(shí)間，截止日期為2015年12月31日。

1 ．2 方法 兔抗人多克隆cIAP 抗體濃縮液(工作濃度1∶100)，兔抗人多克隆Caspase-7抗體濃縮液(工作濃度1∶300)，購(gòu)于美國(guó)Prosci公司。免疫組化SP試劑盒、DAB顯色試劑均購(gòu)于北京中山金橋生物技術(shù)有限公司。所有標(biāo)本均為石蠟包埋的存檔標(biāo)本，連續(xù)切片4張，厚4 μm 。采用免疫組化SP二步法，取已知切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1．3 結(jié)果判定 cIAP 免疫組化陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色細(xì)顆粒狀，主要定位于腫瘤細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中。Caspase-7免疫組化陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色細(xì)顆粒狀，定位于腫瘤細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中。根據(jù)其染色程度與陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行綜合評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)：光鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野，記錄10×100個(gè)腫瘤細(xì)胞內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的百分比，無(wú)記0分，≤25%記1分，≤50%記2分，≤75%記3分，>75%記4分;著色強(qiáng)度：無(wú)色記0分，淺黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分;每例標(biāo)本最后得分為二者相乘，0分為陰性(-)，1～2分微弱陽(yáng)性(+)，3～4分為陽(yáng)性(++)，>4分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

表1 cIAP、Caspase-7在各組織中的表達(dá)比較[n(%)]

A:Caspase-7在正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(×400);B:Caspase-7在不典型增生子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(×400);C:cIAP在高分化子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)(×400);D:cIAP在中分化子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)(×400);E:cIAP在低分化子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)(×400)。

圖1 Caspase-7、cIAP在各組織中的表達(dá)

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件，有序分類(lèi)變量資料采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，二者之間的相關(guān)性運(yùn)用Spearman相關(guān)分析檢驗(yàn)，術(shù)后生存時(shí)間采用Log-rank檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 各組中cIAP、Caspase-7表達(dá)情況 cIAP在各組中的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=20.436，P<0.05)。cIAP在子宮內(nèi)膜腺癌組織的表達(dá)率78.2%高于正常增殖期子宮內(nèi)膜組織25.0%、子宮內(nèi)膜不典型增生組織29.4%(χ2=12.947、13.899，P<0.05)，正常增殖期子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜不典型增生組織比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.625，P>0.05)。Caspase-7在各組中的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.149，P<0.05)。Caspase-7在子宮內(nèi)膜腺癌組織的表達(dá)率36.3%低于正常增殖期子宮內(nèi)膜組織83.3%、子宮內(nèi)膜不典型增生組織76.4%(χ2=8.798、8.414，P<0.05)，正常增殖期子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜不典型增生組織比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.202，P>0.05)。見(jiàn)表1。

2．2 cIAP、Caspase-7表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床生物學(xué)特征關(guān)系 隨著腫瘤臨床分期、病理分級(jí)的增高，cIAP的陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高，Caspase-7的表達(dá)率明顯降低。二者的表達(dá)與患者的年齡、肌層浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表2、圖1。

表2 cIAP、Caspase-7的表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床生物學(xué)特性關(guān)系[n(%)]

續(xù)表2 cIAP、Caspase-7的表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床生物學(xué)特性關(guān)系[n(%)]

2.3 cIAP、Caspase-7表達(dá)在子宮內(nèi)膜腺癌中的相關(guān)性 在55例子宮內(nèi)膜腺癌組織中的cIAP陽(yáng)性表達(dá)43例，Caspase-7陽(yáng)性有20例。cIAP和Caspase-7共同陽(yáng)性表達(dá)9例，陰性表達(dá)1例。采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，二者呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.607,P=0.000)。

2.4 cIAP、Caspase-7表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌臨床預(yù)后的關(guān)系 對(duì)55例子宮內(nèi)膜腺癌患者術(shù)后生存時(shí)間的隨訪截止于2015年12月31日，統(tǒng)計(jì)化療方案一致，共得到32例患者的總生存時(shí)間(Ⅰ～Ⅱ期19例，Ⅲ～Ⅳ期13例)，刪失23例(Ⅰa期9例，Ⅰb～Ⅱ期9例，Ⅲ～Ⅳ期5例)，隨訪率為58.2%，cIAP表達(dá)陽(yáng)性病例總體生存率低于陰性病例,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.286，P=0.021)，Caspase-7表達(dá)陽(yáng)性病例總體生存率高于陰性病例,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.393，P=0.036)。見(jiàn)圖2。

A:cIAP的表達(dá)；B：Caspase-7的表達(dá)

圖2 cIAp、Caspase-7表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌臨床預(yù)后分析

3 討 論

子宮內(nèi)膜癌為女性生殖器三大惡性腫瘤之一，其病理分型中腺癌占80%～90%。近年來(lái),隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)高速發(fā)展,人們生活習(xí)慣及飲食結(jié)構(gòu)西方化,肥胖人群增多,以及絕經(jīng)延遲等多種因素導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌發(fā)生率明顯上升[4]。在治療方面，積極外科分期手術(shù)、化療、放療及激素治療，對(duì)提高患者的生存率有很好的療效。據(jù)報(bào)道，手術(shù)切除子宮及雙側(cè)輸卵管對(duì)于早期子宮內(nèi)膜癌術(shù)后5年無(wú)瘤生存率達(dá)到了80%～95%，但是，晚期子宮內(nèi)膜癌患者的5年生存率只有17%[5]。細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)紊亂有助于細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤的進(jìn)展，參與腫瘤逃避機(jī)體免疫監(jiān)督和術(shù)后復(fù)發(fā)，與腫瘤耐受化療和放療也密切相關(guān)[6]。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞在化療過(guò)程中的凋亡是通過(guò)具有效應(yīng)作用的Caspase-3、6、7蛋白水解介導(dǎo)的，而cIAP卻抑制Caspase蛋白水解的過(guò)程：cIAP-1能直接與激活的Caspase-3和Caspase-7結(jié)合，從而抑制細(xì)胞色素C從線粒體釋放之后的凋亡信號(hào)通路[7]，繼而抑制細(xì)胞凋亡。Psyrri等[8]通過(guò)對(duì)150例晚期卵巢癌患者的組織芯片研究發(fā)現(xiàn)，cIAP高表達(dá)組的總生存率小于3年，提示在卵巢癌患者cIAP的表達(dá)中具有重要的預(yù)后意義。Gordon等[9]研究發(fā)現(xiàn)，cIAP1/2蛋白過(guò)表達(dá)介導(dǎo)了惡性胸膜間皮瘤對(duì)順鉑或其他化療藥的耐藥性。Montagut等[10]同樣發(fā)現(xiàn)用基因敲除的方法聯(lián)合敲除cIAP-1、cIAP-2、XIAP，可恢復(fù)細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著腫瘤臨床分期和病理分級(jí)的增高，cIAP的陽(yáng)性表達(dá)率明顯增強(qiáng)，同時(shí)cIAP表達(dá)陽(yáng)性病例總體生存率低于陰性病例；而Caspase-7卻相反，其表達(dá)與cIAP呈負(fù)相關(guān)，且Caspase-7表達(dá)陽(yáng)性病例總體生存率高于陰性病例。本研究提示，cIAP抑制Caspase家族促凋亡作用可能在子宮內(nèi)膜腺癌形成的過(guò)程中發(fā)揮重要的作用，同時(shí)cIAP家族可能在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中存在相同或類(lèi)似的致細(xì)胞耐藥機(jī)制，從而導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)并影響患者總生存期。因此，兩因子的聯(lián)合檢測(cè)可能為子宮內(nèi)膜腺癌的抗腫瘤藥物，以及分子靶向治療提供理論基礎(chǔ)。在術(shù)后隨訪階段，23例刪失病例中9例患者因?yàn)樾g(shù)前登記信息有誤且患者術(shù)后均未及時(shí)來(lái)院復(fù)查而失訪，6例患者因家庭經(jīng)濟(jì)狀況術(shù)后未到醫(yī)院化療，化療信息不詳而被剔除，8例患者家屬對(duì)隨訪持懷疑態(tài)度，拒絕提供患者的具體生存狀況；這也提示，地方醫(yī)院臨床醫(yī)師今后應(yīng)提高科研意識(shí)，加強(qiáng)溝通，提高患者依從性，爭(zhēng)取為較大規(guī)模的臨床試驗(yàn)提供完善的臨床資料。

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The expression of cIAP and Caspase-7 in endometrial adenocarcinoma and its relationship with the prognosis

XuYan1,HeTao1,YuanHongying2△

(1.ClinicalMedicineCollege,HenanUniversityofScienceandTechnology/theFirstAffiliatedHospitalofHenanUniversityofScienceandTechnology,Luoyang,Henan471003，China； 2.LaboratoryofMicrobiology,MedicalCollegeofHenanUniversityofScienceandTechnology,Henan471003，China)

Objective To study the expression of cIAP and Caspase-7 in endometrial adenocarcinoma tissue and its relation with prognosis.Methods Fifty-five cases tissues of endometrial adenocarcinoma patients were detected by immunohistochemistry assay from the First Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology from 2009 to 2010.Histological classification,pathological stage,lymph node metastasis,age and other parameters were collected,the survival and overall survival of the tumor were followed up,immunohistochemistry was used to observe the expression of cIAP and Caspase-7 in paraffin sections of pathological specimens,and the relationship between them and the parameters were analyzed.Results The expression level of cIAP and Caspase-7 was related to the histological classification,pathological stage and lymph node metastasis of endometrial carcinoma(P<0.05),but it was not related with the age，muscular layer infiltration(P>0.05).There was significant difference between the positive expression and the negative expression of cIAP and Caspase-7(P<0.05).Conclusion The expression level of cIAP and Caspase-7 in patients with endometrial carcinoma is correlated with tumor grade and overall survival,or can be used as a prognostic indicator for endometrial cancer.

endometrial neoplasms;adenocarcinoma；inhibitor of apoptosis proteins;Caspase 7；immunohistochemistry

徐燕(1977-)，主治醫(yī)師，在讀碩士，主要從事婦科腫瘤診治的研究?！?/p>

??·臨床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.36.021

R71

A

1671-8348(2016)36-5107-03

2016-07-21

2016-09-22)