蔡潔新，楊立杰，趙振杰

（1.北京市房山區(qū)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京102400；2.北京市第一中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院泌尿外科，北京 100026）

原發(fā)性肝癌病人 AFP-L3、AFU、GP73及 TSGF等血清標(biāo)志物的水平分析及臨床意義

蔡潔新1，楊立杰2，趙振杰1

（1.北京市房山區(qū)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京102400；2.北京市第一中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院泌尿外科，北京 100026）

目的評(píng)價(jià)血清甲胎蛋白異質(zhì)體（AFP-L3）、α-L-巖藻糖苷酶（AFU）、高爾基體糖蛋白73（GP73）及腫瘤特異性生長因子（TSGF）四者聯(lián)合在原發(fā)性肝癌（PHC）診斷中的價(jià)值。方法選取2015年3月至2016年3月間我院收治的90例 PHC患者作為觀察組，并選擇同一時(shí)期收治的45例肝炎肝硬化患者作為疾病對(duì)照組，及45例健康志愿者作為健康對(duì)照組。采取微量離心法分離血清 AFP-L3，然后檢測其占總甲胎蛋白（AFP）的百分比，生化定量法測三組血清AFU、TSGF水平，以及酶聯(lián)免疫法（ELISA）測三組血清 GP73水平。結(jié)果觀察組血清AFP-L3、AFU、GP73及 TSGF水平均明顯高于疾病對(duì)照組與健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組上述四種指標(biāo)單獨(dú)及聯(lián)合檢測的陽性率均顯著高于疾病對(duì)照組與健康對(duì)照組的檢測陽性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；同時(shí) AFP-L3、AFU、GP73及 TSGF檢測的靈敏度分別為58.9%、72.2%、74.4%、64.4%，特異性分別為90.0%、75.6%、76.7%、81.1%，準(zhǔn)確度分別為74.4%、73.9%、75.6%、72.8%，而四者聯(lián)合的靈敏度、特異性及準(zhǔn)確度分別為92.2%、96.7%、94.4%，聯(lián)合檢測明顯高于各指標(biāo)單獨(dú)檢測，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論血清AFP-L3、AFU、GP73及TSGF聯(lián)合檢測能夠顯著增強(qiáng)檢測的靈敏度及特異性，提高PHC的檢出率。

甲胎蛋白異質(zhì)體； α-L-巖藻糖苷酶； 高爾基體糖蛋白73； 腫瘤特異性生長因子； 原發(fā)性肝癌

原發(fā)性肝癌（PHC），簡稱為肝癌，是一種在世界范圍內(nèi)均極為常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，具有惡性程度高、侵襲力強(qiáng)、死亡率高及嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量等特點(diǎn)，其病死率位居全球惡性腫瘤死亡率排行榜第三，而在我國更是高居第二位，僅次于肺癌，且成逐年上升的趨勢［1-2］。在我國原發(fā)性肝癌患者中，約80%～90%為肝細(xì)胞癌（HCC），其次為膽管細(xì)胞癌和肝細(xì)胞膽管細(xì)胞混合癌。此外，在全球范圍內(nèi)約有一半以上的肝癌患者及每年死亡人數(shù)集中在我國［3］。PHC死亡率如此之高的原因在于其發(fā)病隱匿、早期癥狀不顯著，大多數(shù)患者確診時(shí)已屬中晚期，錯(cuò)失了最佳的治療期，因此及早發(fā)現(xiàn)并及時(shí)治療成為目前臨床關(guān)注的重點(diǎn)［4］。血清AFP作為目前臨床 PHC診斷的常用腫瘤標(biāo)志物之一，卻仍存在著較大程度的假陰性及假陽性情況，致使其檢測的靈敏度及特異性均不高，因此尋找一種新的高靈敏度及特異性的檢測指標(biāo)或聯(lián)合檢測手段成為目前研究的熱點(diǎn)。本研究通過檢測 PHC患者、良性肝病患者與健康志愿者血清 AFP-L3、AFU、GP73及 TSGF表達(dá)水平，探討其單獨(dú)及聯(lián)合檢測在 PHC診斷中的價(jià)值。

材料和方法

1 一般資料

入選2015年 3月至2016年3月間于我院收治的 PHC患者90例作為觀察組，經(jīng)臨床、病理學(xué)及實(shí)驗(yàn)室檢查確診，符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》［5］中的肝細(xì)胞肝癌（HCC）診斷標(biāo)準(zhǔn)，確診為HCC患者。觀察組男63例，女27例，年齡32～75歲，平均50.4± 4.1歲。入選同一時(shí)期的肝炎肝硬化患者45例作為疾病對(duì)照組，均符合《慢性乙型肝炎防治指南》［6］中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，確診為肝炎肝硬化患者。疾病對(duì)照組男29例，女16例，年齡 31～76歲，平均 49.7±4.4歲。另選同期于我院體檢合格的健康志愿者45例作為健康對(duì)照組，男30例，女15例，年齡30～74歲，平均49.1±4.0歲。所有入選的原發(fā)性肝癌及肝炎肝硬化患者均排除合并其他嚴(yán)重心肝腎疾病及其他惡性腫瘤者；且入選的健康志愿者均經(jīng)健康檢查，顯示其心肝腎等重要器官均正常，并排除各型肝炎病毒的感染。上述三組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），同時(shí)該研究在所有入選者知情且同意的前提下進(jìn)行。

2 方法

分別獲取觀察組、疾病對(duì)照組治療前，以及健康對(duì)照組的清晨空腹靜脈血，4℃下離心獲得其血清，-70℃凍存?zhèn)溆?。其中血?AFP-L3采取微量離心法進(jìn)行分離，試劑盒購自北京熱景生物技術(shù)公司，而血清樣本中的 AFP水平采取微粒子化學(xué)發(fā)光法（CMIA）進(jìn)行檢測，相應(yīng)試劑盒購自美國雅培公司，AFP-L3及 AFP水平均通過化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上進(jìn)行測定；血清 AFU及 TSGF水平均采取生化定量法進(jìn)行檢測，試劑盒分別購自福建藍(lán)波生物技術(shù)公司及上海生物制品研究所；而血清 GP73水平采取酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測，試劑盒購自北京熱景生物技術(shù)公司。上述實(shí)驗(yàn)操作均由專人嚴(yán)格按照試劑及儀器相關(guān)說明書進(jìn)行。并以AFP-L3＞10%，AFU＞35U／L，GP73＞150μg／L，TSGF＞60U／mL［7］為陽性計(jì)算其陽性率。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

1 三組血清AFP-L3、AFU、GP73及TSGF水平

觀察組血清AFP-L3、AFU、GP73及 TSGF均高于疾病對(duì)照組與健康對(duì)照組，同時(shí)疾病對(duì)照組上述各指標(biāo)水平高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 三組血清AFP-L3%、AFU、GP73及TSGF水平比較（±s）

表1 三組血清AFP-L3%、AFU、GP73及TSGF水平比較（±s）

注：與疾病對(duì)照組相比，*P＜0.05；與健康對(duì)照組相比，＃P＜0.05

組別 例數(shù) AFP-L3（%） AFU（U／L） GP73（μg／L） TSGF（U／mL）觀察組 90 16.83±4.72*＃ 69.34±12.55*＃ 215.47±53.06*＃ 75.32±15.11*＃.25疾病對(duì)照組 45 7.05±2.31＃ 41.27±9.63＃ 128.30±39.57＃ 52.64±11.90＃健康對(duì)照組 45 3.76±1.23 25.06±8.41 64.51±21.13 37.53±8

2 三組血清標(biāo)志物檢測的陽性率比較

觀察組血清 AFP-L3、AFU、GP73及 TSGF檢測的陽性率均明顯高于兩對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 三組血清AFP-L3、AFU、GP73及TSGF檢測的陽性率比較［n（%）］

3 血清標(biāo)志物單獨(dú)及聯(lián)合檢測在PHC診斷中的價(jià)值比較

血清標(biāo)志物 AFP-L3、AFU、GP73及 TSGF四者聯(lián)合檢測的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度均顯著高于各標(biāo)志物單獨(dú)檢測時(shí)的靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。其中本研究通過并聯(lián)實(shí)驗(yàn)提高檢測的靈敏度，通過串聯(lián)實(shí)驗(yàn)提高檢測的特異性。

表3 血清各標(biāo)志物單獨(dú)及聯(lián)合檢測的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度比較（%）

討 論

PHC在中國屬于一種臨床極為常見的惡性腫瘤，因患者早期癥狀隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已屬晚期，導(dǎo)致治療效果不佳，死亡率高；此外，該病的侵襲力強(qiáng)、惡性程度高，其發(fā)病率在我國也居高不下。因此，及早對(duì) PHC患者進(jìn)行確診，并及時(shí)對(duì)其進(jìn)行治療是臨床關(guān)注的熱點(diǎn)。目前，臨床主要通過檢測患者的血清腫瘤標(biāo)志物水平的變化情況，并輔以超聲、核磁共振、以及組織活檢來對(duì) PHC患者進(jìn)行確診［8］。臨床較為常用的血 清腫瘤標(biāo)志物主 要有CEA、CA125、AFP、AFP-L3、AFU、GP73、TSGF等等，此外單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測因存在假陰性與假陽性的問題而導(dǎo)致其靈敏度及特異性不高，容易導(dǎo)致誤診情況的發(fā)生，臨床上常采用多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測的方式來提高 PHC的檢出率［9-10］。

AFP是一種由肝臟細(xì)胞及卵黃囊細(xì)胞合成分泌的糖原蛋白，主要合成于胚胎時(shí)期，在其他時(shí)期不合成或微量合成，而在機(jī)體肝臟受損時(shí)其合成分泌大量增加，其是目前臨床上 PHC診斷的最常用腫瘤標(biāo)志物之一，然而其檢測的靈敏度偏低，僅為40%～65%，仍存在著 30%左右的假陰性問題［11］。而 AFP根據(jù)其與小扁豆凝集素結(jié)合程度的不同可分成AFP-L1、AFP-L2及AFP-L3三種壓型，其中AFP-L3為肝癌細(xì)胞所特有，并隨癌癥惡化程度的加重其所占比例也相應(yīng)增加，因此也常被用來作為 PHC檢驗(yàn)的指標(biāo)之一［12］。AFU是一種存在于哺乳動(dòng)物中的溶酶體水解酶，主要參與分解含巖藻糖基的蛋白、糖脂等多種生物活性大分子，其在 PHC患者血清中的水平明顯升高，雖然出現(xiàn)此現(xiàn)象的機(jī)理尚未明確，但絕大多數(shù)的研究結(jié)果基本一致，也常被臨床用來作為PHC的診斷指標(biāo)［13］。GP73是一種高爾基體跨膜蛋白，正常情況下在肝細(xì)胞中不表達(dá)或少量表達(dá)，而在疾病狀態(tài)下會(huì)大量表達(dá)并分泌至細(xì)胞表面及細(xì)胞內(nèi)，導(dǎo)致 PHC患者血清 GP73水平異常升高［14］。而TSGF作為由惡性腫瘤形成及增殖時(shí)產(chǎn)生并釋放入血的多肽類物質(zhì)，是一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，在惡性腫瘤的早期診斷中具有重要意義［15］。因此，本研究通過檢測 PHC患者、良性肝病患者與健康志愿者血清AFP-L3、AFU、GP73及TSGF水平，來評(píng)價(jià)其單獨(dú)及聯(lián)合檢測在 PHC診斷中的價(jià)值。

研究結(jié)果顯示，觀察組血清AFP-L3、AFU、GP73及TSGF均高于疾病對(duì)照組與健康對(duì)照組，同時(shí)疾病對(duì)照組上述各指標(biāo)水平高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組血清 AFP-L3、AFU、GP73及 TSGF檢測的陽性率明顯高于兩組對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。研究結(jié)果與徐瀚峰等［16］的研究結(jié)果相類似，均顯示隨著PHC的發(fā)生與發(fā)展，患者血清AFP-L3、AFU、GP73及TSGF水平也會(huì)相應(yīng)的升高。此外，PHC的診斷結(jié)果顯示，血清AFP-L3、AFU、GP73及 TSGF檢測的靈敏度分別為58.9%、72.2%、74.4%、64.4%，特異性分別為90.0%、75.6%、76.7%、81.1%，準(zhǔn)確度分別為74.4%、73.9%、75.6%、72.8%，而四者聯(lián)合檢測的靈敏度、特異性及準(zhǔn)確度分別為 92.2%、96.7%、94.4%，聯(lián)合檢測明顯高于各指標(biāo)單獨(dú)檢測，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果表明，AFP-L3、AFU、GP73及 TSGF聯(lián)合檢測可以顯著提高PHC診斷的靈敏度、特異性與準(zhǔn)確性，具有更好的診斷價(jià)值。

綜上所述，血清AFP-L3、AFU、GP73及TSGF單獨(dú)檢測在 PHC的診斷中具有一定的價(jià)值，但也存在著誤診及漏診的情況，而四者聯(lián)合檢測大幅提高了檢測的靈敏度、特異性及準(zhǔn)確度，增加 PHC的檢測率，其臨床上應(yīng)用價(jià)值更高。

［1］俞錫燦，陳美蕓.AFP，AFP-L3和GP73聯(lián)合檢測對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，23（6）：1489-1490.

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（潘子昂編輯）

Analysis and Clinical Significance of Serum Markers of TSGF，AFU，GP73 and AFP-L3 in Patients with Primary Liver Cancer

CAI Jie-xin1，YANG Li-jie2，ZHAO Zhen-jie1
（1.Clinical Laboratory，the First Hospital of Beijing Fangshan，Beijing 102400，China；（2.Urinary Surgery，the First Hospitals of Traditional Chinese and Western Medicine，Beijing 100026，China）

ObjectiveTo evaluate the diagnosis value of combined four markers of alpha fetal protein heterogeneity（AFP anti-L3），alpha L fucosidase（AFU）and Golgi protein 73（GP73）and tumor specific growth factor（TSGF）in primary hepatocellular carcinoma（PHC）.MethodsWe selected 90 PHC patients in our hospital as the observation group，45 cases of hepatitis cirrhosis as the control group，and 45 healthy volunteers as normal control group.We isolated AFP-L3，measured the percentage of AFP-L3／total alpha fetal protein（AFP）.The serum levels of AFU，TSGF and GP73 were determined by biochemical and enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.ResultsThe serum levels of AFP-L3，AFU，GP73 and TSGF in the observation group were significantly higher than those in the control group and healthy control group（P＜0.05）.The positive rates of the four indexes in the observation group were significantly higher than those of the control group and the healthy control group（P＜0.05）.At the same time，the sensitivity of AFP-L3，AFU，GP73 and TSGF were 58.9%，72.2%，74.4%and 64.4%.The specificity was 90%，75.6%，76.7%and 81.1%.The accuracy was 74.4%，73.9%，75.6%and 72.8%.However，the sensitivity，specificity and accuracy of the combined detection were 92.2%，96.7%and 94.4%.The combined detection was significantly higher than that of each index（P＜0.05）.ConclusionThe combined detection of serum AFP-L3，AFU，GP73 and TSGF can significantly enhance the detection sensitivity and specificity，and improvethe detection rate of PHC.

Alpha-fetoprotein allopla； α-L fucosidase； Golgi protein 73； Tumor specific growth factor； Primary hepatocellular carcinoma

10.11748／bjmy.issn.1006-1703.2016.12.014

2016-07-20；

2016-08-24