曲曙光，孫國(guó)棟

(菏澤市立醫(yī)院分院，山東 菏澤 274031;菏澤市立醫(yī)院 山東 菏澤 274031)

HPLC法測(cè)定氯霉素-苯氧乙醇溶液的含量

曲曙光，孫國(guó)棟

(菏澤市立醫(yī)院分院，山東 菏澤 274031;菏澤市立醫(yī)院 山東 菏澤 274031)

目的探討氯霉素-苯氧乙醇溶液中氯霉素和苯氧乙醇含量。方法選用Agr1ent1100高效液相色譜儀；WP3-3000（Rs）型自動(dòng)進(jìn)樣器；流動(dòng)相甲醇-水75:75；雙波長(zhǎng)測(cè)定法：氯霉素檢測(cè)波長(zhǎng)278nm、苯氧乙醇檢測(cè)波長(zhǎng)265 nm；通過對(duì)照品求得回歸方程；外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果氯霉素和苯氧乙醇均在（0.025～0.5）mg/m l濃度范圍有良好線性關(guān)系（r=0.9999）。結(jié)論用HPLC法測(cè)定測(cè)定氯霉素-苯氧乙醇溶液中氯霉素和苯氧乙醇含量，方法簡(jiǎn)便、快捷、可靠。

氯霉素；苯氧乙醇；HPLC法

氯霉素-苯氧乙醇溶液稱氯苯溶液，主要外用清創(chuàng)消毒、清洗瘡口、燒燙傷外創(chuàng)面，療效確切，不良反應(yīng)少，本品最大特點(diǎn)是清創(chuàng)殺菌外用不給患者帶來(lái)疼痛感。報(bào)制劑批準(zhǔn)文號(hào)時(shí)該制劑氯毒素和苯氧乙醇含量測(cè)量采用紫外分光光度法測(cè)[1]，因受吸收波長(zhǎng)相互干擾，結(jié)果重現(xiàn)性和穩(wěn)定性不好，同時(shí)采取的方法比較繁瑣耗時(shí)長(zhǎng)，為了提高簡(jiǎn)便快捷重現(xiàn)性的含量測(cè)定方法，我們經(jīng)過試驗(yàn)采取高效液相色譜法對(duì)氯霉素-苯氧乙醇溶液進(jìn)行含量測(cè)定?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agr1ent1100高效液相色譜儀（配三元泵、二級(jí)管陳列檢測(cè)儀、在線脫氣機(jī)、色譜工作站），WP3-3000（Rs）型自動(dòng)進(jìn)樣器，BP211D分析天平。

1.2 試劑 氯霉素對(duì)照品（南京白敬辛制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)132104），苯氧乙醇對(duì)照品（瑞士Fluca公司，批號(hào)1431021），甲醇為色譜醇，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Acclccim120C18柱（4.6 mm×150mm，5μm），柱溫為室溫，檢測(cè)波長(zhǎng)為雙波長(zhǎng)，氯霉素278 nm，苯氧乙醇265mm，進(jìn)樣量為10 μl，流動(dòng)相為甲醇-水75:75[2]，流速為0.8m l/min。

2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取105℃干燥至恒重的氯霉素對(duì)照品50.00mg，100℃干燥至恒重的苯氧乙醇對(duì)照品50.00mg，共同置于100ml棕色容量瓶中，加純化水振搖溶解，再加至刻度度機(jī)械振動(dòng)15 min至溶解完全作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密量取10m l溶液至100m l棕色容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度搖勻作為對(duì)照品。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取供試品溶液10ml至50m l棕色容量瓶中，加純化水至刻度搖勻溶解至完全，再取5m l至25m l棕色容量瓶中加流動(dòng)相至刻度搖勻，作為供試品溶液。

2.4 方法專屬性 取氯霉素-苯氧乙醇對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，分別測(cè)定波長(zhǎng)278 nm和265 nm的吸收度，分離度為2.6良好，見下圖1和圖2。不加對(duì)照品氯霉素和苯氧乙醇按原有處方規(guī)定配制空白溶液，按測(cè)定上述對(duì)照品溶液的方法進(jìn)樣檢測(cè)，得到圖3空白溶液圖譜，在278 nm和265 nm處，無(wú)雜質(zhì)吸收峰出現(xiàn)，方法專屬性良好。

圖3 空白溶液色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 分別取上述配好的對(duì)照品貯備溶液1m l、2ml、4m l、5m l、6m l、8m l、10m l、15ml、20ml分別至于20 m l棕色容量瓶中，加流動(dòng)相甲醇-水（75：75）至刻度搖勻，分別按上述色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，分別記錄λmax=278 nm和λmax=265 nm，色譜圖以峰面積吸收度為縱坐標(biāo)（Y），以濃度為橫坐標(biāo)（X），經(jīng)過回歸方程計(jì)算λmax=278 nm的氯霉素A= 24.76X+0.4021，λmax=265 nm苯氧乙醇Y=18.21X-0.1905，r=0.9999（n-10），氯霉素和苯氧乙醇的濃度范圍為0.025mg/ml～0.5mg/ml。

2.6 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，按照上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，經(jīng)過計(jì)算結(jié)果氯霉素峰面積RSD為0.52%，苯乙醇峰面積RSD為0.75%，說(shuō)明精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取同一批號(hào)（20141212）氯苯溶液6份，按照供試品溶液配制方法分別進(jìn)行稀釋，按照上述相同色譜條件進(jìn)樣，按外標(biāo)法計(jì)算各自含量，結(jié)果該批氯苯溶液產(chǎn)品氯霉素平均含量為標(biāo)示量的99.65%，RSD為0.46%，苯氧乙醇平均含量為標(biāo)示量的100.3%，RSD為0.62%，說(shuō)明該測(cè)量方法重復(fù)性較好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別將同一批（20141212）氯苯溶液按上述方法制成的供試品溶液分別在室溫下放置0、1、3、5、7、9、15、24 h后取樣按上述相同的方法進(jìn)行測(cè)試，測(cè)得氯霉素峰面積RSD為0.78%，苯氧乙醇峰面積RSD為0.47%，結(jié)果說(shuō)明方法穩(wěn)定性較好。

2.9 供試品含量測(cè)定 取5批氯苯溶液（20141103，20150115，20150312，20150314，20150328）按照上述供試品溶液制備方法進(jìn)行稀釋，作為待測(cè)樣品。按照上述色譜條件和相同測(cè)試方法進(jìn)行進(jìn)樣檢測(cè)，按外標(biāo)法代入上述回歸方程計(jì)算5批樣品含量，結(jié)果見表1。

表1 氯苯溶液含量中氯霉素和苯氧乙醇標(biāo)量（%）

3 討論

氯霉素-苯氧乙醇溶液（簡(jiǎn)稱氯苯溶液）作為醫(yī)院制劑，未有國(guó)家統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，為了提高其檢測(cè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保制劑質(zhì)量穩(wěn)定有效，參考《中國(guó)藥典》2015年版及文獻(xiàn)方法[3-5]對(duì)氯霉素和苯氧乙醇采取HPLC法檢測(cè)，檢測(cè)方法線性關(guān)系、穩(wěn)定性、重復(fù)性和精密度均較好。據(jù)氯霉素和苯氧乙醇極性差別，參考氯霉素滴眼液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[6]和文獻(xiàn)方法[7-9]，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行優(yōu)選，確定適合的流動(dòng)相甲醇-水流動(dòng)相進(jìn)行分離，分離后的成分最大吸收波長(zhǎng)分別為278 nm和265 nm，經(jīng)過試驗(yàn)在任意單一波長(zhǎng)278 nm或265 nm測(cè)定其含量時(shí)受干擾較大，吸收度差別不大，對(duì)計(jì)算結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度不好，故采用雙波長(zhǎng)法，分別于各自最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)其吸收度，在278 nm和265 nm分別測(cè)定氯霉素和苯氧乙醇的吸收度較好，經(jīng)過回歸方程分別計(jì)算含量，結(jié)果穩(wěn)定，方法簡(jiǎn)便。

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HPLC Method for Determining the Content of Chloramphenicol - phenoxyethanol Solution

Qu Shuguang，Sun Guodong
(The Branch of Heze Municipal Hospital,Heze 274031,Shandong;Heze Municiapl Hospital,Heze 274031,Shandong)

ObjectiveTo investigate the chloramphenicol-phenoxyethanol chloramphenicol and phenoxyethanol content in the solution.MethodsChoose Agr1ent1100 highly effective liquid phase color spectrometer;(Rs)WP3-3000 type automatic sampler;Mobile phase of methanol-water;75-75 Double wavelength measurement:chloramphenicol detection wavelength of 278 nm,phenoxyethanol,detection wavelength of 265 nm;Through the reference substance obtained regression equation;External standard method.ResultsPhenoxyethanol and chloramphenicol in mg/ml concentration range(0.025～0.5)has a good linear relationship(r=0.9999).ConclusionUsing HPLC method determination of chloramphenicol in chloramphenicol-phenoxyethanol solution and phenoxyethanol content,the method is simple,fast and reliable.

Chloramphenicol;Phenoxyethanol;HPLC method

R978.13;R927.2

：A

：1008-4118（2016）02-0059-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2016.02.022

2016-04-19