■ 劉水平 肖海思 曾 禹 周慧娟 嚴(yán)思思 李曉文 文利新*

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410128；2.湖南畜禽安全生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南長(zhǎng)沙 410128）

動(dòng)物在自然條件下感染了某種不顯臨床癥狀的隱形傳染病或輕微傳染病后，免疫系統(tǒng)通常被激活，而短時(shí)間內(nèi)需接種多種疫苗則誘發(fā)復(fù)合免疫應(yīng)激，引起機(jī)體平衡的紊亂，從而直接或間接改變動(dòng)物機(jī)體免疫系統(tǒng)的狀態(tài)，可能降低雞群的生長(zhǎng)性能、飼料報(bào)酬率等，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致死亡[1-2]。

研究發(fā)現(xiàn)，由各種應(yīng)激因素導(dǎo)致的氧化損傷的主要原因分二類(lèi)：一是氧自由基的異常增加，超過(guò)機(jī)體自身抗氧化系統(tǒng)清除的能力，致使機(jī)體氧化與抗氧化體系不能維持平衡狀態(tài)，從而誘發(fā)細(xì)胞、組織氧化損傷；二是機(jī)體本身的抗氧化系統(tǒng)受到侵害，導(dǎo)致機(jī)體抗氧化能力出現(xiàn)障礙，甚至有時(shí)兩種情況同時(shí)發(fā)生。其中，氧自由基的毒性作用為脂質(zhì)過(guò)氧化、破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的主要破壞途徑。所以，機(jī)體維持正常的氧自由基濃度對(duì)于其抵抗外界病原威脅以及增強(qiáng)自身免疫都有著重要作用[3-4]。Zhang等的研究結(jié)果表明，一定劑量的LPS可以導(dǎo)致肉雞血清中GSH-Px、T-SOD活性降低，胸肌和腿肌的MDA含量增加[5-6]。

抗應(yīng)激劑是調(diào)節(jié)動(dòng)物的免疫應(yīng)答及增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的飼料添加劑。本研究使用的抗應(yīng)激劑由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)臨床獸醫(yī)系課題研究組提供，由多種維生素（VA、VC、VE）、蘇氨酸、多維、茶多酚、抗氧胺、蝦青素、低聚異麥芽糖等多種抗氧化功能性成分組成。茶多酚是從茶葉中提取的酚類(lèi)化合物總稱(chēng)，大量研究表明，茶多酚具有抗氧化和提高免疫力的功效，可有效清除氧自由基和脂類(lèi)自由基[7-9]。蝦青素是一種從蝦蟹外殼、牡蠣、鮭魚(yú)及藻類(lèi)真菌中發(fā)現(xiàn)的紅色類(lèi)胡蘿卜素，被譽(yù)為“超級(jí)抗氧化劑”，具有抗炎、抗癌、促進(jìn)生長(zhǎng)繁殖等功能[10]。VC是動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育中必不可少的營(yíng)養(yǎng)素，具有維持機(jī)體正常生理功能、造血功能及促進(jìn)體內(nèi)多種激素的合成作用，發(fā)揮了促生長(zhǎng)、提高免疫和抗應(yīng)激的生物學(xué)功能。VE作為一種天然的抗氧化劑，主要是通過(guò)抑制機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的一種必需的營(yíng)養(yǎng)因子[11-12]。為有效防控免疫應(yīng)激，本研究設(shè)計(jì)了復(fù)合抗應(yīng)激劑，開(kāi)展其對(duì)肉雞復(fù)合免疫應(yīng)激狀態(tài)下的免疫功能和抗氧化水平的效果評(píng)價(jià)，為生產(chǎn)中抗應(yīng)激劑的合理使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)日糧

試驗(yàn)日糧為基礎(chǔ)日糧，料型皆為粉料，原料組成及營(yíng)養(yǎng)水平含量見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平

在抗應(yīng)激劑組中的日糧分別添加1%抗應(yīng)激劑，由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)臨床獸醫(yī)系課題研究組提供，由多種維生素（VA、VC、VE）、蘇氨酸、多維、茶多酚、抗氧胺、蝦青素、低聚異麥芽糖等多種抗氧化功能性成分組成，產(chǎn)品委托湖南長(zhǎng)沙綠葉生物科技有限公司加工。

1.1.2 主要試劑與儀器（見(jiàn)表2、表3）

表2 試驗(yàn)材料及試劑

表3 試驗(yàn)儀器

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)動(dòng)物選用128只體重一致、健康狀況良好的1日齡AA肉仔雞（湖南省畜牧獸醫(yī)研究所）。試驗(yàn)開(kāi)始前，雞舍進(jìn)行徹底的清洗和消毒工作，待干燥后，用甲醛和高錳酸鉀熏蒸。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程人工控溫，自由采食、飲水。保持固定的飼喂時(shí)間，保證水源干凈、充足。時(shí)時(shí)觀察、記錄雞的采食和精神健康狀況。

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選取體重一致的1日齡健康A(chǔ)A肉仔雞128只，隨機(jī)分為A、B、C、D共四組，每組32只。A組為250 μg/kg.BW LPS+2羽份NDVⅣ系疫苗免疫組；B組為250 μg/kg.BW LPS+2羽份NDVⅣ系疫苗免疫+1%抗應(yīng)激劑組；C組為500 μg/kg.BW LPS+2羽份NDVⅣ系疫苗免疫組；D組為500 μg/kg.BW LPS+2羽份NDVⅣ系疫苗免疫+1%抗應(yīng)激劑組（見(jiàn)表4）。從肉雞12日齡起每3 d腹腔注射1次大腸桿菌脂多糖（LPS），連續(xù)4次（即12、15、18、21 d）。于15 d和28 d分別接種NDVⅣ系疫苗，各組分隔飼喂，試驗(yàn)周期42 d。每組于免疫前后稱(chēng)取體重、采食量，計(jì)算料重比。分別于22、29、36、42 d殺雞采樣，檢測(cè)血清中的生化指標(biāo)。

表4 試驗(yàn)動(dòng)物分組

1.2.3 生長(zhǎng)性能檢測(cè)

分別于22、29、36、42 d稱(chēng)重，記錄其體重、采食量，計(jì)算料重比。

1.2.4 抗氧化功能指標(biāo)檢測(cè)

取每組肉雞血清，用南京建成試劑盒檢測(cè)活性丙二醛（MDA）含量、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性，測(cè)定方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS17.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行ANOVA單因素方差分析，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，結(jié)合分析結(jié)果運(yùn)用GraphPad Prism 5軟件進(jìn)行作圖。P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗應(yīng)激劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

圖1 抗應(yīng)激劑對(duì)AA肉雞體重影響

圖2 抗應(yīng)激劑對(duì)AA肉雞料重比（F/G）的影響

由圖1可知，在22、42 d時(shí)，與A組相比，B組體重極顯著升高（P＜0.01），體重分別提高了34.20%、10.49%。42 d時(shí)，D組體重與C組相比顯著升高（P＜0.05），提高了5.80%。D組與B組相比體重顯著降低（P＜0.05）。由圖2可知，與復(fù)合免疫應(yīng)激組相比，添加1%抗應(yīng)激劑組料重比均降低，但無(wú)差異顯著性（P＞0.05）。

上述結(jié)果表明：在日糧中添加抗應(yīng)激劑對(duì)肉雞42 d體重均有顯著升高影響（P＜0.01），且注射250 μg/kg.BW LPS的情況下添加1%的抗應(yīng)激劑比注射500 μg/kg.BW LPS的情況下添加1%的抗應(yīng)激劑效果更好，同時(shí)，添加抗應(yīng)激劑降低肉雞的料重比，有提高飼料轉(zhuǎn)化率的趨勢(shì)，但無(wú)差異顯著性(P＞0.05)。

2.2 抗應(yīng)激劑對(duì)肉雞抗氧化能力的影響

圖3 抗應(yīng)激劑對(duì)AA肉雞MDA含量的影響

由圖3可知，在22、29、36 d 時(shí)，D組血清中MDA含量與 B組相比差異顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01），分別降低了21.33%、24.93%、24.18%。由圖4可知，22 d時(shí)，B組血清中T-SOD活性與A組相比差異極顯著（P＜0.01），提高了95.45%；42 d時(shí)，D組血清中T-SOD活性與C組、B組相比均差異極顯著（P＜0.01），分別降低了39.89%、41.18%。

由圖5可知，在22、36 d時(shí)，與A組相比，B組血清中GSH-Px活性差異極顯著（P＜0.01），分別提高了60.21%、24.19%，42 d GSH-Px活性降低了19.31%；在29、36 d時(shí)，D組血清中GSH-Px活性與B組相比差異極顯著（P＜0.01），分別降低了30.75%、23.60%。

上述結(jié)果表明：日糧中添加抗應(yīng)激劑能有效改善機(jī)體抗氧化功能，降低了MDA含量（P＜0.05），對(duì)T-SOD活性的影響呈先提高后降低的趨勢(shì)（P＜0.05），提高了GSH-Px活性（P＜0.01）。此外，抗應(yīng)激劑的效果在注射250 μg/kg.BW LPS的情況下更顯著。

3 討論

3.1 抗應(yīng)激劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

圖4 抗應(yīng)激劑對(duì)AA肉雞T-SOD活性的影響

圖5 抗應(yīng)激劑對(duì)AA肉雞GSH-Px活性的影響

抗應(yīng)激劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響是通過(guò)多種物質(zhì)的生物活性疊加而實(shí)現(xiàn)的，其疊加所產(chǎn)生的促生長(zhǎng)效果比單一成分的促生長(zhǎng)效果有不同程度的改善。本試驗(yàn)中，第22、42 d低劑量LPS+NDVⅣ系疫苗+1%抗應(yīng)激劑組的肉雞體重相對(duì)低劑量LPS+NDVⅣ系疫苗而言顯著提高（P＜0.01），隨著日齡增加，對(duì)體重的影響作用從試驗(yàn)22 d持續(xù)到第36 d。第42 d時(shí)，高劑量LPS+NDVⅣ系疫苗+1%抗應(yīng)激劑組的肉雞體重低于低劑量LPS+NDVⅣ系疫苗+1%抗應(yīng)激劑組（P＜0.05）。日糧中添加抗應(yīng)激劑組的料重比低于其試驗(yàn)對(duì)照組，但差異不顯著（P＞0.05）。這表明，肉雞日糧中添加抗應(yīng)激劑提高了動(dòng)物的生產(chǎn)性能，緩解了復(fù)合免疫應(yīng)激對(duì)肉雞生長(zhǎng)發(fā)育的影響。采食量、消化能力、飼料養(yǎng)分是影響動(dòng)物生產(chǎn)性能的物質(zhì)基礎(chǔ)，結(jié)合之前的試驗(yàn)結(jié)果，復(fù)合免疫應(yīng)激能顯著降低肉雞生長(zhǎng)性能可能是應(yīng)激導(dǎo)致機(jī)體紊亂、采食量降低從而導(dǎo)致生長(zhǎng)性能降低，而抗應(yīng)激劑中的茶多酚、蝦青素、VC、VE等抗氧化劑恰恰緩解了應(yīng)激對(duì)機(jī)體的紊亂效應(yīng)，從而改善了肉雞的生產(chǎn)性能[11-13]。

3.2 抗應(yīng)激劑對(duì)肉雞抗氧化功能的影響

機(jī)體通過(guò)酶和非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，正常情況下，機(jī)體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生和清除是處于動(dòng)態(tài)平衡的[14]。免疫應(yīng)激可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生大量脂質(zhì)過(guò)氧化物，脂質(zhì)過(guò)氧化最常見(jiàn)的檢測(cè)指標(biāo)是丙二醛（MDA）的含量，血清中MDA含量的高低從一定程度上來(lái)說(shuō)可以反映機(jī)體氧化反應(yīng)的活躍程度，MDA含量的高低能反映脂質(zhì)過(guò)氧化強(qiáng)度和膜系統(tǒng)傷害程度。機(jī)體內(nèi)清除自由基的酶系統(tǒng)主要包括T-SOD、GSH-Px、CAT等，T-SOD和GSH-Px是機(jī)體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)中起主要作用的抗氧化物酶。本試驗(yàn)中，抗應(yīng)激劑在日糧中的添加，一定程度上能提高血清中GSH-Px和T-SOD活性，降低MDA的含量，這有可能是抗應(yīng)激劑中的茶多酚以及VC、VE的功效。大量研究表明，飼料中VE含量增高時(shí)，將導(dǎo)致血清中GSH-Px、T-SOD活性顯著升高，從而有效提高機(jī)體的抗氧化能力[15-18]。試驗(yàn)結(jié)果表明：日糧中添加抗應(yīng)激劑能有效改善機(jī)體抗氧化功能，降低了MDA含量（P＜0.05），對(duì)T-SOD活性的影響呈先提高后降低的趨勢(shì)（P＜0.05），提高了GSH-Px活性（P＜0.01）。而高劑量LPS+NDV+1%抗應(yīng)激劑組血清中T-SOD活性顯著降低，有可能是復(fù)合免疫應(yīng)激LPS濃度過(guò)大對(duì)機(jī)體刺激強(qiáng)度超過(guò)了機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的負(fù)荷，從而無(wú)法改善，若抗應(yīng)激劑添加濃度加大也有可能修復(fù)機(jī)體的氧化應(yīng)激的刺激強(qiáng)度，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本次研究結(jié)果中低劑量LPS+NDVⅣ系疫苗+1%抗應(yīng)激劑組對(duì)提高機(jī)體的抗氧化性能效果較好。

4 結(jié)論

抗應(yīng)激劑在日糧中的添加能夠提高肉雞生長(zhǎng)性能和抗氧化能力，有效緩解免疫應(yīng)激帶給機(jī)體的刺激。