摘要：對(duì)微波輔助條件下乙醇溶液提取香椿葉中黃酮成分進(jìn)行了研究，以總黃酮提取量為考察目標(biāo)，綜合單因素影響確定通過L9（34）正交實(shí)驗(yàn)初步確定最佳提取工藝條件為：甲醇濃度50%，微波頻率取700 W，料液比1∶25，回流25 min，獲得的黃酮提取收率5.34%。

關(guān)鍵詞：香椿；黃酮；微波；提取工藝

中圖分類號(hào)：O629.9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-9944（2016）20-0120-02

1 引言

香椿，其春季所發(fā)嫩芽是傳統(tǒng)的菜肴，不但營養(yǎng)豐富還具有食療保健作用，具有瀉毒下火、保護(hù)肝臟、抵抗炎癥、降低血壓、解除痙攣等多種生理活性功效[1～3]。經(jīng)現(xiàn)代科學(xué)研究，香椿樹嫩葉中富含具有廣泛生物活性和重要藥用價(jià)值的黃酮類化合物，其提取物具有抗氧化、抗菌、抵抗炎癥、降壓、抗癌等多種生理活性功效藥理作用[4～7]。但是，目前香椿在秋季落葉的利用研究極少，擬在傳統(tǒng)的熱回流提取工藝之上對(duì)微波輔助提取香椿老葉中黃酮的工藝進(jìn)行研究[8]，豐富香椿老葉黃酮提取的工藝方法，將為香椿老葉黃酮成分提取及分析的相關(guān)研究奠定理論基礎(chǔ)。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

實(shí)驗(yàn)儀器與試劑有：UV2550紫外分光光度計(jì)（日本島津），蘆丁分析標(biāo)準(zhǔn)品（阿拉丁），香椿（秋后老葉，達(dá)州萬源），其余試劑均為分析純。

2.2 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取蘆丁分析標(biāo)準(zhǔn)品20.0 mg，使用30%乙醇溶解并定容至100 mL制備的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)貯備液（0.2 mg/mL）。準(zhǔn)確移取0，1.0 mL， 2.0 mL， 4.0 mL， 6.0 mL， 8.0 mL， 10.0 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至7支25 mL容量瓶中。然后分別先加30%乙醇至體積一半，后加入0.7 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的亞硝酸鈉溶液，搖勻后放置5 min，再分別加入0.7 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的硝酸鋁溶液，搖勻后放置5 min，最后加入1 mol/L的氫氧化鈉溶液5 mL并用30%的乙醇定容至刻度，放置10 min。以未添加蘆丁儲(chǔ)備液的溶液為空白，在510 nm測(cè)定吸光度值，以吸光度Y為縱坐標(biāo)，黃酮濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。

2.3 香椿老葉黃酮的提取與含量測(cè)定

將香椿老葉去梗后放入干燥箱內(nèi)30℃干燥至恒重，經(jīng)中藥粉碎機(jī)粉碎后放入干燥器備用。準(zhǔn)確稱取1.00 g 香椿葉粉末移入燒瓶中，加入一定量的乙醇溶液，在一定的微波功率和一定的溫度下提取一定的時(shí)間，將提取液減壓抽濾除去濾渣，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶并用30%乙醇定容至刻度，搖勻。取10 mL定容后溶液的于轉(zhuǎn)子中，用離心機(jī)以10000 r/min的速度離心5 min，精確量取4 mL離心后的上層清液于25 mL容量瓶，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的Na（NO2）溶液0.7 mL，搖勻使其充分反應(yīng)后等待5 min，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的Al（NO3）3溶液0.7 mL，搖勻使其充分反應(yīng)后等待5 min，然后加入1 mol/L的NaOH溶液5 mL混勻使其充分反應(yīng)，最后用30%的乙醇定容至刻度，放置10 min作為待測(cè)溶液測(cè)其吸光度。

2.4 正交試驗(yàn)

2.4.1 正交試驗(yàn)因素水平

利用提前對(duì)微波輔助下提取香椿葉中的黃酮成分進(jìn)行了單因素實(shí)驗(yàn)計(jì)算后，確立了以乙醇水溶液濃度、微波輻射功率、微波輻射時(shí)間、料液比4個(gè)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)（表1）；將總黃酮提取率為最后考察指標(biāo)，結(jié)合實(shí)際情況確定最佳提取工藝。

2.4.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

按上述因素與水平設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，并進(jìn)行正交試驗(yàn)，結(jié)果如表2所示。

由表2可知，各因素的極差大小關(guān)系為RA>RB>RC>RD ，因此各因素對(duì)香椿葉總黃酮提取的影響順序?yàn)锳>B>C>D，即乙醇濃度>微波功率>微波時(shí)間>料液比，乙醇濃度的極差為0.194，影響程度最大；料液比極差為0.035，影響程度最小。綜合以上各因素的影響，確定提取香椿葉中黃酮成分的最佳工藝為即乙醇濃度50%，微波頻率700 W，微波時(shí)間25 min，料液比1∶25。

3 結(jié)果與討論

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果上看，乙醇濃度、微波功率、微波輻射時(shí)間、料液比幾個(gè)因素對(duì)香椿葉中黃酮成分的提取都有著明顯的影響。根據(jù)正交試驗(yàn)我們確定最佳提取工藝條件為乙醇濃度50%，微波頻率700 W，微波時(shí)間25 min，料液比1∶25。經(jīng)在最佳工藝條件下提取驗(yàn)證黃酮提取率為5.34%，我們對(duì)香椿葉提取物經(jīng)過一次D101大孔樹脂純化富集后黃酮含量即可達(dá)26.7%，經(jīng)高效液相色譜對(duì)其成分分析表明組分簡(jiǎn)單且主要成分集中，這些表明了香椿老葉黃酮成分的后續(xù)開發(fā)利用具有很好的前景。

參考文獻(xiàn)：

[1]裴宋雨，任志勇，焦振彬，等.香椿微衛(wèi)星富集文庫構(gòu)建及特性分析[J].種子，2015，34（2）： 13～16.

[2]郝繼偉.淺談虎目葉的資源價(jià)值與利用[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003（5）：102～103.

[3]李曙軒.中國農(nóng)業(yè)百科全書-蔬菜卷[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1990.

[4]張仲平，牛 超，孫 英.虎目葉黃酮類成分的分離與鑒定[J].中藥材，2001，24（10）：725～726.

[5]田迪英，楊榮華.虎目葉的抗菌作用研究[J].食品工業(yè)科技，2002，23（11）：21～22.

[6]張京芳，王冬梅，周 麗，等. 虎目葉抗氧化物提取工藝優(yōu)化與抗氧化活性分析[J]. 農(nóng)業(yè)機(jī)械學(xué)報(bào)， 2007，38（8）：97～100.

[7]曹瑋國，劉志勤，邵云.黃酮類化合物藥理作用的研究進(jìn)展[J].西北植物學(xué)報(bào)，2003，23（12）：2214～2247.

[8]杜惠蓉， 王 輝. 香椿葉中黃酮成分提取工藝技術(shù)研究[J]. 應(yīng)用化工，2015，44 （12）： 2243～2244.