鄧曉莉，鐘麗君，孫 琳，李常虹，劉湘源△

(1. 北京大學(xué)第三醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，北京 100191；2. 北京大學(xué)醫(yī)藥衛(wèi)生分析中心，北京 100191)

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·論著·

抗collectin 11抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷中的意義

鄧曉莉1，鐘麗君2，孫 琳1，李常虹1，劉湘源1△

(1. 北京大學(xué)第三醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，北京 100191；2. 北京大學(xué)醫(yī)藥衛(wèi)生分析中心，北京 100191)

目的：評價(jià)抗collectin 11抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus, SLE)的診斷和病情活動(dòng)性判斷中的作用。方法： 本研究為橫斷面研究，同時(shí)納入SLE活動(dòng)組、SLE緩解組、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)組、原發(fā)性干燥綜合征(Sj?gren syndrome，SS)組以及健康對照(healthy control，HC)組5組患者，應(yīng)用ELISA方法檢測血清抗collectin 11抗體水平，比較各組差異并進(jìn)行受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線分析。結(jié)果： 5組各納入30例患者，SLE活動(dòng)組和SLE緩解組之間抗collectin 11抗體水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(88.8±16.8vs. 89.7±24.7，P=0.896)。SLE組作為一個(gè)整體，其抗collectin 11抗體水平(89.1±19.4)顯著高于RA組(49.1±22.0)、SS組(56.9±30.1)以及HC組(72.7±24.6)(P<0.001，P<0.001，P=0.007)?？筩ollectin 11抗體診斷SLE的ROC曲線下面積為0.806，提示具有一定的診斷價(jià)值，并且與其他SLE特異性自身抗體有一定的互補(bǔ)作用。結(jié)論： 血清抗collectin 11抗體在SLE組中顯著高于RA組、SS組以及HC組，并具有一定的診斷價(jià)值，有可能成為SLE新的特異性自身抗體之一。

紅斑狼瘡，系統(tǒng)性；膠原凝集素；診斷

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種以多種自身抗體產(chǎn)生為主要特點(diǎn)的系統(tǒng)性自身免疫病，自身抗體對于SLE 的診斷至關(guān)重要，但目前已知的SLE特異性抗體僅有抗雙鏈DNA(double-stranded DNA，dsDNA)抗體以及Sm抗體，而這兩種抗體的敏感性又不夠高，僅44%左右[1]。因此，尋找新的SLE特異性抗體對于提高SLE診斷的準(zhǔn)確性非常必要。此外，SLE病情活動(dòng)性的判斷對于SLE的治療也非常重要，目前常用的評價(jià)指標(biāo)包括抗dsDNA抗體和補(bǔ)體。近年來的研究和臨床觀察發(fā)現(xiàn)，這些指標(biāo)也存在不足，在不少患者中抗dsDNA抗體和補(bǔ)體并不隨病情活動(dòng)度的變化而變化[2]，因此尋找新的指標(biāo)來評價(jià)病情活動(dòng)情況也十分必要。既往研究發(fā)現(xiàn)凝集素途徑的補(bǔ)體激活可能與SLE的發(fā)病相關(guān)[3]，我們的前期研究也發(fā)現(xiàn)膠原凝集素11(collectin 11)與SLE的病情似乎有一定的相關(guān)性，本研究即在此基礎(chǔ)上分析抗collectin 11抗體在SLE診斷和病情活動(dòng)性判斷中的作用。

1 資料與方法

1.1 患者入選標(biāo)準(zhǔn)

本研究為橫斷面研究，研究對象為2016年5月至2016年8月在北京大學(xué)第三醫(yī)院門診就診以及住院的患者，納入標(biāo)準(zhǔn)及分組如下：(1)SLE緩解組：滿足1997年美國風(fēng)濕病學(xué)會修訂的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)，SLE疾病活動(dòng)度評分2000(SLE disease activity index-2000，SLEDAI-2000)≤4分且沒有臟器受累；(2)SLE活動(dòng)組：符合1997年美國風(fēng)濕病學(xué)會修訂的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)，SLEDAI-2000≥9分；(3)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)組：滿足2009年美國-歐洲聯(lián)合發(fā)布的RA分類診斷標(biāo)準(zhǔn)；(4)原發(fā)性干燥綜合征(Sj?gren syndrome，SS)組：滿足2002年美國-歐洲聯(lián)合發(fā)布的SS診斷標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)納入年齡、性別匹配的健康志愿者作為對照(healthy control，HC)組。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并現(xiàn)癥感染的患者。所有患者均簽署知情同意書后入選，本研究經(jīng)過北京大學(xué)第三醫(yī)院醫(yī)學(xué)科學(xué)研究倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 血清抗collectin 11抗體的檢測

患者在納入時(shí)抽取4 mL外周靜脈血，不抗凝，留取血清。血清抗collectin 11抗體的檢測采用ELISA方法，具體如下：抗collectin 11抗體(批號ab91483，美國abcam公司)1 ∶1 000稀釋后，100 μL每孔包板，4 ℃過夜；.洗液洗板3次，35 g/L奶粉每孔300 μL，封閉2 h；洗液洗板3次，每孔血清100 μL，室溫2 h；洗液洗板3次，抗人HRP-IgG抗體(1 ∶5 000，北京康為世紀(jì))每孔100 μL，室溫1 h；洗液洗板3次，TMB顯色15 min，酶標(biāo)儀490 nm下讀數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，采用描述性統(tǒng)計(jì)方法分析患者人口學(xué)資料，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)或方差分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)分析，采用ROC曲線進(jìn)行診斷分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者資料

共120例患者和30例健康志愿者入選，其中SLE活動(dòng)組、SLE緩解組、RA組、SS組各30例患者。各組患者年齡、性別、病程等基礎(chǔ)資料如表1所示，其中男性13例，女性137例，年齡(34±14)歲(18～77歲)。SLE活動(dòng)組和緩解組患者的實(shí)驗(yàn)室特點(diǎn)見表2。

表1 各組患者基礎(chǔ)資料(n=30)

SLE, systemic lupus erythematosus; RA, rheumatoid arthritis; SS, primary Sj?gren syndrome; HC, healthy control.

表2 兩組SLE患者的臨床和實(shí)驗(yàn)室特點(diǎn)(n=30)

SLE, systemic lupus erythematosus; SLEDAI-2000, systemic lupus erythematosus disease activity index 2000; anti-dsDNA, anti-double-stranded DNA antibody; anti-nRNP, anti-nuclear ribonucleoprotein antibody; anti-rRNP, anti-ribosome ribonucleoprotein antibody; anti-SSA, anti-Sj?gren syndrome A antibody; anti-SSB, anti-Sj?gren syndrome B antibody.

2.2 各組血清抗collectin 11抗體水平的比較

各組之間抗collectin 11抗體水平的比較如圖1所示。5組間抗collectin 11抗體水平差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=13.769，P<0.001)， 但SLE活動(dòng)組和SLE緩解組間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(88.8±16.8vs. 89.7±24.7，P=0.896)。將SLE所有患者作為一個(gè)整體與其他4組患者進(jìn)行比較，結(jié)果顯示SLE組抗collectin 11抗體水平(89.1±19.4)顯著高于RA組(49.1±22.0)、SS組(56.9±30.1)以及HC組(72.7±24.6)(P<0.001，P<0.001，P=0.007, 圖1)。

Abbreviations as in Table 1. *P<0.001， # P=0.007， vs. SLE (SLE active and SLE remission as a whole).

圖1 各組血清抗collectin 11抗體水平的比較

Figure1 Comparison of serum anti-collectin 11 among the five groups

2.3 血清抗collectin 11抗體診斷SLE的準(zhǔn)確性分析

以1997年美國風(fēng)濕病學(xué)會修訂的SLE診斷分類標(biāo)準(zhǔn)作為金標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)血清抗collectin 11抗體水平不同臨界值(cut-off值)診斷SLE的敏感性和特異性繪制ROC曲線(圖2)。由圖可見，曲線下面積(area under curve，AUC)為0.806，提示血清抗collectin 11抗體水平診斷SLE有一定的準(zhǔn)確性，具有一定的診斷價(jià)值,其中77.326 7是診斷SLE準(zhǔn)確性最高的cut-off值，其敏感性和特異性分別為0.741和0.737，Youden指數(shù)為0.478。

圖2 血清抗collectin 11抗體診斷SLE的ROC曲線

Figure 2 ROC curve of serum anti-collectin 11 in the diagnosis of SLE

進(jìn)一步對60例SLE患者分析發(fā)現(xiàn)，在將抗collectin 11抗體≥77.326 7定義為陽性的情況下，抗collectin 11與抗dsDNA抗體以及Sm抗體有一定的互補(bǔ)作用，在抗dsDNA和Sm抗體均陰性的患者中，100%的患者抗collectin 11陽性(表3)。在臟器受累方面，抗collectin 11抗體陽性患者最常見的受累臟器依次為腎臟、血液系統(tǒng)、皮膚以及關(guān)節(jié)肌肉系統(tǒng),抗collectin 11抗體陰性患者最常見的受累臟器依次是血液系統(tǒng)、腎臟、關(guān)節(jié)肌肉、皮膚和神經(jīng)系統(tǒng),兩組相比，抗collectin 11抗體陽性患者神經(jīng)系統(tǒng)受累(P=0.043)及消化系統(tǒng)受累(P=0.046)更少見(表4)。

3 討論

膠原凝集素是參與固有免疫的一組蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是具有一個(gè)糖類識別區(qū)域和膠原樣區(qū)域，collectin 11是這個(gè)家族里最后被發(fā)現(xiàn)的分泌型膠原凝集素。collectin 11是一種血清可溶性蛋白，與甘露糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶(mannose binding lectin associated serine protease，MASPs)以復(fù)合物形式存在[4]。 Collectin 11參與凝集素的活化[5]，在體外它與微生物以及凋亡細(xì)胞結(jié)合后通過MASPs途徑激活補(bǔ)體[4]。

表3 SLE患者中抗collectin 11與其他抗體的相關(guān)性

dsDNA,double-stranded DNA.

補(bǔ)體活化包括經(jīng)典途徑、替代途徑以及凝集素途徑。補(bǔ)體的激活在SLE的發(fā)生、發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，其中經(jīng)典途徑中補(bǔ)體的激活及其激活產(chǎn)物在SLE中的作用已得到公認(rèn)，且已在臨床廣泛應(yīng)用，而有關(guān)凝集素途徑在SLE中的作用還不是很清楚。既往有研究提示，凝集素途徑可能也參與到SLE的補(bǔ)體活化中[6]，collectin 11通過凝集素途徑激活補(bǔ)體。研究還發(fā)現(xiàn)， SLE患者血清collectin 11水平顯著低于健康對照[6]，提示collectin 11可能與SLE的發(fā)病相關(guān)。有關(guān)抗collectin 11抗體在SLE診斷中的研究尚未見報(bào)道。

本研究發(fā)現(xiàn)，抗collectin 11抗體是SLE相對特異的抗體，SLE患者血清抗collectin 11抗體水平顯著高于RA、SS以及HC。與此相反，抗collectin 11抗體在SLE活動(dòng)組以及緩解組之間差異并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示該抗體對于病情活動(dòng)性的評估價(jià)值可能不大。

表4 SLE患者中抗collectin 11與臟器受累的相關(guān)性

目前臨床廣泛應(yīng)用的與SLE診斷相關(guān)的自身抗體針對的靶抗原都是細(xì)胞核等細(xì)胞成分(如抗核抗體)，其抗體與相應(yīng)的抗原結(jié)合后形成抗原抗體復(fù)合物，從而參與SLE的發(fā)病。靶抗原是血清蛋白質(zhì)(尤其是補(bǔ)體系統(tǒng)成分)的自身抗體很少，抗C1q抗體是針對補(bǔ)體C1第一組分的第一個(gè)反應(yīng)亞基C1q的抗體。C1q在經(jīng)典途徑補(bǔ)體活化、免疫復(fù)合物以及凋亡產(chǎn)物的清除中至關(guān)重要，抗C1q抗體的存在使C1q的生理功能大大減低[7]，導(dǎo)致免疫復(fù)合物和凋亡產(chǎn)物的清除減少并在腎臟局部沉積，從而參與SLE的發(fā)病。雖然collectin 11在SLE的發(fā)病中是否起作用以及如何起作用目前還不清楚，但基于其生物學(xué)特點(diǎn)，并結(jié)合既往研究結(jié)果，我們有理由推測，collectin 11很可能通過凝集素途徑在補(bǔ)體的激活、免疫復(fù)合物以及凋亡產(chǎn)物的清除中發(fā)揮一定的作用，從而參與SLE的發(fā)病。而抗collectin 11抗體的存在也有可能干擾其生理功能，從而參與SLE的發(fā)病。本研究結(jié)果也支持這一推測：SLE患者血清抗collectin 11抗體水平顯著高于RA以及SS，因?yàn)榕cRA等其他自身免疫病相比，補(bǔ)體的活化是SLE相對特異的發(fā)病機(jī)制之一。我們的研究中抗collectin 11抗體與SLE 病情的活動(dòng)性似乎沒有明顯的關(guān)系，與既往有關(guān)抗C1q抗體與SLE病情活動(dòng)性密切相關(guān)的結(jié)論有不同之處[8]，可能因?yàn)閏ollectin 11主要參與補(bǔ)體激活的凝集素途徑，而補(bǔ)體激活還有經(jīng)典途徑和替代途徑，其中經(jīng)典途徑在補(bǔ)體的激活和免疫復(fù)合物的清除中發(fā)揮更重要的作用，因此，抗C1q抗體更能反映SLE整體的補(bǔ)體激活情況，與病情活動(dòng)相關(guān)性更高，而抗collectin 11抗體水平的變化不一定能反映SLE整體的補(bǔ)體活化情況，因此也不能全面反映SLE的病情活動(dòng)情況。綜上，我們的結(jié)果提示，凝集素途徑的補(bǔ)體活化在SLE患者中普遍存在，但其程度似乎與總體病情變化關(guān)系不大。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，抗collectin 11抗體與抗dsDNA抗體以及Sm抗體有一定的互補(bǔ)作用，在這兩種抗體均陰性的患者中，100%的患者抗collectin 11抗體陽性，提示對于這些抗體陰性的患者，行抗collectin 11 抗體檢測可能有助于提高SLE的檢出率。另外，抗collectin 11抗體陽性的患者中，神經(jīng)系統(tǒng)和消化系統(tǒng)受累更少見，這對于預(yù)測患者的預(yù)后有一定價(jià)值。

總之， 本研究發(fā)現(xiàn)血清抗collectin 11抗體在SLE患者中顯著高于RA、SS以及HC，是SLE相對特異的自身抗體，并且具有一定的診斷價(jià)值，與其他SLE特異性自身抗體有一定的互補(bǔ)作用，有可能成為SLE新的自身抗體之一。該抗體在緩解期和活動(dòng)期SLE患者中無顯著差別，提示其評價(jià)病情活動(dòng)性的價(jià)值可能不大。本研究提示抗collectin11抗體與既往其他抗體在SLE中的價(jià)值可能不同，在SLE的診斷中有一定的應(yīng)用潛力，但本研究樣本量較小，檢測抗collectin 11抗體的方法較單一，有待進(jìn)一步在更大樣本量的人群中采用多種檢測方法驗(yàn)證該抗體的診斷價(jià)值。

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(2016-07-20收稿)

(本文編輯：趙 波)

·消息·

北京大學(xué)人民醫(yī)院姜保國教授獲2016年度顧氏和平獎(jiǎng)

2016年11月23日，第十五屆顧氏國際和平獎(jiǎng)(Gusi Peace Prize)頒獎(jiǎng)典禮在菲律賓首都馬尼拉國際會議中心盛大舉行，來自世界多個(gè)國家的政要及菲律賓當(dāng)?shù)馗鹘缰耸砍鱿舜舜晤C獎(jiǎng)典禮，北京大學(xué)人民醫(yī)院院長姜保國教授等來自13個(gè)國家和地區(qū)的14位獲獎(jiǎng)?wù)攉@頒此獎(jiǎng)項(xiàng)。這是我國大陸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)W者第二次獲此國際盛譽(yù)，此前中國器官捐獻(xiàn)與移植委員會主任委員黃潔夫榮獲2015年度顧氏和平獎(jiǎng)。

菲律賓顧氏和平獎(jiǎng)?lì)愃朴谥Z貝爾和平獎(jiǎng)，是聯(lián)合國備案的僅有的兩個(gè)世界級和平獎(jiǎng)項(xiàng)。該獎(jiǎng)項(xiàng)由菲律賓著名政治活動(dòng)家赫梅尼亞諾·哈威爾·顧氏于上世紀(jì)70年代中期創(chuàng)立，每年授予在科學(xué)研究、政治文化、文學(xué)藝術(shù)、醫(yī)藥衛(wèi)生、慈善宗教、商業(yè)經(jīng)濟(jì)、國際事務(wù)等領(lǐng)域致力于促進(jìn)人類和平、和諧、尊重人類生命與尊嚴(yán)，并做出杰出貢獻(xiàn)的個(gè)人和組織。

姜保國教授作為中國著名的創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)專家及中國新一代創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)的領(lǐng)軍人物，于2006年創(chuàng)建北京大學(xué)交通醫(yī)學(xué)中心，啟動(dòng)中國嚴(yán)重創(chuàng)傷、交通傷救治規(guī)范的研究，其創(chuàng)新性成果曾獲得教育部技術(shù)發(fā)明一等獎(jiǎng)、教育部科技進(jìn)步獎(jiǎng)一等獎(jiǎng)。由于姜保國教授在醫(yī)療領(lǐng)域所取得的突出成績，特別是在周圍神經(jīng)損傷與修復(fù)研究及中國創(chuàng)傷救治體系建設(shè)所取得的創(chuàng)新性成果，榮獲2016年度顧氏和平獎(jiǎng)。菲律賓顧氏國際和平獎(jiǎng)國際委員會高度肯定姜保國教授提出的替代傳統(tǒng)神經(jīng)外膜縫合的小間隙套接縫合技術(shù)，高度評價(jià)姜保國教授為改善人類健康所作出的不懈努力，以及為改善人類健康、減少患者痛苦所作出的卓越貢獻(xiàn)。

(北京大學(xué)人民醫(yī)院宣傳處)

Diagnostic significance of anti-collectin 11 in systemic lupus erythematosus

DENG Xiao-li1, ZHONG Li-jun2, SUN Lin1, LI Chang-hong1, LIU Xiang-yuan1△

(1. Department of Rheumatolgoy and Immunology, Peking University Third Hospital, Beijing 100191, China; 2.Medical and Health Analytical Center, Peking University Health Science Center, Beijing 100191, China)

Objective： To analyze the role of anti-collectin 11 in the diagnosis of systemic lupus erythematosus (SLE) and in the evaluation of disease activity. Methods: This was a cross-sectional study. Five groups of patients were enrolled: SLE active (SLE disease activity index-2000，SLEDAI-2000≥9), SLE remission (SLEDAI-2000≤4 and there was no organ involvement), rheumatoid arthritis (RA), primary Sj?gren Syndrome (SS) and healthy control (HC). Serum anti-collectin 11 was detected in all the groups by ELISA. One-way ANOVA analysis and LSD-ttest as post-hoc analysis were used to compare the levels of anti-collectin 11 among all the groups. Receiver operating characteristic (ROC) curve and the area under curve (AUC) were used to analyze the value of anti-collectin 11 in the diagnosis of SLE. Results: In the study, 30 patients were enrolled in each group, including 13 males and 137 females with an average age of (34±14) years (18-77 years). The age and gender of the other three groups were comparable to the two SLE groups. The difference of serum anti-collectin 11 between the SLE active group and SLE remission group was not statistically significant (88.8±16.8vs. 89.7±24.7,P=0.896). The level of serum anti-collectin 11 was significantly higher in SLE group (as a whole) (89.1±19.4) than in RA group (49.1±22.0), SS group (56.9±30.1) and HC group (72.7±24.6) (P<0.001,P<0.001,P=0.007, respectively). The AUC was 0.806 for the diagnosis of SLE by serum anti-collectin 11. Further descriptive analysis showed that the positive rate of anti-collectin 11 was very high in the patients of SLE in whom both anti-double-stranded DNA (dsDNA) and Sm antibody were negative. The nervous system and gastrointestinal system involvement were the most common in the patients with positive anti-collectin 11. Conclusion: The level of serum anti-collectin 11 was significantly higher in SLE than in RA, SS and HC. Anti-collectin 11 antibody had a relatively high value in the diagnosis of SLE and it might have some complementary function in the diagnosis of SLE. It might be a relatively specific autoantibody for SLE.

Lupus erythematosus, systemic; Collectins; Diagnosis

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81501390)資助Supported by the National Natural Science Foundation of China (81501390)

時(shí)間：2016-11-2 9：01：45

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.4691.R.20161102.0901.018.html

R593.241

A

1671-167X(2016)06-0982-05

10.3969/j.issn.1671-167X.2016.06.011

△Corresponding author’s e-mail, 13683657545@163.com