安蕓，王臣臣，陸世海，劉象銀

(＊菏澤醫(yī)學?？茖W校,山東 菏澤 274000;山東丹紅制藥有限公司）

芪術鼻炎清顆粒含量測定

安蕓＊，王臣臣，陸世海，劉象銀

(＊菏澤醫(yī)學?？茖W校,山東 菏澤 274000;山東丹紅制藥有限公司）

目的探討芪術鼻炎清顆粒的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法測定厚樸酚與和厚樸酚含量，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器法測定黃芪甲苷含量。結果厚樸酚、和厚樸酚、黃芪甲苷的線性范圍分別為0.32～4.00μg（r=0.9997)、0.2～2.5μg（r=0.9998)、0.5024～7.452μg（r=1.0000）；平均加樣回收率分別為101.35%（RSD=1.54%）、97.76%（RSD=1.28%）、96.47%（RSD= 1.96%）。結論該測定方法準確可靠、重現(xiàn)性好，可作為芪術鼻炎清顆粒的控制方法。

芪術鼻炎清顆粒;含量測定

芪術鼻炎清顆粒由黃芪、厚樸、白術、陳皮、茯苓五味中藥組成，為臨床經(jīng)驗方經(jīng)優(yōu)選工藝制成的中成藥制劑，主要用于治療過敏性鼻炎引起的鼻塞、頭疼等癥；方中黃芪為君藥，厚樸為臣藥，因此在質量標準研究中，需對黃芪中的黃芪甲苷、厚樸中厚樸酚與和厚樸酚進行含量測定。本文借鑒《中國藥典》及文獻方法[1-4]，建立了HPLC法分別測定芪術鼻炎清顆粒中黃芪甲苷、厚樸酚與和厚樸酚的含量方法?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 高效液相色譜儀（日本島津,LC-2010A）;萬分之一天平（瑞士梅特勒-托利多,AL-204）;十萬分之一天平（瑞士梅特勒-托利多,AB135-S）黃芪甲苷對照品（中國食品藥品檢定研究院）;厚樸酚對照品(上海原葉生物公司）;和厚樸酚對照品(上海原葉生物公司）;芪術鼻炎清顆粒(自制);甲醇,異丙醇,乙腈均為色譜純

1.2 方法 厚樸酚、和厚樸酚含量測定方法學考察：（1）色譜條件和系統(tǒng)適應性試驗 色譜柱：AgilentExtend-C18（4.6mm×250mm，5μm），流動相：甲醇-異丙醇-水(36∶21∶36)，檢測波長294 nm，流速1.0m l/ min，柱溫35℃。（2）溶液的制備 供試品溶液制備：精密稱定本品2 g,放入磨口錐形瓶中，加入20m l甲醇溶液，振搖1 h，密封保存24 h；濾過；取續(xù)濾液加入25m l容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻[5-6]。

2 結果

2.1 對照品溶液制備 取厚樸酚、和厚樸酚對照品，精密稱重，加甲醇分別制成每1m l含厚樸酚40μg、和厚樸酚24μg的溶液。進樣量：供試品溶液、對照品溶液各10μl。

標準曲線制定：分別取厚樸酚對照品4.0mg、和厚樸酚對照品2.5mg，分別加甲醇溶解定容至25ml容量瓶中，分別向高效液相色譜中注入2μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，結果如下表2、表3。

表1 厚樸酚線性考察結果

表2 和厚樸酚線性考察結果

2.2 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10μl/次,連續(xù)進樣6次，厚樸酚、和厚樸酚峰面積的RSD分別為1.27%、1.53%。按標準曲線制定方法制備供試品溶液一份（樣品批號：2014001），精密吸取該溶液10 μl/次,連續(xù)進樣6次，厚樸酚、和厚樸酚峰面積的RSD分別為1.86%、1.56%。說明儀器精密度良好。

2.3 重現(xiàn)性試驗 取同一批號樣品（2014001）6份，分別按標準曲線制定方法制備供試品溶液，測定厚樸酚、和厚樸酚含量，結果厚樸酚的平均含量為0.855mg/g，RSD值為1.28%，和厚樸酚的平均含量為0.287mg/g，RSD值為1.37%；結果表明該方法重現(xiàn)性較好。

2.4 重復性檢查 取中試樣品7批，按照2.1.2項下方法制備供試品溶液，高效液相進樣10μL，計算不同批次中厚樸酚與和厚樸酚的含量，結果見表3。

表3 不同批次厚樸酚與和厚樸酚含量

通過不同批次檢查得出，不同日期生產(chǎn)的顆粒中厚樸酚與和厚樸酚含量變化不大，均符合標準，穩(wěn)定性較好。

2.5 加樣回收率試驗 分別取本品顆粒約1 g（批號2014007）6份（已知厚樸酚為0.8618mg/g，和厚樸酚為0.2872mg/g），精密稱定，按標準曲線制定方法制備供試品溶液，分別精密加入不同濃度的對照品溶液各1.0ml，混勻，測定，按公式1計算回收率，結果如表4、表5。

表4 和厚樸酚加樣回收試驗結果

表5 厚樸酚加樣回收試驗結果

根據(jù)加樣試驗結果，厚樸酚平均加樣回收率為101.35%，RSD為1.54%，和厚樸酚平均加樣回收率為97.76%，RSD為1.28%，說明本方法可行。

圖3 制劑中厚樸酚、和厚樸酚加樣回收測定HPLC圖

2.6 黃芪甲苷含量測定方法學考察

2.6.1 色譜條件和系統(tǒng)適應性試驗 色譜柱：KromasoilODS-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈：水（30:70）；蒸發(fā)光檢測器；漂移管溫度：105℃，載氣流速為2.7ml/min，柱溫：30℃，以黃芪甲苷計理論塔板數(shù)不得少于4000[7]。

2.6.2 溶液的制備 供試品溶液制備：精密稱定本品5 g，裝入磨口具塞錐形瓶中；加入25ml加入甲醇；稱重，超聲波超聲30min，精密稱重補足重量；濾過，蒸干濾液，殘渣加20m l水溶解，先用水飽和正丁醇進行萃取3次，每次20m l，合并正丁醇液；再用氨試液萃取正丁醇液2次，每次30m l，正丁醇液蒸干，加甲醇溶液轉移到10m l容量瓶至刻度，搖勻。對照品溶液的配制：取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。進樣量：供試品溶液、對照品溶液各10μl。

2.6.3 標準曲線制定 稱取黃芪甲苷對照品5份，精密稱定，加甲醇分別制成每1ml含50μg、100μg、250μg、500μg、750μg的溶液，作為對照品溶液，進高效液相色譜儀測定，分別進樣10μl，測得峰面積，以進樣量對數(shù)（lgx）為橫坐標，以峰面積對數(shù)(lgy)為縱坐標，繪制標準曲線。標準曲線見圖4。

圖4 黃芪甲苷標準曲線

回歸方程：lgy=1.3239lgx+7.0720，r=1.0000，表明線性良好。實驗結果表明，黃芪甲苷進樣量在0.5024～7.452μg范圍內線性關系良好。

圖5 芪甲苷HPLC圖

2.6.4 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10μl,連續(xù)進樣6次，黃芪甲苷峰面積的RSD為0.95%，證明儀器精密度符合測定要求。按溶液制備項下方法制備供試品溶液一份（樣品批號：2014001），精密吸取該溶液10μl/次,連續(xù)進樣6次，黃芪甲苷峰面積的RSD為1.57%。說明儀器精密度良好。

2.6.5 重現(xiàn)性試驗 取同一批號樣品（2014001）6份，分別按溶液制備項下方法制備供試品溶液，測定黃芪甲苷含量，結果黃芪甲苷的平均含量為0.141mg/g，RSD值為1.09%；結果表明該方法重現(xiàn)性較好。

2.6.6 含量重復性檢查：取中試樣品7批，按照溶液制備項下方法制備供試品溶液，高效液相進樣10μl，計算不同批次中黃芪甲苷的含量，結果見表6。

表6 不同批次厚樸酚與和厚樸酚含量

通過不同批次檢查得出，不同日期生產(chǎn)的顆粒中黃芪甲苷含量變化不大，均符合標準，穩(wěn)定性較好。

2.6.7 加樣回收率試驗 取本品顆粒（批號2014007），精密稱取6份，6.0 g/份，按溶液制備項下方法制備供試品溶液，分別精密加入不同濃度的對照品溶液各1.0ml，混勻，測定，按公式1計算回收率，結果見表7。

表7 加樣回收試驗結果表

以上實驗結果表明，黃芪甲苷的平均加樣回收率為96.47%，RSD為1.95%，方法可行。

圖6 制劑中黃芪甲苷加樣回收測定HPLC圖

3 討論

芪術鼻炎清顆粒是在臨床經(jīng)驗方基礎上研究開發(fā)的中成藥制劑，其質量標準研究經(jīng)過了多次的篩選試驗，其中厚樸酚、厚樸酚含量測定中考察了甲醇-水（36∶74），甲醇-異丙醇-水（50∶30∶20），甲醇-異丙醇-水(36∶21∶36)等流動相，經(jīng)比較，甲醇-異丙醇-水(36∶21∶36)作為流動相時各峰分離效果好，基線平穩(wěn)；黃芪甲苷紫外吸收很弱，故采用了蒸發(fā)光檢測器（ELSD），可有效排除流動相、成分結構等的影響，對檢測用氣流量、漂移管溫度等參數(shù)進行了優(yōu)化，最終確定流動相乙腈：水（30∶70），漂移管溫度：105℃，載氣流速為2.7m l/min，柱溫：30℃。

本文在工藝研究的基礎上，結合中國藥典及部分文獻方法，對芪術鼻炎清顆粒中厚樸酚與(和）厚樸酚、黃芪甲苷含量測定方法進行了優(yōu)化，結果表明方法可行，精密度、專屬性、重現(xiàn)性、回收率均符合要求，可作為該顆粒中厚樸、黃芪的定量方法。同時考慮到大生產(chǎn)的工藝復雜性，確定顆粒中厚樸酚與（和）厚樸酚的含量為不少于0.60mg/g，黃芪甲苷含量為不少于0.10mg/g。

[1]國家藥典委員會.中國藥典(Ⅰ部)[M].北京:化學工業(yè)出版社,2010: 235、283.

[2]胡端龍,姜麗珍,奚靜芳,等.丹溪玉屏風顆粒中黃芪甲苷的含量測定[J].中國現(xiàn)代中藥,2011,13(6):41-42.

[3]孟超,吳豐,馬林.厚樸類中藥厚樸酚及后厚樸酚含量測定[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2007,19(6):1024-1026.

[4]初洪波,仇志凱,吳迪,等.HPLC測定參紅補血顆粒中紅景天苷的含量[J].長春中醫(yī)藥大學學報,2014,30(5):815-817.

[5]馬大龍,萬鵬,代龍,等.HPLC同時測定四正顆粒中厚樸酚、和厚樸酚含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報,2014,16(2):54-56.

[6]鄭平,邢佩,王文忠.HPLC法測定平胃泡騰片中厚樸酚及和厚樸酚含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報,2008,10(11):165-166.

[7]王春怡,李衛(wèi)民.HPLC-ELSD法測定不同產(chǎn)地黃芪中黃芪甲苷的含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報,2008,10(10):144-145.

Study on The Content Determination Method of Qizhu Rhinitis Granules

An Yun＊,Wang Chenchen,Lu Shihai,Liu Xiangyin
(＊Heze Medical Co llege;*Shandong Danhong Pharmaceutical Co,Limited,Heze 274000,Shandong)

ObjectiveTo establish the content determination method of Qizhu rhinitis granules.MethodsDetermined the contents ofmagnolol and honokiol using HPLC and the contents of astragaloside using HPLC-ELSD.ResultsThe responses of magnolol,honokiol,astragaloside were linear in the ranges of 0.32～4.00μg(r=0.9997),0.2～2.5μg(r=0.9998),0.5024～7.452μg(r=1.0000)respectively.The average recoveries were 101.35%(RSD=1.54%), 97.76%(RSD=1.28%),96.47%(RSD=1.96%).ConclusionThe method was accurate,reliable and good repeatability.It can be used for quality control of Qizhu rhinitis granules.

Qizhu rhinitis granules;Content determination

R284.2

：A

：1008-4118（2016）02-0011-04

10.3969/j.issn.1008-4118.2016.02.004

2015-12-10