胡玉兵，曾 輝，楊紅兵，黃永升，王 佳

（1.安徽國星生物化學有限公司，安徽馬鞍山243100；2.安徽雜環(huán)化學省級實驗室，安徽馬鞍山243100）

草銨膦關鍵中間體高效液相色譜分析方法的研究

胡玉兵1，曾 輝2*，楊紅兵2，黃永升2，王 佳2

（1.安徽國星生物化學有限公司，安徽馬鞍山243100；2.安徽雜環(huán)化學省級實驗室，安徽馬鞍山243100）

采用高效液相色譜法，以離子對緩沖鹽+乙腈溶液為流動相，使用Ultimate XBC18色譜柱和二極管陣列檢測器，在250 nm波長下對4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸進行定量分析。結果表明，該分析方法線性相關系數(shù)為0.9978，標準偏差為0.0182，變異系數(shù)為0.0195%，平均回收率為99.36%。

4-（甲基羥基磷酰基）-2-羰基丁酸；高效液相色譜；分析

0 前言

4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸CAS號：79778-02-2分子式：C5H9O5P是制備（L）-草銨膦的重要前體化合物[1]。該化合物的分析方法未見報道。由于該化合物的酸性較強，給HPLC分析方法開發(fā)帶來了一系列挑戰(zhàn)。通常對于酸性物質的檢測可以采用陰離子交換柱進行分析，該方法的缺點是采用了高鹽的流動相對色譜柱及儀器有損害，而且化合物的出峰位置隨著色譜柱的柱效降低而改變。因此有必要建立一種簡便、準確可靠的檢測方法。離子對試劑廣泛用于分析店里能力較強的化合物。本實驗采用高效液相色譜法利用C18色譜柱以離子對緩沖鹽和乙腈為流動相建立了一種準確可靠的4-（甲基羥基磷酰基）-2-羰基丁酸檢測方法，具有快速、準確，分離效果好，準確度及精密度均能達到定量分析的要求，可以作為企業(yè)生產(chǎn)過程質量控制和質檢機構分析檢測方法。

圖1 （L）-草銨膦的生物合成

1 材料與方法

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀；DAD檢測器；1200色譜工作站。

1.2 試劑和溶液

4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸標樣：已知質量分數(shù)為99.2%（浙江大學生物工程研究所提供）、4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸原粉（由某公司提供）、十二烷基磺酸鈉（離子對試劑）、四丁基溴化銨（離子對試劑）、磷酸（HPLC級）、乙腈（HPLC級）、超純水（電阻率為18.2 MΩ·cm 25℃）。

1.3 液相色譜操作條件

流動相：緩沖鹽：乙腈=75∶25；緩沖鹽配置：十二烷基磺酸鈉（14.42 g）溶于800 mL純水中，再加入10mL四丁基溴化銨（10%）用水稀釋至1000mL，再用50%磷酸調(diào)pH至4.5，混合均勻后超聲脫氣；色譜柱：Ultimate XB-C18，5 μm,4.6×250 mm；柱溫：30℃；檢測波長：205 nm,進樣量：6 μL，目標化合物保留時間:10.0 min。

上述液相色譜條件，系典型操作參數(shù)，可以根據(jù)不同儀器特點，對給定的操作參數(shù)作適當調(diào)整，以獲得最佳的效果。4-（甲基羥基磷酰基）-2-羰基丁酸標樣和4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸原粉的高效液相色譜圖（圖3、圖4）。

圖2 空白對照

圖3 4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸標樣高效液相色譜圖

圖4 4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸原粉高效液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標樣溶液的配制

稱取4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸標樣0.04 g（精確至0.0002 g），置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸原粉0.04 g（精確至0.0002 g），置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

1.4.3 測定在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直至相鄰兩針標樣溶液的相應值相對變化＜1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.4.4 計算將測得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標樣溶液中4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸峰面積分別進行平均。試樣中4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸質量分數(shù)ω（%）按下式計算：

式中：A1─標樣溶液中4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸面積的平均值；

A2─試樣溶液中4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸面積的平均值；

m1─標樣的質量/g；

m2─試樣的質量/g；

P─標樣4-（甲基羥基磷酰基）-2-羰基丁酸的質量分數(shù)/%。

2 結果與討論

（1）色譜條件的選擇使用二極管陣列檢測器自帶的波長掃描功能，獲得了標樣在不同波長下的紫外吸收圖譜。從圖5中可以看到，標樣在205 nm處有最強的紫外吸收，故將檢測波長定為250 nm。

使用Ultimate XB-C18反相柱進行檢測?？紤]到4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸酸性較強，和C18色譜柱的結合能力較弱，故使用乙腈和離子對試劑組成的混合緩沖鹽作為流動相。通過在1000 mL流動相中加入適量磷酸調(diào)pH至4.5，獲得了較好的峰形。通過對流動相中緩沖鹽和乙腈比例的篩選，最終確定混合緩沖鹽和乙腈的體積比為75∶25，在流速1.0 mL/min時，有效成分與雜質均獲得了較高的理論塔板數(shù)和較小的拖尾因子，峰形對稱，基線平穩(wěn)。

（2）分析方法的線性相關性試驗。精密稱取2.4.1中配制的標樣溶液200 μL、400 μL、600 μL、800 μL、1000 μL,定容至1 mL，以4-（甲基羥基磷酰基）-2-羰基丁酸質量為橫坐標，液相峰面積為縱坐標，運用最小二乘法進行線性擬合，得到線性方程為y=1439.8x+6.8721，線性相關系數(shù)為0.9978。

（3）分析方法的精密度試驗。取同一批試樣，進樣5次，使用上述色譜操作條件下進行檢測，測得4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸的標準偏差為0.0182，變異系數(shù)為0.0195%，見表1。

（4）分析方法的準確度試驗。從已知質量分數(shù)的4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸（93.50%）中稱取5個試樣，分別加入一定量的4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸標樣（99.20%），在上述色譜操作條件下進行分析，測得4-（甲基羥基磷?；?2-羰基丁酸的平均回收率為99.36%，見表2。

圖5 標樣的紫外波長掃描圖譜

表1 分析方法精密度實驗結果

表2 分析方法的準確度試驗結果

3 結論

試驗結果表明：本方法具有較高的準確度和精密度，線性關系良好。目標化合物及各個雜質均具有良好的分離度，有較高的理論塔板數(shù)和較低的拖尾因子，操作簡便。能夠滿足草銨膦相關工藝開發(fā)需求。

[1]金井敏，村上健，原修，等.制備L-2-氨基-4-（羥基甲基氧膦基）丁酸的新方法:CN，87105130[P].1988-06-15.

尊敬的讀者朋友：

根據(jù)作者建議，《浙江化工》2016年第47卷第11期有兩處需更改：

（1）英文目錄頁中“Bromine Tank Process Design”改為“Process Design of Bromine Tank Area”。

（2）第47頁的英文部分改為：

Abstract:Br is a B-class strong oxidant.It is highly corrosive and has high toxicity.Many enterprises place bromine in ceramic jars with a great security risk.Bromine storage,material of transportation equipment,unreasonable process selection will cause major accidents in production.Based on the example of process design,some suggestions were talked about from the material,process design,automation control instruments and equipment layout.

Keywords:bromine;PVDF;halogen;process design

Analytical Method of Glufosinate Key IntermediateBy HPLC

HU Yu-bing1,ZENG Hui2*,YANG Hong-bing2,HUANG Yong-sheng2,WANG jia2
（1.Anhui Costar Bio-Chemical Co.，Ltd.，Ma'anshan，Anhui 243100，China；2.Anhui Provinical Key Laboratory of Heterocyclic Chemistry，Ma'anshan，Anhui 243100，China）

A method for quantitative analysis of 4-（methyl hydroxyphosphoryl）2-carbonyl butyric acid by HPLC with Ion pair buffer salt and acetonitrile solution as mobile phase,Ultimate XB-C18 column and DAD at 250 nm wavelengthwas described.The result showed that the linear correlation coefficient was 0.9978,the standard deviation was 0.0182,the variation coefficient was 0.0195%,the average recovery was 99.36%.

4-（methyl hydroxyphosphoryl）2-carbonyl butyric acid；HPLC；analysis

Process Design of Bromine Tank Area

YING Zhong-yi
（Zhejiang Stanchion Engineering Design Co.,Ltd.,Hangzhou，Zhejiang 310023，China）

1006-4184（2016）12-0051-04

2016-06-28

胡玉兵（1974-），男，工程總監(jiān)，主要從事農(nóng)藥合成及分析研究工作。E-mail：HYB3308@163.com。

*通訊作者：曾輝，E-mail：guigudongli2008@126.com。