摘要：運用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術（PAGE）對豫西脂尾羊血清酯酶（Es）的多態(tài)性進行檢測和分析。結果表明，在豫西脂尾羊上Es基因座有2個等位基因即Es+和Es-，而且Es+和Es-的基因頻率別為0.55和0.45，有3種基因型Es+ +、Es+ -、Es- -，其頻率分別為0.425、0.250和0.325。不同基因型西清酯酶對體尺的影響結果表明，在薦高方面，Es+ +基因型顯著高于Es+-基因型（P<0.05），而兩者均與Es- -基因型沒有顯著差異（P>0.05）。在胸圍方面，Es+ +基因型極顯著高于Es--基因型（P<0.01），而兩者均與Es+ -基因型的胸圍沒有顯著差異（P>0.05）。Es對其他指標都無顯著影響（P>0.05）。

關鍵詞：豫西脂尾羊；血清酯酶；多態(tài)性

中圖分類號：S826.8+9 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）11-2846-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.11.033

豫西脂尾羊在動物分類學中屬?？粕窖騺喛疲–aprovinae）綿羊?qū)伲∣vis）[1]，系蒙系綿羊，源于中亞和遠東地區(qū)，經(jīng)過豫西人們長期馴化選育而成，因脂尾呈橢圓形，尾尖緊貼尾溝，將尾分為兩瓣，下垂于飛節(jié)之上；主要分布在原洛陽地區(qū)和原南陽地區(qū)北部，以臨汝縣最多，方城縣次之，故定名為“豫西脂尾羊”。血液蛋白及同工酶多態(tài)性可用于研究畜禽品種遺傳結構，探索品種的起源分化，親緣關系[2]以及與經(jīng)濟性狀的相關性，早期檢測選種，縮短世代間隔，是血液生化遺傳標記的最常用指標，在動物遺傳標記領域一直占有十分重要的地位，對品種資源的保存和利用不但提供了有力的工具、有效的方法和豐富的研究資料等理論指導意義，而且在生產(chǎn)上有現(xiàn)實的使用價值[3]。目前，張才駿等[4，5]、馬海明等[6]、楊永新等[7]、臧榮鑫等[8]對優(yōu)良品種綿羊血液蛋白多態(tài)性進行了研究。楊俊年[9]、楊慈清等[10]研究表明，血清酯酶的多態(tài)性與綿羊生產(chǎn)性能有一定相關性。本研究主要對豫西脂尾羊血清酯酶的多態(tài)性進行分析，這對于揭示豫西脂尾羊的種質(zhì)特性、親緣關系、品種起源、進化歷程等方面均有重要的學術價值，為豫西脂尾羊的選育提高和保種提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

采集40只純種豫西脂尾羊的新鮮血樣5 mL/只，肝素抗凝，低溫帶回實驗室，室溫下以1 500 r/min離心20 min，將上層血漿吸入滅菌小瓶，貼好標簽置于-20 ℃的冰柜中保存。體尺測量包括體長、體高、薦高、胸圍、胸深、胸寬、管圍，測量均參考《家畜育種學》的方法測定[11]。

1.2 方法

按楊廣禮[12]的方法制備凝膠，酯酶測定所用凝膠為8%分離膠和3.5%濃縮膠，淀粉酶測定所用凝膠為7.5%分離膠和4%濃縮膠，凝膠的配制成分及用量見表1。以160 V的電壓進行15 min的預電泳，然后穩(wěn)壓200 V開始正式電泳，酯酶2.5～3.0 h，淀粉酶4.0～4.5 h。

血清酯酶：將電泳后的凝膠用蒸餾水漂洗后，放入酯酶的染色液（a-乙酸萘酯和β-乙酸萘酯各200 mg分別溶于10 mL丙酮和20 mL 0.15 mol/L的pH 7.5的磷酸緩沖液中，用前各取上清液10 mL再加入100 mg固藍RR鹽，用0.15 mol/L的磷酸緩沖液定容至100 mL），在37 ℃保溫20 min，取出凝膠用無離子水沖洗，酶帶呈紫色和褐色。置入7%的乙酸中保存。對Es的判型是按文獻[13，14]的方法進行。即：在15 min以內(nèi)出現(xiàn)褐色區(qū)帶的為Es+ +型，雖然出現(xiàn)褐色區(qū)帶但較模糊的為Es+ -，出現(xiàn)紫紅色活性區(qū)帶的為Es- -。

2 結果與分析

2.1 血清酯酶（Es）

血清酯酶（Es）在豫西脂尾羊中存在多態(tài)性，根據(jù)顯帶顏色將其判定為Es+ +、Es+ -和Es- -。血清酯酶3種基因型Es+ +、Es+ -、Es- -的基因型頻率分別為0.425、0.250、0.325；血清酯酶有2個等位基因Es+和Es-，Es+和Es-的基因頻率分別為0.55、0.45。豫西脂尾羊Es基因型頻率和基因頻率見表2，可見Es+基因是豫西脂尾羊的優(yōu)勢基因，其頻率為0.55。而Es+ +基因型是豫西脂尾羊的優(yōu)勢基因型，其頻率為0.425。

2.2 血清酯酶多態(tài)與體尺性狀的關系

豫西脂尾羊的不同基因型血清酯酶對體尺指標（體長、體高、薦高、胸圍、胸深、胸寬、管圍）的影響結果見表3，不同基因型血清酯酶除了對薦高和胸圍有顯著影響外，對其他指標都無顯著影響（P>0.05）。在薦高方面，Es+ +基因型顯著高于Es+ -基因型，而兩者均與Es- -基因型的薦高（61.00）沒有顯著差異。在胸圍方面，Es+ +基因型極顯著高于Es- -基因型，而兩者均與Es+ -基因型沒有顯著差異。

3 討論

酯酶有羧基酯酶、膽堿酯酶和芳基酯酶3種酯酶，但只有芳基酯酶（Arylesterase，Es）存在多態(tài)性[10]，因此，豫西脂尾羊血清酯酶指芳基酯酶。按照張才俊等[4]的研究結果，根據(jù)Es的基因頻率可將綿羊分為兩大類：一類是Es-占有絕對優(yōu)勢，其Es-基因頻率在0.8～1.0之間；另一類的Es+和Es-基因頻率大致相等，豫西脂尾羊的Es-基因頻率是0.45，故應屬于后一類綿羊。楊廣禮[12]研究發(fā)現(xiàn)，Es在甘肅藏羊和小尾寒羊中的表型均為Es+ +、Es+ -、Es- -，該位點受一對共顯性等位基因Es+、Es-控制，在甘肅藏羊中Es- -為優(yōu)勢基因型，頻率為0.370 4，小尾寒羊中以Es- -為優(yōu)勢基因型，其頻率為0.459 2。甘肅高山細毛羊、青海細毛羊、青海藏羊以Es+ -為優(yōu)勢基因型，而灘羊以Es+ +為優(yōu)勢基因型。如果以優(yōu)勢基因計算的話，小尾寒羊、青海細毛羊以Es-為優(yōu)勢基因；而甘肅高山細毛羊、青海藏羊、甘肅藏羊、灘羊以Es+為優(yōu)勢基因。在本研究中，Es在豫西脂尾羊中以Es+為優(yōu)勢基因，因此作為一個群體與其他群體不同的特殊蛋白位點，這與張慧茹等[15]的研究結果相一致。

楊俊年[9]和楊慈清等[10]研究表明，小尾寒羊Es+ +型的產(chǎn)羔數(shù)顯著（P<0.05）高于Es- -型和Es+ -型。而本研究與以上研究有相似的結果，從豫西脂尾羊的不同基因型血清酯酶對體尺指標和產(chǎn)羔數(shù)的影響中可以看出，按照Es- -、Es+ -、Es+ +的順序，第一胎次產(chǎn)羔數(shù)、第二胎次產(chǎn)羔數(shù)、第三胎次產(chǎn)羔數(shù)表現(xiàn)為增加趨勢，但是不同基因型血清酯酶對產(chǎn)羔數(shù)無顯著影響（P>0.05）。不同基因型血清酯酶除了對薦高和胸圍有顯著影響（P<0.05）外，對其他體尺指標都無顯著影響（P>0.05）。Es+ +基因型的薦高顯著高于Es+ -基因型的薦高（P<0.05），而兩者均與Es- -基因型的薦高沒有顯著差異（P>0.05）。Es+ +基因型的胸圍顯著高于Es- -基因型的胸圍（P<0.05），而兩者均與Es+ -基因型的胸圍沒有顯著差異（P>0.05）。

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