邵江煒

（上海市復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院北院急重癥醫(yī)學(xué)科，上海 201906）

ICU重癥IgA腎病患者IL-4、C1GALT1及COSMC表達(dá)對(duì)疾病預(yù)后的調(diào)控作用分析

邵江煒

（上海市復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院北院急重癥醫(yī)學(xué)科，上海 201906）

目的探討在重癥 IgA腎病患者中 IL-4、C1GALT1及 COSMC的 mRNA表達(dá)及潛在預(yù)后因素對(duì)疾病及其預(yù)后的調(diào)控作用。方法選取本院ICU的重癥確診IgA患者61名，同時(shí)選取年齡性別可比的體檢健康者65名作為對(duì)照，并使用熒光定量PCR測(cè)定外周血的單核細(xì)胞IL-4、C1GALT1以及COSMC的mRNA表達(dá)，同時(shí)問(wèn)卷收集可能影響預(yù)后的相關(guān)因素，IgA患者隨訪5年，以隨訪結(jié)束時(shí)出現(xiàn)終末期腎病為預(yù)后不佳進(jìn)行研究分析。對(duì)相關(guān)因素對(duì)本病預(yù)后的調(diào)控作用進(jìn)行分析討論。患者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。統(tǒng)計(jì)分析采用卡方檢驗(yàn)以及 t檢驗(yàn)對(duì)一般資料及兩組基因表達(dá)進(jìn)行比較，使用多因素 Logistics回歸模型進(jìn)行預(yù)后因素討論，使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果IgA患者組IL-4 mRNA的表達(dá)水平為3.67±0.34，顯著高于對(duì)照組的1.62±0.16；IgA組的C1GALT1 mRNA以及COSMC mRNA表達(dá)水平分別為1.42±0.22和1.34±0.13，出現(xiàn)相應(yīng)的表達(dá)降低；對(duì)照組分別為1.61±0.22和1.63±0.18。對(duì)ICU重癥IgA腎病患者進(jìn)行預(yù)后分析，單因素分析結(jié)果提示 IL-4表達(dá)增加在預(yù)后不良者中的構(gòu)成顯著高于預(yù)后良好者，P＜0.05，腎病家族史構(gòu)成比例在預(yù)后不良者中也明顯較高。多因素Logistic回歸結(jié)果提示年齡大于60歲、肌酐超標(biāo)、高血壓、腎病家族史以及 IL-4 mRNA表達(dá)增加和C1GALT1 mRNA表達(dá)減低均為IgA腎病不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素。結(jié)論ICU重癥 IgA腎病患者IL-4 mRNA表達(dá)增加，同時(shí)可見(jiàn)相應(yīng)的C1GALT1 mRNA以及 COSMC mRNA表達(dá)減低，且這三個(gè)因素與高齡、肌酐異常、高血壓等因素同為重癥 IgA的預(yù)后不良因素。

IgA腎??； IL-4； C1GALT1； COSMC； 預(yù)后因素

IgA腎病是臨床上非常常見(jiàn)的原發(fā)性腎小球疾病中的一種，會(huì)出現(xiàn)腎小球系膜區(qū)IgA沉積，或可見(jiàn)以 IgA沉積為主同時(shí)可伴有其他免疫球蛋白的沉積出現(xiàn)，臨床表現(xiàn)不一［1-2］。目前國(guó)內(nèi)外研究關(guān)于 IgA腎病的病因仍不十分明確，除了原發(fā)性病變相關(guān)機(jī)理，繼發(fā)性 IgA腎病可因腎臟以外的疾病如紫癜性腎炎、HIV感染、腫瘤等引發(fā)［3-4］。既往相關(guān)研究結(jié)果顯示IL-4可以通過(guò)刺激 B細(xì)胞，參與腎損傷以及腎的纖維化，相關(guān)因子的過(guò)表達(dá)同腎小球腎炎、糖尿病腎病以及 IgA腎病的發(fā)生也均存在關(guān)聯(lián)，目前比較公認(rèn)的說(shuō)法是IL-4參與下調(diào)C1GALT1及 COSMC的表達(dá)，同時(shí)對(duì)IgAl鉸鏈區(qū)糖基化狀態(tài)發(fā)生影響，因此其間會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的C1GALT1以及 COSMC表達(dá)降低，并見(jiàn)低糖基化 IgA1的分泌增加，成為 IL-4參與IgA腎病發(fā)生機(jī)理的比較合理的解釋?zhuān)巳貉芯可胁欢啵?-6］。本文就 ICU重癥IgA腎病患者的 IL-4、C1GALT1及COSMC表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定和分析，并就其對(duì)本病預(yù)后的調(diào)控作用進(jìn)行了討論。

材料和方法

1 資料

選取本院 2013年 2月至 2015年12月就診于ICU的重癥確診 IgA患者 61名，同時(shí)選取年齡性別可比的體檢健康者65名作為對(duì)照。

納入標(biāo)準(zhǔn)：就診于ICU的重癥確診IgA患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除過(guò)敏性紫癜、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及強(qiáng)直性脊柱炎患者及其他腎病患者。IgA診斷標(biāo)準(zhǔn)：患者均存在鏡下和（或）肉眼血尿及不同程度的蛋白尿，病理檢查腎組織以 IgA為主的免疫球蛋白沉積為特征。所有受試者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

2 方法

ELISA法測(cè)定血清 IL-4水平，并使用熒光標(biāo)記定量PCR測(cè)定外周血單核細(xì)胞 IL-4、C1GALT1以及COSMC的mRNA表達(dá)；RNA提取，用Nano Drop ND-1000紫外分光度計(jì)測(cè)定總 RNA濃度、純度；逆轉(zhuǎn)錄（cDNA第一鏈的合成），隨后進(jìn)行定量 PCR擴(kuò)增；COSMC、C1GALT1、IL-4引物序列借助Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)，由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成協(xié)助提供（C1GALT1：5′-3′正義鏈GGATACATGAGTGGA

GGAGCA，反義鏈 CAATGGAGGAACTGTGCGTA； COSMC：5′-3′正義鏈GTCCAGAGCGTAACCGAGTG，反義鏈TTCCAAGCATCACACCCTTC；IL-4：5′-3′正義鏈AGCACTGCCACAAGAACCT，反義鏈GCTAGTTG GTGGAAGAAGGTAC），PCR擴(kuò)增程序反應(yīng)程序使用兩步法。同時(shí)問(wèn)卷收集可能影響預(yù)后的相關(guān)因素。IgA患者隨訪5年，對(duì)相關(guān)因素對(duì)本病預(yù)后的調(diào)控作用進(jìn)行分析討論。預(yù)后評(píng)價(jià)系統(tǒng)采用多倫多預(yù)后評(píng)價(jià)系統(tǒng)，推算半定量估計(jì)進(jìn)展至終末期腎臟?。╡nd stage renal disease，ESRD）的時(shí)間，本研究以隨訪結(jié)束時(shí)出現(xiàn)ESRD為預(yù)后不佳進(jìn)行研究分析。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用卡方檢驗(yàn)以及 t檢驗(yàn)對(duì)一般資料和兩組基因表達(dá)，以及預(yù)后因素的單因素分析完成比較檢驗(yàn)，使用多因素 Logistics回歸模型進(jìn)行預(yù)后因素討論，所有統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。使用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

結(jié) 果

IgA患者組 IL-4mRNA的表達(dá)水平為3.67± 0.34，顯著高于對(duì)照組的 1.62±0.16，P＜0.01；此外，IgA組的C1GALT1mRNA以及COSMC mRNA表達(dá)水平分別為1.42±0.22和1.34±0.13，低于對(duì)照組，P＜0.01；如表1所示。

表1 ICU重癥 IgA患者 IL-4，C1GALT1以及COSMC mRNA表達(dá)水平（±s）

表1 ICU重癥 IgA患者 IL-4，C1GALT1以及COSMC mRNA表達(dá)水平（±s）

注：*P＜0.05，**P＜0.01

項(xiàng)目 IgA組（n＝61） 對(duì)照組（n＝65）1.62±0.16 C1GALT1 mRNA 1.42±0.22 1.61±0.22**COSMC mRNA 1.34±0.13 1.63±0.18 IL-4 mRNA 3.67±0.34****

對(duì) ICU重癥 IgA腎病患者進(jìn)行預(yù)后分析，采用多倫多預(yù)后評(píng)價(jià)系統(tǒng)半定量估計(jì)腎臟病患者進(jìn)展至終末期的時(shí)間，并以隨訪結(jié)束時(shí)出現(xiàn)ESRD為預(yù)后不佳進(jìn)行研究分析。單因素分析結(jié)果提示，IL-4表達(dá)增加在預(yù)后不良者中的構(gòu)成（100.00%）顯著高于預(yù)后良好者（67.31%，P＜0.05），腎病家族史構(gòu)成比例在預(yù)后不良者中也明顯高于預(yù)后良好者（預(yù)后不良88.89%；預(yù)后良好 46.15%），P＜0.05。詳見(jiàn)表2。

表2 ICU重癥IgA腎病患者IL-4，C1GALT1以及COSMC mRNA及潛在預(yù)后因素的單因素分析［n（%）］

在單因素分析以及單因素回歸分析的基礎(chǔ)上，對(duì) ICU重癥 IgA腎病患者 IL-4，C1GALT1以及COSMC mRNA及潛在預(yù)后因素的多因素 Logistic回歸分析，結(jié)果提示年齡大于 60歲、肌酐超標(biāo)、高血壓、腎病家族史以及IL-4 mRNA表達(dá)增加和C1GALT1 mRNA表達(dá)減低均為IgA腎病不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素，如表3所示。

表3 ICU重癥IgA腎病患者 IL-4，C1GALT1以及 COSMC mRNA及潛在預(yù)后因素的多因素回歸分析

討 論

IgA腎病是臨床上常見(jiàn)的一種腎小球疾病，探討其機(jī)理對(duì)于診斷治療意義重大［1-4］。IL-4可以作為激活 IL-4／STST6信號(hào)通路的因子之一，在活化過(guò)程中常常還伴有 C1GALT1以及COSMC的表達(dá)降低，此過(guò)程在腎病的發(fā)生激勵(lì)中也同樣存在，因此 Th2細(xì)胞因子 IL-4被認(rèn)為是 IgA腎病的可能致病因子中的一個(gè)，且與眾多疾病比如哮喘、腎病等疾病有關(guān)［5-9］。在腎臟病變中，IL-4主要是通過(guò)對(duì)近段腎小管上皮細(xì)胞上的相應(yīng)受體發(fā)生作用而造成細(xì)胞損傷，進(jìn)而導(dǎo)致腎臟病理性變化的出現(xiàn)的［5-6］。IgA腎病中是否也存在 IL-4，C1GALT1以及 COSMC的類(lèi)似情況既往研究尚不多，特別是在人群中的研究更少，本文即選取IgA典型的重癥病例，全部收拾對(duì)象來(lái)自 ICU重癥患者，進(jìn)行了相關(guān)研究，同時(shí)進(jìn)行了預(yù)后因素的討論，本研究提示 IgA患者組 IL-4mRNA的表達(dá)水平為3.67±0.34，顯著高于對(duì)照組的 1.62 ±0.16；此外，IgA組的C1GALT1mRNA以及COSMC mRNA表達(dá)水平分別低于對(duì)照組。原理應(yīng)該與 IL-4刺激B細(xì)胞，會(huì)出現(xiàn)C1GALT1以及COSMC表達(dá)的降低有關(guān)，印證了先前的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以及IL-4，C1GALT1以及COSMC mRNA表達(dá)在IgA腎病發(fā)生中 的 機(jī)理 設(shè) 想［11-12］。

IgA腎病臨床預(yù)后因素復(fù)雜多樣，目前已經(jīng)比較公認(rèn)的預(yù)后相關(guān)因子比如升高的肌酐、嚴(yán)重的蛋白尿、動(dòng)脈高血壓、異常紅細(xì)胞尿等等，都與本病的不良預(yù)后有關(guān)［10-12］。本研究中對(duì) ICU重癥 IgA腎病患者進(jìn)行預(yù)后分析，單因素分析結(jié)果提示IL-4表達(dá)增加在預(yù)后不良者中的構(gòu)成顯著高于預(yù)后良好者，此外腎病家族史構(gòu)成比例在預(yù)后不良者中也明顯高于預(yù)后良好者，提示這兩個(gè)因素可能與IgA腎病的不良預(yù)后存在關(guān)聯(lián)，繼續(xù)進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果提示年齡大于 60歲、肌酐超標(biāo)、高血壓、腎病家族史以及 IL-4 mRNA表達(dá)增加和 C1GALT1 mRNA表達(dá)減低均為 IgA腎病不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素；印證了前人關(guān)于年齡、相關(guān)血清因子以及既往史等因素對(duì)本病預(yù)后的影響，同時(shí)也再一次表明 IL-4，C1GALT1以及COSMC mRNA表達(dá)與僅同IgA腎病的發(fā)生機(jī)理密切關(guān)聯(lián)，而且同該病的不良預(yù)后也存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)，IL-4 mRNA表達(dá)的增加會(huì)增加不 良預(yù)后 的發(fā)生 風(fēng)險(xiǎn)，同 時(shí)C1GALT1以 及COSMC mRNA的減低也是不良預(yù)后發(fā)生的危險(xiǎn)因素 ［5-6，10-12］。

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（潘子昂編輯）

IL-4，C1GALT1 and COSMC Expression in Severe IgA Nephropathy and the Prognosis Analysis of the Disease

SHAO Jiang-wei
（Department of Emergency and Critical Care Medicine，Huashan Hospital Affiliated to Fudan University，Shanghai 201906，China）

ObjectiveTo study the expression of IL-4，C1GALT1 and COSMC mRNA in patients with severe IgA nephropathy（IgAN）and other potential prognostic factors of the disease.MethodsA total of 61 patients with severe IgAN and 65 controls with good match in age and gender were selected.Quantitative PCR assay was used to analyze mRNA expression of IL-4，C1GALT1 and COSMC.Questionnaires were sent out to collect potentially relevant prognostic factors.Patients were followed for 5 years，the poor prognosis was based on end-stage renal disease（ESRD）.Statistical analysis was performed by chi-square test and t-test.Gene expression was compared by multivariate regression model Logistics prognostic factors using SPSS17.0 statistical package.ResultsThe expression of IL-4 mRNA in the IgA patients was 3.67±0.34，significantly higher than the 1.62±0.16 for controls.C1GALT1 mRNA and COSMC mRNA were 1.42±0.22 and 1.34±0.13 in IgA pantients，controls were 1.61±0.22 and 1.63±0.18.The prognosis analysis showed that IL-4 expression was higher in poor prognosis in patients with severe IgA nephropathy than those who had good prognosis（P ＜0.05）.Family history of kidney disease had higher proportion of poor prognosis.Multivariate Logistic regression results suggested that older than 60 year-old，abnormal creatinine，high blood pressure，family history of kidney disease，as well as increased IL-4 mRNA expression and reduced C1GALT1 mRNA expression were poor prognostic risk factors IgA nephropathy.ConclusionPatients withsevere IgA nephropathy in ICU could have increased IL-4 mRNA expression，reduced C1GALT1 mRNA and COSMC mRNA expression.Poor prognostic factors include age，creatinine level，hypertension and others.

IgA nephropathy； IL-4； C1GALT1； COSMC； Prognostic factors

10.11748／bjmy.issn.1006-1703.2016.12.004

2016-09-09；

2016-09-30