吳海燕，王曉燕，鄧曉楊，曾 俊

1.成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 (成都 610500)；2.成都醫(yī)學(xué)院 (成都 610500)

·論 著·

細(xì)胞周期素 E 與轉(zhuǎn)錄因子在子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)及意義

吳海燕1，王曉燕1，鄧曉楊1，曾 俊2△

1.成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 (成都 610500)；2.成都醫(yī)學(xué)院 (成都 610500)

目的 檢測(cè)細(xì)胞周期素 E (Cyclin E)與轉(zhuǎn)錄因子(Twist)在子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)，并探討Cyclin E與Twist在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的關(guān)系。方法 采用免疫組化法檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌中Cyclin E和Twist的表達(dá)情況，并用半定量方法對(duì)鏡下的陽性細(xì)胞百分比以及染色強(qiáng)度給予評(píng)分。結(jié)果 Cyclin E在子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達(dá)率(71.25%)明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織(6.00%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；Twist在子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達(dá)率(77.50%)明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織(10.00%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。在子宮內(nèi)膜癌中，Cyclin E和Twist的表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 Cyclin E及Twist在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá)，二者在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程中存在一定聯(lián)系。

子宮內(nèi)膜癌； 細(xì)胞周期素 E； 轉(zhuǎn)錄因子

子宮內(nèi)膜癌是較為常見的婦科惡性腫瘤，該病有逐年上升的趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅患者的身心健康，子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制尚不完全明確，涉及到多個(gè)癌基因的突變以及細(xì)胞周期的失常。Cyclin E是細(xì)胞周期中G1期的周期蛋白，該蛋白與人周期素依賴性激酶2(CDK-2)在細(xì)胞的G1期共同發(fā)揮作用，協(xié)助細(xì)胞進(jìn)入S期。Cyclin E過度表達(dá)可以導(dǎo)致細(xì)胞的增殖失控，可能是腫瘤形成的內(nèi)源性因素[1]。Twist是一種致癌基因，其廣泛參與器官組織的生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控，具有促進(jìn)血管形成、抑制細(xì)胞凋亡、增進(jìn)細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤形成等作用，在腫瘤的浸潤(rùn)、侵蝕和轉(zhuǎn)移過程中起到重要作用[2]。本試驗(yàn)通過檢測(cè)Cyclin E和Twist在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)水平，探討二者與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

收集2012年7月至2014年1月成都醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院手術(shù)切除的子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本的存檔蠟塊80例。 按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)的分期標(biāo)準(zhǔn)，臨床分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期23例，Ⅲ期24例，Ⅳ期12例； 病理分級(jí)：G1級(jí)25例，G2級(jí)36例，G3級(jí)19例。所有患者在手術(shù)前均未接受過化療、放療，且臨床及病理資料完整。選取同期因子宮肌瘤而行子宮切除術(shù)，且病理證實(shí)子宮內(nèi)膜正常的存檔蠟塊50例作為對(duì)照。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)試劑 鼠抗人 Cyclic E單克隆抗體購(gòu)自Barkers公司。濃縮型鼠抗人 Twist 多克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz 公司。S-P 試劑盒、DAB 顯色劑均購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2.2 試驗(yàn)方法 采用免疫組化法(SP法) 檢測(cè)Cyclin E及Twist的表達(dá)。標(biāo)本由濃度為10%的甲醛溶液固定，石蠟包埋，常規(guī)切片為4 μm，具體染色步驟嚴(yán)格按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作。

1.2.3 染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 用雙盲閱片法，由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師分別閱片。Cyclin E和Twist的陽性表達(dá)以染色呈棕黃色顆粒為陽性結(jié)果。用半定量結(jié)果判斷方法，對(duì)鏡下的陽性細(xì)胞百分比以及染色強(qiáng)度給予評(píng)分[3]。細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陰性為0分，弱陽性為1分，中度陽性為2分，強(qiáng)陽性為3分；陽性細(xì)胞百分比評(píng)分：在每個(gè)切片上觀察5個(gè)高倍視野(×200)，對(duì)陽性細(xì)胞的百分比進(jìn)行計(jì)數(shù)，陽性細(xì)胞數(shù)<5%為0分，5%～25%為1分， 26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分。以上二者的分值相乘為細(xì)胞染色的陽性等級(jí)：0分為陰性(-)，1～4分為弱陽性(+)，5～8分為陽性(++)，9～12分為強(qiáng)陽性(+++)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，定性資料采用例數(shù)(%)描述，組間比較采用2檢驗(yàn)，Cyclin E和Twist表達(dá)陽性率的相關(guān)性分析運(yùn)用列聯(lián)系數(shù)方法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α設(shè)定為0.05。

2 結(jié)果

2.1 Cyclin E和Twist在正常子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)比較

Cyclin E在子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達(dá)率為71.25%(57/80)，在正常子宮內(nèi)膜中的陽性表達(dá)率為6.00%(3/50)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Twist在子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達(dá)率為77.50%(62/80)，在正常子宮內(nèi)膜中的陽性表達(dá)率為10.00%(5/50)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)(表1～2)。

表1 Cyclin E在正常子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)[n(%)]

表2 Twist在正常子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)[n(%)]

2.2 Cyclin E和Twist表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系

Cyclin E和Twist表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(P<0.001)，而與子宮內(nèi)膜癌患者的年齡無相關(guān)性(P>0.05)(表3～4)。

表3 Cyclin E與正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌中臨床病理特征的關(guān)系

分組例數(shù)-+～+++2P年齡/歲0.1820.670 <50461729 ≥50341123FIGO分期10.486<0.001 Ⅰ～Ⅱ422517 Ⅲ～Ⅳ38929病理分級(jí)22.347<0.001 G125214 G2～G3551540淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18.885<0.001 有25223 無553322

表4 Twist與正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌中臨床病理特征的關(guān)系

分組例數(shù)-+～+++2P年齡/歲1.3430.247 <50461234 ≥50341321FIGO分期17.902<0.001 Ⅰ～Ⅱ42339 Ⅲ～Ⅳ381226病理分級(jí)9.6990.002 G125187 G2～G3551936淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9.2530.002 有25322 無552629

2.3 子宮內(nèi)膜癌中Cyclin E和Twist表達(dá)的相關(guān)性

通過采用列聯(lián)系數(shù)分析顯示，在子宮內(nèi)膜癌中，Cyclin E和Twist的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.239，P=0.027)(表5)。

表5 Cyclin E和Twist在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)的相關(guān)性分析

3 討論

3.1 子宮內(nèi)膜癌中Cyclin E表達(dá)的臨床意義

Cyclin E是G1細(xì)胞周期素，其參與到細(xì)胞周期的進(jìn)程，是細(xì)胞在G1期與S期轉(zhuǎn)換過程中的主要限速因子，Cyclin E的過度表達(dá)能夠縮短細(xì)胞的G1期，使細(xì)胞加速進(jìn)入S期，引起中心體過度增殖，擾亂有絲分裂的正常進(jìn)程，形成細(xì)胞的異常繁殖，從而誘發(fā)腫瘤的形成。本研究發(fā)現(xiàn)，Cyclin E的過度表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(P<0.05)，提示Cyclin E與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展密切相關(guān)。蔣金芳等[4]指出，CyclinE的陽性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的組織學(xué)分級(jí)相關(guān),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。吳紅蓮等[5]指出，CyclinE蛋白的高表達(dá)可能為宮頸組織惡變的生物學(xué)標(biāo)志。韋毓等[6]研究表明，子宮內(nèi)膜樣癌中，Cyclin E蛋白的陽性率均明顯高于正常子宮內(nèi)膜組和子宮內(nèi)膜增生組,同時(shí)Cyclin E陽性率隨著病理分級(jí)的增高而升高。

3.2 Twist與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系

Twist 基因是一種癌基因，其在腫瘤的侵襲過程中起著重要作用。目前研究[7]認(rèn)為，Twist 基因能夠使腫瘤細(xì)胞適應(yīng)周圍的基質(zhì)環(huán)境，獲得性的上皮特性，形成轉(zhuǎn)移病灶，并且在轉(zhuǎn)移病灶中，腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力較原發(fā)腫瘤更強(qiáng)，甚至?xí)霈F(xiàn)抵抗腫瘤藥物的特性。Yang等[8]研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌中Twist表達(dá)率約為74%，在FIGO分期Ⅲ級(jí)腫瘤患者的陽性率明顯高于Ⅰ、Ⅱ級(jí)患者，同時(shí)發(fā)現(xiàn)腫瘤浸潤(rùn)于深肌層的患者陽性率要高于浸潤(rùn)于淺肌層的患者，提示Twist的異常表達(dá)可能與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展具有相關(guān)性。陳芳等[9]指出，在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的Twist陽性表達(dá)率約為55.2%，而在正常子宮內(nèi)膜陽性表達(dá)率約4.3%，Twist表達(dá)率與腫瘤的FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肌層浸潤(rùn)程度具有相關(guān)性，與本研究中Twist在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與患者病理分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性的結(jié)果相一致。

3.3 Cyclin E和Twist與子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)性

Cyclin E和Twist在子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達(dá)率均明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織。本研究顯示，Cyclin E和Twist在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.239，P=0.027)。腫瘤是細(xì)胞周期相關(guān)性疾病，Cyclin E作為細(xì)胞周期素，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的調(diào)控作用[10]，其過度表達(dá)可以使細(xì)胞周期縮短，細(xì)胞增殖加速。Twist可以增強(qiáng)腫瘤侵蝕性和細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移能力，Cyclin E表達(dá)增加，協(xié)同Twist表達(dá)增強(qiáng)，使得腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)無限增殖的傾向[11]，提示Cyclin E與Twist的高表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起到協(xié)同作用。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)Cyclin E和Twist的高表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、分化的過程有著密切關(guān)系，這對(duì)子宮內(nèi)膜癌的生物學(xué)行為評(píng)價(jià)、選擇指導(dǎo)具體治療方案以及對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲機(jī)制的研究都具有重要意義。

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doi:10.3969/j.issn.1674-2257.2016.06.021

A Study on the Expression and Significance of Cyclin E and Twist in Endometrial Adenocarcinoma

WuHaiyan1,WangXiaoyan1,DengXiaoyang1,ZengJun2△.

1.TheFirstAffilatedHospitalofChengduMedicalCollege,Chengdu610500,China; 2.ChengduMedicalCollege,Chengdu610500,China

Objective To detect the expressions of Cyclin E and Twist in endometrial carcinoma and investigate the relationship between Cyclin E and Twist in the development of endometrial carcinoma. Methods The expressions of Cyclin E and Twist in endometrial carcinoma were detected by the immunohistochemical method, and the percentage of positive cells and the intensity of staining were scored by the semi-quantitative method. Results The positive expression rate of Cyclin E in endometrial carcinoma (71.25%) was significantly higher than that in normal endometrium (6.00%) (P<0.001), and the positive expression rate of Twist in endometrial carcinoma (77.50%) was significantly higher than that in normal endometrium (10.00%) (P<0.001). The expressions of Cyclin E and Twist were positively correlated in endometrial carcinoma (P<0.05). Conclusion The expressions of Cyclin E and Twist are very high in endometrial carcinoma, and there is a certain correlation between the expressions of Cyclin E and Twist in the occurrence and development of endometrial cancer.

Endometrial adenocarcinoma; Cyclin E; Twist

10.3969/j.issn.1674-2257.2016.06.020

R737.33

A

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20161027.1702.044.html

△通信作者：曾俊，E-mail：12671823@qq.com