王娟萍，孟帆，姚敬明，吳忻，劉文俊，李紅麗，樊振華，米瑞娟

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山西太原030032）

種豬場豬瘟凈化試驗(yàn)

王娟萍，孟帆，姚敬明，吳忻，劉文俊，李紅麗，樊振華，米瑞娟

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山西太原030032）

豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種以高熱、出血為主要特征的烈性、高度接觸性傳染病，當(dāng)前豬瘟的發(fā)生表現(xiàn)為種豬的繁殖障礙、持續(xù)感染。要從源頭上控制規(guī)?；i場的豬瘟疫情，則必須對種豬群進(jìn)行凈化。采用強(qiáng)化免疫、抗體檢測、病原檢測、淘汰帶毒病豬，結(jié)合生物安全等管理措施，2014年在某種豬場分2次進(jìn)行了凈化試驗(yàn)。通過對230頭母豬、46頭公豬、619頭后備母豬實(shí)施免疫檢測凈化，共淘汰母豬35頭、公豬6頭、后備母豬365頭，使試驗(yàn)豬群第4次和第5次抗體檢測合格率達(dá)到100%。

種豬場；豬瘟凈化；淘汰凈化

豬瘟（Classical Swine Fever，CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種以高熱、出血為主要特征的烈性、高度接觸性傳染病。我國是豬瘟流行較嚴(yán)重的國家，每年因豬瘟死亡的豬約占病死豬的39.65%，經(jīng)濟(jì)損失達(dá)100億元左右[1]。丘惠深[2]利用豬瘟熒光抗體染色技術(shù)檢測我國13個?。ㄊ校?9個大、中型豬場的種豬扁桃體，結(jié)果表明，所有被檢豬場都存在種豬豬瘟帶毒，全國種豬豬瘟抗原陽性率平均為11.12%，最高的可達(dá)30.7%，最低為4.4%。同一豬場中各類豬群均可遭受豬瘟病毒的感染，采用全場撲滅的辦法顯然是不符合我國國情，難以做到[3]。由于豬瘟免疫抗體水平低下，導(dǎo)致種豬場豬瘟持續(xù)感染，妊娠母豬長期帶毒，表現(xiàn)為流產(chǎn)、早產(chǎn)或生產(chǎn)仔豬帶毒；帶毒公豬可以通過精液傳播，因此，要從源頭上控制規(guī)?；i場的豬瘟疫情，則必須對種豬群進(jìn)行凈化[4]。2012年國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）（國辦發(fā)〔2012〕31號）中，把豬瘟列為優(yōu)先防治的國內(nèi)動物疫?。?6種）之一。文件要求到2015年部分區(qū)域達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)，原種豬場達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。到2020年進(jìn)一步擴(kuò)大凈化區(qū)域，全國所有種豬場達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。

在豬瘟凈化中，使用的檢測方法主要有病毒分離技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、RT-PCR/FQ-PCR分子診斷技術(shù)和抗原ELISA檢測法等。最常用的是免疫熒光技術(shù)，具有操作簡單、試劑價(jià)格低、快速靈敏等特點(diǎn)。但由于該法需活體采集豬的扁桃體，對豬的應(yīng)激很大，很多養(yǎng)殖場對此有較大的抗拒心理，一般不肯采用。張健騑等[5]在近年來的實(shí)踐中摸索出以檢測抗體為主、配合檢測抗原的豬瘟凈化技術(shù)。

山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所豬病課題組通過整合豬瘟凈化技術(shù)的相關(guān)報(bào)道，采用豬瘟兔化高效細(xì)胞疫苗與豬用轉(zhuǎn)移因子強(qiáng)化免疫[6-7]、抗體檢測、病原檢測、淘汰帶毒病豬，結(jié)合生物安全等管理措施，在某豬場進(jìn)行了豬瘟凈化試驗(yàn)，以期為今后種豬場豬瘟凈化提供技術(shù)支持。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

高效豬瘟活疫苗（細(xì)胞源），普萊柯生物工程股份有限公司生產(chǎn)；豬用轉(zhuǎn)移因子免疫增強(qiáng)劑，大連三儀動物藥品有限公司生產(chǎn)；豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒，法國Biochek公司生產(chǎn)，北京天之泰生物科技有限公司提供。病原檢測試劑盒，北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司生產(chǎn)；消毒藥，北京瑞先農(nóng)科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)豬群

在山西省某種豬場選擇生產(chǎn)母豬230頭、公豬46頭、后備母豬619頭。

1.3 豬場飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)豬場存欄母豬600頭，每批選留后備母豬200頭，每年選留2～3批，選留標(biāo)準(zhǔn)為第3胎產(chǎn)仔10頭以上，沒有遺傳缺陷的，本品種特征明顯，所產(chǎn)仔豬母豬比例在50%以上。第1次在斷奶后選留，保持存欄公豬50頭，并對外提供精液；每周有24頭母豬配種，24頭母豬上產(chǎn)床，24頭母豬下產(chǎn)床，每月出欄肥豬800～900頭。后備母豬在7～8個月、體質(zhì)量100～110 kg時(shí)進(jìn)行配種。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 試驗(yàn)分組2014年3—8月和7—12月進(jìn)行了2次凈化試驗(yàn)。分別選擇了5批經(jīng)產(chǎn)母豬（選擇第2，第3胎經(jīng)產(chǎn)母豬），每批母豬約24頭左右；分別選擇了5批選留的后備母豬，每批后備母豬約100頭左右。

1.4.2 強(qiáng)化免疫對生產(chǎn)母豬在斷奶后、配種前用豬用轉(zhuǎn)移因子直接稀釋高效豬瘟活疫苗（細(xì)胞源），每頭豬注射2 mL，進(jìn)行跟胎免疫。對準(zhǔn)備選留的后備母豬，用高效豬瘟活疫苗（細(xì)胞源）100頭份＋75 mL配套稀釋液＋25 mL豬用轉(zhuǎn)移因子，20日齡時(shí)進(jìn)行第1次免疫，30日齡時(shí)進(jìn)行第2次免疫，每頭豬肌肉注射1.1 mL。用高效豬瘟活疫苗（細(xì)胞源）100頭份＋60 mL配套稀釋液＋40 mL豬用轉(zhuǎn)移因子，60日齡時(shí)進(jìn)行第3次免疫，每頭豬肌肉注射1.2 mL。對公豬每季度第1個月第1周用豬用轉(zhuǎn)移因子直接稀釋高效豬瘟活疫苗（細(xì)胞源），每頭豬注射2 mL。

1.4.3 抗體檢測對試驗(yàn)經(jīng)產(chǎn)母豬和公豬在斷奶后跟胎免疫前1～2 d、跟胎免疫后15，30，45 d左右，全部抽血進(jìn)行抗體檢測。對初選的后備母豬，在45，60，75，90，120，150，210日齡全部抽血進(jìn)行抗體檢測。

1.4.4 病原檢測對2次檢測豬瘟抗體陰性的經(jīng)產(chǎn)母豬、公豬以及豬場有發(fā)熱、食欲減低、繁殖障礙等臨床癥狀的病豬，用豬瘟病毒PCR檢測試劑盒進(jìn)行病原檢測。

1.4.5 淘汰凈化對后備母豬2次檢測抗體陰性和豬瘟病毒檢測陽性的進(jìn)行淘汰，圖1為部分檢測樣品豬瘟病毒擴(kuò)增結(jié)果。

1.4.6 生物安全措施試驗(yàn)豬場在隔離消毒等方面設(shè)施比較先進(jìn)，對工作人員等管理要求比較嚴(yán)格，生活區(qū)、養(yǎng)殖區(qū)、糞便處理區(qū)、尸體無害化處理等方面布局也比較合理。課題組主要提供優(yōu)質(zhì)的戊二醛和碘伏消毒藥，堅(jiān)持每7 d進(jìn)行一次全場大消毒。對疑似病豬，隔離到專用豬舍，由專人進(jìn)行飼養(yǎng)管理；對死豬進(jìn)行無害化處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 第1次凈化結(jié)果

表1 第1次豬瘟凈化試驗(yàn)公豬豬瘟抗體檢測結(jié)果

表2 第1次豬瘟凈化試驗(yàn)經(jīng)產(chǎn)母豬豬瘟抗體檢測結(jié)果

表3 第1次豬瘟凈化試驗(yàn)后備母豬豬瘟抗體檢測結(jié)果

從表1～3可以看出，第1次豬瘟凈化試驗(yàn)共檢測經(jīng)產(chǎn)母豬112頭，豬瘟抗體第2次至第4次檢測陰性的12頭，其他原因淘汰8頭；共檢測公豬46頭，豬瘟抗體第2次至第4次檢測陰性的2頭，其他原因淘汰1頭；選留后備母豬313頭，因豬瘟抗體不合格淘汰52頭，其他原因淘汰135頭，共淘汰187頭。

2.2 第2次凈化結(jié)果

從表4～6可以看出，第2次豬瘟凈化試驗(yàn)共檢測經(jīng)產(chǎn)母豬118頭，豬瘟抗體第2～4次檢測陰性的8頭，其他原因淘汰7頭；公豬在第1次檢測的基礎(chǔ)上，本次豬瘟抗體檢測均為陽性，因其他原因淘汰3頭；選留后備母豬306頭，因豬瘟抗體不合格淘汰51頭，其他原因淘汰127頭，共淘汰178頭。

表4 第2次豬瘟凈化試驗(yàn)公豬豬瘟抗體檢測結(jié)果

表5 第2次豬瘟凈化試驗(yàn)經(jīng)產(chǎn)母豬豬瘟抗體檢測結(jié)果

表6 第2次豬瘟凈化試驗(yàn)后備母豬豬瘟抗體檢測結(jié)果

2.3病原檢測分析

從表7可以看出，病原檢測豬瘟抗體為陰性的母豬和公豬共22頭，其中，陽性17頭，陽性率為77.27%，證明豬瘟抗體陰性豬可能與感染豬瘟病毒有關(guān)，對檢測的陽性豬全部淘汰；同時(shí)對試驗(yàn)階段豬場內(nèi)的81頭病死豬也進(jìn)行了豬瘟病原檢測，其中，陽性19份，陽性率為20.99%。

表7 豬瘟凈化試驗(yàn)PCR病原檢測結(jié)果

3 小結(jié)與討論

本研究對230頭母豬、46頭公豬、619頭后備母豬實(shí)施了免疫檢測凈化。共淘汰母豬35頭、公豬6頭、后備母豬365頭，使試驗(yàn)豬群第4，5次抗體檢測合格率達(dá)到100%，取得了一定的效果。但由于經(jīng)費(fèi)等原因沒有對全場母豬和后備母豬進(jìn)行免疫檢測淘汰凈化，也沒有連續(xù)跟蹤檢測下去，今后有條件時(shí)應(yīng)繼續(xù)開展這方面的研究，不斷解決凈化過程中存在的問題，完善凈化技術(shù)。

在凈化試驗(yàn)中，本研究參考吳文彩[4]研究的豬瘟抗體檢測方法，凡間接血凝抗體水平在1∶16以下（含1∶16）的種豬，均應(yīng)視為隱性感染。針對山西種豬場豬瘟免疫抗體低下等問題，應(yīng)用山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所豬病課題組研究的豬瘟兔化高效細(xì)胞疫苗與豬用轉(zhuǎn)移因子聯(lián)合免疫提高免疫抗體水平的技術(shù)[6]，對試驗(yàn)豬群實(shí)施強(qiáng)化免疫，在提高豬群豬瘟免疫抗體的基礎(chǔ)上，定期檢測豬瘟抗體，對抗體陰性的后備母豬全部淘汰、對抗體陰性的經(jīng)產(chǎn)母豬和公豬進(jìn)行豬瘟病原檢測，病原檢測陽性豬全部淘汰，并結(jié)合生物安全防控，開展豬瘟凈化。丘惠深[2]研究表明，每180 d凈化一次，一般凈化后90 d可見初效，180 d效果明顯；經(jīng)3～5次凈化后，豬瘟便可得到有效控制。本試驗(yàn)持續(xù)了270 d，也取得了一定效果，可供大家參考。

針對我國當(dāng)前豬瘟的流行現(xiàn)狀，實(shí)行豬瘟的凈化勢在必行。根據(jù)我國當(dāng)前的實(shí)際情況，既要做到豬瘟的控制與凈化，又要減少養(yǎng)豬企業(yè)、養(yǎng)豬戶的損失[7-8]。應(yīng)堅(jiān)持免疫、檢測、淘汰相結(jié)合的控制與凈化的綜合防制措施。豬瘟凈化是一個綜合性的系統(tǒng)工程，需要政府統(tǒng)籌規(guī)劃科學(xué)引導(dǎo)，通過示范帶動，達(dá)到區(qū)域凈化并逐步推廣。

［1］徐磊.豬瘟兔化弱毒細(xì)胞苗和脾淋苗細(xì)胞免疫效果的比較[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2009.

［2］丘惠深.凈化是有效控制我國豬瘟的重要手段[J].豬業(yè)科學(xué)，2010（3）：119.

［3］周緒斌，趙亞榮.規(guī)?；i場豬瘟的凈化與防制[J].養(yǎng)豬，2006（3）：212-215.

［4］吳文彩.規(guī)?；i場非典型豬瘟的控制與凈化[J].廣西畜牧獸醫(yī)，2010（4）：221-223.

［5］張健騑，楊傲冰.豬場內(nèi)部豬瘟凈化的實(shí)施方案[J].廣東飼料，2010，19（1）：46-48.

［6］孟帆，王娟萍.豬瘟兔化高效細(xì)胞疫苗與豬用轉(zhuǎn)移因子聯(lián)合免疫程序試驗(yàn)[J].養(yǎng)豬，2015（1）：102-104.

［7］孟帆，王娟萍.免疫增強(qiáng)劑對豬瘟疫苗細(xì)胞免疫的影響[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（7）：881-884.

［8］邱駿，姜杰.當(dāng)前我國豬瘟的流行現(xiàn)狀及控制與凈化措施[J].中國豬業(yè)，2007（12）：32-34.

The Purification Experiment on Classical Swine Fever in Some Pig Farms

WANGJuan-ping，MENGFan，YAOJing-ming，WUXin，LIUWen-jun，LI Hong-li，F(xiàn)ANZhen-hua，MI Rui-juan
（Institute ofAnimal Husbandryand Veterinary，Shanxi AcademyofAgricultural Sciences，Taiyuan 030032，China）

Classical swine fever caused by classical swine fever virus was a high fever,bleeding as the main feature of the potent, highlycontagious disease,and classical swine fever occurred currently for swine reproductive disorder and persistent infection.To control the swine flu fromthe source in the scale pig farms,the breeding herd must be purified.The purification experiment had been carried out twice by the immunization,antibody detection,pathogen detection,elimination with poison sick pigs,in combination with the biological safety management in a pig farm in 2014.The 230 sows,46 boars and 619 replacement gilts were implemented immune detection and purification,the result showed that a total of 35 sows,6 boars and 365 replacement gilts were eliminated,the qualified rate of antibody detection ofexperimental pigs fourth and fifth reached 100%,and achieved certain results.

pigfarms;purification ofclassical swine fever;purification and elimination

S858.28

A

1002-2481（2016）04-0524-04

10.3969/j.issn.1002-2481.2016.04.26

2015-11-23

山西省科技攻關(guān)項(xiàng)目（20120311022-4）；山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院重點(diǎn)項(xiàng)目（2013ZD10）

王娟萍（1958-），女，山西太原人，研究員，主要從事畜禽傳染病研究工作。孟帆為通信作者。