譚利平 尤加銳 向方華 陳安平 夏 燕 馮 佳 蔡 杰 袁 林 蘇林沖 黃 勤向 陽⑥

(湖北民族學院風濕性疾病發(fā)生與干預湖北省重點實驗室，恩施445000)

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·中醫(yī)中藥與免疫·

溫陽活血通絡方對SSc小鼠體內(nèi)TGF-β1與MCP-1水平的影響①

譚利平②尤加銳③向方華④陳安平 夏 燕 馮 佳 蔡 杰⑤袁 林 蘇林沖④黃 勤②向 陽④⑥

(湖北民族學院風濕性疾病發(fā)生與干預湖北省重點實驗室，恩施445000)

目的：觀察溫陽活血通絡方對硬皮病小鼠體內(nèi)TGF-β1、MCP-1水平的影響。方法：采用博來霉素皮下注射制造硬皮病小鼠模型，對模型組小鼠分別給予溫陽活血通絡方、醋酸潑尼松、二藥聯(lián)合、生理鹽水灌胃28 d；HE染色與Masson染色觀察皮膚與肺組織病理學改變，ELISA檢測血清中TGF-β1與MCP-1的表達；免疫組化檢測皮膚與肺組織中二者表達水平。結果：①TGF-β1與MCP-1在模型鼠皮膚組織與肺中的表達部位有一定差異。各治療組TGF-β1與MCP-1較模型組均明顯減弱(P<0.05)，尤以兩藥聯(lián)合治療組變化明顯。②模型鼠血清中TGF-β1與MCP-1表達較正常鼠均顯著升高(P<0.01)，治療后，TGF-β1與MCP-1表達明顯降低(P<0.05)，尤以兩藥聯(lián)合治療組變化明顯。結論：溫陽活血通絡方能夠改善硬皮病小鼠皮膚與肺組織的病理學變化，且可能通過下調(diào)血清及皮膚組織中TGF-β1與MCP-1來發(fā)揮治療作用。

系統(tǒng)性硬化癥；溫陽活血通絡方；轉(zhuǎn)化生長因子β1；單核細胞趨化因子1

系統(tǒng)性硬化癥(Systemic sclerosis，SSc)又叫硬皮病，是一種進行性、系統(tǒng)性、慢性結締組織疾病，在我國自身免疫性疾病中，SSc的發(fā)病率僅次于類風濕關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡居第三位。本病女性發(fā)病率大約為男性的4.6倍[1]，80%發(fā)病年齡在11～50歲[2]，這個發(fā)病年齡段占據(jù)了整個社會人群的大部分。毛笑非等[3]采用SF-36量表評估87例系統(tǒng)性硬化癥患者的健康相關生活質(zhì)量，與健康人群的生活質(zhì)量進行比較，結果顯示SSc患者(局限型、彌漫型)與健康人群比較，生活質(zhì)量均存在不同程度的下降。這種下降與病情嚴重程度、生理機能下降情況、軀體疼痛程度、心理狀況變化及社會適應能力減退等存在顯著關聯(lián)性。

本病病因與發(fā)病機制至今尚不完全清楚，目前研究表明，在遺傳易感性基礎上，環(huán)境因素刺激活化機體產(chǎn)生炎癥反應和自身免疫應答，血管內(nèi)皮細胞進而受損，成纖維細胞活化、異常增殖，大量合成細胞外基質(zhì)(ECM)，造成組織纖維化，隨著病情不斷發(fā)展，炎癥逐漸消退，但纖維化的組織卻不可逆轉(zhuǎn)，最終導致多系統(tǒng)血管病變、組織纖維化改變和臟器功能衰竭，致使死亡，病情預后極差。本實驗以前期研究為基礎，采取動物實驗研究中藥復方溫陽活血通絡方(WHT)對SSc小鼠皮膚與血清的影響，探討其作用機制，并為尋找抑制SSc皮膚組織纖維化的新治療靶點提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 BALB/c小鼠，雌性，清潔級，體重平均為(20±2) g，6周齡左右，50只，購買于武漢大學動物實驗中心，質(zhì)量許可證編號：SCXK(鄂)20080004。

1.1.2 實驗藥品與試劑 溫陽活血通絡方：由淫羊藿20 g、丹參20 g、黃芪20 g、當歸10 g、桂枝10 g、白芍10 g、竹節(jié)參15 g、白芥子10 g、甘草5 g組成，購買于湖北民族學院附屬民大醫(yī)院中藥房；Zeocin博來霉素1.25 ml(100 mg/ml)由美國Invitrogen公司生產(chǎn)；醋酸潑尼松片(5 mg)由山東新華制藥股份有限公司生產(chǎn)；PBS緩沖液(pH：7.2～7.4)由武漢科瑞生物技術有限公司生產(chǎn)；快速Masson染液由南京建成科技有限公司生產(chǎn)；鼠TGF-β1與MCP-1一抗、鼠TGF-β1與鼠MCP-1 ELISA試劑盒均由美國BD公司生產(chǎn)；兔SP檢測試劑盒DAB顯色試劑盒由北京中杉金橋生物技術有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 實驗儀器 純水超純水制備系統(tǒng)由美國Millipore公司制造；倒置熒光顯微成像系統(tǒng)(IX71型)由日本OLYMPUS公司制造；倒置生物顯微鏡(CKX41型)由日本OLYMPUS公司制造；全波長全自動酶標儀由美國雷勃公司制造；輪轉(zhuǎn)式切片機(R138型)由湖北泰維科技實業(yè)有限公司制造；全系列單道可調(diào)移液器、多道可調(diào)移液器(8道型)由德國Eppendorf公司制造；液氮生物容器(ZCR型)由成都金鳳液氮容器有限公司制造；超低溫冰箱(-80℃)由日本SANYO公司制造；低溫冰箱(-20℃)由海爾公司制造。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 將50只小鼠適應性飼養(yǎng)7 d后，隨機分為正常組(5只)與模型組(45只)，模型組隨機分為對照組、WHT組、潑尼松組、WHT+潑尼松組、細胞實驗組，每組各9只，所有小鼠均常規(guī)飼養(yǎng)，自由進食。正常組均給予PBS皮下注射，模型組均給予配制好的博來霉素溶液皮下注射。

1.2.2 建立硬皮病小鼠模型 將所有小鼠背部中央靠近尾部區(qū)域皮膚碘伏消毒，用一次性備皮刀剃除該區(qū)域被毛，面積約1.5 cm×1.5 cm，用溫水擦洗背部脫落的被毛，室溫中晾干，在剃去被毛的皮膚區(qū)域用記號筆做好標記，酒精消毒背部標記區(qū)域皮膚，戴上無菌手套，用1 ml無菌注射器(已吸取相應藥物0.1 ml)取30～45傾斜緩慢進針，針下有空虛感即提示針頭刺入皮下，同時左右輕輕搖擺針頭，無阻礙感則繼續(xù)進針約1 cm深度，回抽注射器無回血，則可將相應藥物緩慢注入，可見皮下起囊性包塊，提示藥物進入皮下，注射完畢后緩慢拔出針頭，用無菌棉簽按壓片刻。所有小鼠均每天給藥1次，每次0.1 ml，且保證每次同一部位進針，持續(xù)給藥28 d。

1.2.3 小鼠模型評估 在小鼠造模期間，密切觀察小鼠活動情況、精神狀況、皮膚毛發(fā)生長、毛發(fā)光澤度、皮膚彈性、厚度及表皮毛細血管充盈度等情況。造模給藥第28天，于正常組隨機選取1只，模型組隨機選取3只小鼠頸椎脫臼處死，通過肉眼觀察表皮情況與剪取背部皮膚與肺組織切片做HE染色、免疫組織化學的方法，評估硬皮病小鼠模型是否制作成功。

1.2.4 給藥方法 造模給藥28 d后，開始給予模型組小鼠灌胃給藥，持續(xù)灌胃28 d，給藥劑量按成人每日常規(guī)服藥量換算而成。WHT組、潑尼松組、WHT+潑尼松組分別灌服相應藥物，正常組、對照組每天灌服等量生理鹽水，每天1次。以上各組小鼠均在相同環(huán)境下常規(guī)飼養(yǎng)，自由進食，密切觀察小鼠生命體征及活動情況，于灌胃給藥28 d后處死。

1.2.5 標本采集與保存 處死小鼠前采用摘除眼球取血采集血清，-20℃保存?zhèn)溆?；待取血完畢后，處死小鼠，剪下病變區(qū)與正常區(qū)皮膚，分別放入提前標記好相應編號的標本盒中，置于4%多聚甲醛中及時固定，待后期常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片進行病理學檢測及免疫組織化學檢測；將小鼠皮膚取下并固定好后，立即剪開胸部皮膚，逐層分離肌層剪斷肋骨完整分離出肺組織，取左肺下葉一部分組織放入提前標記好的相應標本盒中，浸泡于4%多聚甲醛中及時固定，待后期常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片進行HE染色觀察肺組織形態(tài)學改變。

1.2.6 實驗室指標檢測 皮膚與肺組織病理學檢測：將造模的小鼠皮膚與肺組織取下后，采用HE染色評估是否造模成功；后期予模型小鼠給藥治療后，采集到的皮膚通過HE染色與Masson染色，觀察皮膚組織中纖維組織增生情況，確定其病理改變；皮膚與血液中TGF-β1、MCP-1的表達：將所采集的小鼠血清采用ELISA檢測兩項指標，采用免疫組化方法檢測皮膚組織中二者的表達。

2 結果

2.1 造模后皮膚與肺組織HE染色 如圖1A所示，模型組小鼠皮膚HE染色可見皮損處真皮層明顯增厚，且在真皮層內(nèi)出現(xiàn)了膠原纖維明顯增生、膨大、排列緊密、均質(zhì)化等改變；真皮下血管增粗，管腔狹窄，血管壁明顯增厚，有些甚至出現(xiàn)堵塞；皮下毛囊等附屬器明顯減少，脂肪層顯著變?。徊橛休^多炎癥細胞浸潤的現(xiàn)象。PBS組小鼠皮膚(圖1B)組織學上基本正常，未出現(xiàn)上述變化。如圖1C所示，模型組小鼠肺組織HE染色可見肺組織結構紊亂，部分肺泡消失；肺泡間隔明顯增厚；肺間質(zhì)及肺泡腔內(nèi)見大量炎性細胞浸潤，且伴有大量膠原纖維沉積；肺間質(zhì)內(nèi)小血管壁增厚甚至閉塞。PBS組小鼠肺(圖1D)組織學上基本正常，未出現(xiàn)上述變化。由此我們可證實動物模型制造成功。

2.2 治療后皮膚組織HE染色 經(jīng)治療后，與同期灌服生理鹽水對照組(圖2D)小鼠相比，WHT治療組療效尚可，真皮層稍變薄，膠原纖維束排列較疏松，炎性細胞浸潤略有緩解，皮下附屬器稍有增多，且部分微血管管腔有些許增大、排列較均勻(圖2A)；潑尼松治療組療效較WHT組稍明顯，真皮層變薄，皮下脂肪層增厚，皮下附屬器增多(圖2B)；WHT+潑尼松治療組療效顯著，表皮層毛孔凹陷部位較對照組增多，真皮層膠原纖維增生情況明顯改善，且膠原纖維束排列疏松，均勻分布著毛囊，汗腺等皮下附屬器，毛囊萎縮與微血管堵塞情況均有所好轉(zhuǎn)，皮下脂肪層較對照組明顯增厚(圖2C)。

2.3 治療后肺組織HE染色 經(jīng)治療后，與同期灌服生理鹽水對照組(圖3D)小鼠相比，WHT治療組肺組織結構紊亂程度較對照組緩解，肺泡間隔增厚程度較對照組有所減輕，部分肺泡壁變薄，且炎性細胞浸潤略有緩解(圖3A)；潑尼松治療組肺泡壁明顯變薄，纖維增生情況明顯改善，見少許炎性細胞浸潤，血管管腔增大(圖3B)；WHT+潑尼松治療組療效顯著，肺泡壁較對照組變薄，肺泡腔明顯變大，但分布不均勻，炎性細胞浸潤程度較對照組明顯好轉(zhuǎn)(圖3C)。

2.4 治療后皮膚組織Masson染色結果 經(jīng)治療后，與同期灌服生理鹽水對照組(圖4D)小鼠相比，WHT治療組療效尚可，真皮層膠原纖維增生程度有所減輕，膠原纖維束排列較疏松，炎性細胞浸潤略有緩解，皮下附屬器稍有增多，脂肪層較對照組略有增厚(圖4A)；潑尼松治療組真皮層膠原纖維增生情況改善，皮下附屬器稍增多，脂肪層增厚不明顯(圖4B)；WHT+潑尼松治療組療效顯著(圖4C)，真皮層膠原纖維增生情況明顯改善，且膠原纖維束排列疏松，均勻分布毛囊，汗腺等皮下附屬器，毛囊萎縮與微血管堵塞情況均有所好轉(zhuǎn)，皮下脂肪層較對照組明顯增厚，更接近正常皮膚(圖4E)。

2.5 TGF-β1、MCP-1免疫組織化學染色結果 用PBS代替一抗做陰性對照，在光鏡下觀察，每組隨機選取2張切片，每張切片隨機選取5個不同的視野，陽性結果為淡黃到深棕色細顆粒狀，陰性結果為不著色，根據(jù)如下標準計分：①細胞無著色記0分，棕黃色或淡黃色著色記1分，深棕色或棕褐色著色記2分；②無陽性細胞著色記0分，陽性細胞著色比例<25%記1分，25%～50%記2分，50%～75%記3分，>75%記4分；①②乘積為最后得分：0分為(-)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為陽性(++)，>4分為強陽性(+++)。

2.5.1 TGF-β1免疫組化染色結果 光鏡下可觀察到TGF-β1陽性表達位于表皮層、皮下附屬器、血管內(nèi)皮層、基底層。正常皮膚組織的表皮層和血管內(nèi)皮層表達弱陽性，計分1分(見圖5E)；在模型對照組皮膚組織的表皮層、皮下附屬器、血管內(nèi)皮層和基底細胞層呈強陽性表達，計分8分(見圖5D)；WHT組皮膚在表皮層、血管內(nèi)皮層、毛囊、汗腺內(nèi)表達信號較模型對照組稍弱，計分6分(見圖5A)；潑尼松組皮膚較模型對照組表達減弱，計分4分(見圖5B)；WHT+潑尼松組皮膚較模型對照組均明顯減弱，且較WHT組與潑尼松組均減弱更明顯，計分2分(見圖5C)；每組皮膚PBS代替一抗的對照皮膚組織上表達均顯示陰性，計分0分(見圖5a～e)。

2.5.2 MCP-1免疫組化染色結果 光鏡下可觀察到MCP-1表達主要集中于血管內(nèi)皮層、膠原層、皮下附屬器內(nèi)，基質(zhì)層與脂肪層幾乎無表達。正常組皮膚在膠原層與血管內(nèi)皮層均弱陽性表達，在基質(zhì)層表達陰性，計分0分(見圖6E)；模型對照組皮膚在膠原層、血管內(nèi)皮層與皮下附屬器內(nèi)表達強陽性，計分8分，在基質(zhì)層表達陰性，計分0分(見圖6D)；WHT組皮膚在膠原層與皮下附屬器內(nèi)表達較對照組減弱，計分4分，基質(zhì)層表達陰性，計分0分(見圖6A)；潑尼松組皮膚在血管內(nèi)皮層表達陽性，計分3分，在膠原層表達弱陽性，計分2分，較模型對照組均減弱(見圖6B)；WHT+潑尼松組皮膚在膠原層與血管內(nèi)皮層表達較模型對照組明顯減弱，計分2分，且比WHT組與潑尼松組相比均減弱更明顯(見圖6C)；每組皮膚PBS代替一抗的對照皮膚組織上表達均顯示陰性，計分0分(見圖6a～e)。

2.6 血清中TGF-β1、MCP-1的含量 根據(jù)酶標儀所測得的OD值計算出各組小鼠血清中TGF-β1、MCP-1的濃度(見表1)，結果顯示在模型組中TGF-β1與MCP-1的濃度較正常組均顯著升高(P<0.01)；其中TGF-β1含量在各治療組較模型組均顯著降低(P<0.05)，尤以WHT+潑尼松組降低更為明顯(P<0.01)，且在正常組中僅少量分泌TGF-β1；MCP-1含量在各治療組較模型組均降低(P<0.05)，尤以WHT+潑尼松組降低最為明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

圖1 造模后小鼠皮膚與肺HE染色(×4)Fig.1 Mice skin and lung HE staining after modeling(×4)Note: A.The skin tissue of BIS models;B.The skin tissue of PBS mice;C. The pulmonary tissue of BIS models;D.The pulmonary tissue of PBS mice.

圖2 灌胃治療后各組皮膚HE染色(×10)Fig.2 Treatment groups′ skin of HE staining after gavage(×10)Note: A.WHT group;B.Prednisone group;C.WHT+prednisone group;D.Saline group.

圖3 灌胃治療后各組肺組織HE染色(×10)Fig.3 Treatment groups′ lung tissue of HE staining after gavage(×10)Note: A.WHT group;B.Prednisone group;C.WHT+prednisone group;D.Saline group.

圖4 灌胃治療后各組皮膚Masson染色(×4)Fig.4 Treatment groups′skin of Masson staining after gavage(×4)Note: A.WHT group;B.Prednisone group;C.WHT+prednisone group;D.Models group;E.Normal group.

圖5 治療后各組皮膚TGF-β1免疫組化結果(×10)Fig.5 Skin′ immunohistochemical results of TGF-β1 after treat ment(×10)

表1 ELISA檢測血清中TGF-β1、MCP-1含量

Tab.1 ELISA detect TGF-β1，MCP-1 content in serum

GroupsnTGF?β1(ng/L)MCP?1(ng/L)WHTgroup9348±0363)17959±17323)Prednisonegroup9288±0213)16975±16433)WHT+Prednisonegroup9194±0082)14684±13212)Modelgroup9685±0211)24070±15521)Normalgroup4068±0027412±567

Note：Compared with normal group,1)P<0.01;compared with model group,2)P<0.01,3)P<0.05.

圖7 ELISA檢測血清中TGF-β1、MCP-1含量Fig.7 ELISA detect TGF-β1,MCP-1 content in serumNote: 1.WHT group;2.Prednisone group;3.WHT+Prednisone group;4.Model group;5.Normal group.

3 討論

SSc皮膚受損增厚變硬是SSc的基本病變，幾乎所有SSc患者均會出現(xiàn)不同程度皮膚受損，皮膚硬化嚴重時關節(jié)活動受限，嚴重降低生活質(zhì)量；對SSc生存率調(diào)查研究[4]結果顯示，SSc的5年死亡率平均為40%，顯著高于乳腺癌和前列腺癌的15%。SSc的發(fā)病機理至今尚未十分明確，目前推斷可能與B細胞失衡和T細胞不恰當激活有關[5]，也可能是在上述多種因素的共同作用下產(chǎn)生抗炎反應并刺激免疫系統(tǒng)激活，從而產(chǎn)生多種細胞因子與免疫介質(zhì)，這些細胞因子與免疫介質(zhì)刺激纖維母細胞，生成大量膠原及細胞外基質(zhì)(ECM)，沉積在皮下組織與結締組織中，并損傷血管內(nèi)皮細胞，造成血管壁增厚，管腔狹窄甚至閉塞。

其中關于這方面的細胞因子有很多種，比較重要的如TGF-β1、MCP-1。TGF-β1是體內(nèi)TGF同種亞型中促纖維化發(fā)生較強的細胞因子之一，也是各種組織發(fā)生纖維化的重要介質(zhì)之一，其通過信號通路Smad2和Smad3發(fā)揮相關作用，激活下游致病因子，調(diào)節(jié)組織纖維化的發(fā)生過程[6]，有體外試驗證實TGF-β1可加速成纖維細胞的增殖，對SSc患者組織進行基因檢測結果提示TGF-β1所依賴的基因過度表達[7]。MCP是一種能夠?qū)Π准毎鹛禺愋曰瘜W趨化作用的細胞因子，其包括4個亞族，它們主要通過協(xié)同作用對中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞等起趨化作用[8]，Mariagrazia等[9]研究表明，MCP-1促進了免疫細胞初期和晚期的纖維化發(fā)展，在動物實驗研究中也顯示，在SSc發(fā)病初期，所有這些細胞因子都參與了免疫調(diào)節(jié)，且MCP-1持續(xù)保持著高表達狀態(tài)，表明MCP-1在本病的發(fā)生發(fā)展過程中作用明顯，MCP-1在激活淋巴細胞和輔助T2細胞有著十分重要的作用，驅(qū)使機體發(fā)生免疫應答反應和與之相對應的促纖維化反應。

因SSc的病程長，病情重，常累及多臟腑器官，目前難以根治，其發(fā)病率與死亡率高，患者生活質(zhì)量下降，而病因病機尚不清楚，故尚無特效治療藥，目前均是采用抗炎、抗纖維化、擴管、免疫調(diào)節(jié)等方法來治療，并不能從根本上解決問題。中醫(yī)關于該疾病的病因病機則有多種說法，諸如六淫學說、臟腑學說、絡病學說等，在此我們認為陽虛寒凝、痰瘀互結、血脈不通為其主要病機。而中醫(yī)講究辯證施治，“痹癥”證屬本虛標實，氣血虧虛為本，外邪侵襲為標。治以溫陽固本、養(yǎng)血益氣、祛濕散寒、活血通絡。本實驗所選用的“溫陽活血通絡方”正是鑒于該治法，也是基于在臨床上的廣泛應用，是在《傷寒論》經(jīng)典方“當歸四逆湯”基礎上加減而成，其功效為溫經(jīng)散寒、溫陽通脈、養(yǎng)血活血。采用該復方對SSc小鼠模型進行治療，探求該復方對SSc的作用機制，為臨床治療SSc提供實驗依據(jù)。

從皮膚與肺組織病理學TGF-β1與MCP-1的表達結果可以看出，模型鼠皮損處真皮層明顯增厚，膠原纖維明顯增生、膨大、排列緊密；真皮下血管增粗，管腔狹窄，血管壁明顯增厚，有些甚至出現(xiàn)堵塞；皮下毛囊等附屬器明顯減少，脂肪層顯著變??；并伴有較多炎癥細胞浸潤的現(xiàn)象。模型鼠肺組織結構紊亂，肺泡間隔明顯增厚，且伴有大量膠原纖維沉積；肺間質(zhì)內(nèi)小血管壁增厚甚至閉塞。免疫組化染色結果顯示TGF-β1、MCP-1在皮損處均呈強陽性表達，與文獻結果一致[10]，表明模型復制成功。給藥后，各治療組均能不同程度地改善皮膚與肺的病理學特征，且能調(diào)節(jié)TGF-β1、MCP-1在皮膚組織上的表達，尤以WHT+潑尼松組變化明顯，說明WHT+潑尼松聯(lián)合治療早期SSc療效好。

綜上所述，溫陽活血通絡方對博來霉素引起的SSc小鼠皮膚及肺組織纖維化改變有一定的治療作用，其可能通過抑制體內(nèi)TGF-β1與MCP-1的表達來控制SSc皮膚纖維化進程，且在SSc的臨床治療上宜聯(lián)合醋酸潑尼松，能達到較為理想的療效。

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[收稿2016-01-25 修回2016-04-22]

(編輯 許四平)

Evaluation of influence of Wenyang Huoxue Tongluo medicine on expression of TGF-β1 and MCP-1 in mice with bleomycin-induced scleroderma

TAN Li-Ping，YOU Jia-Rui，XIANG Fang-Hua，CHEN An-Ping,XIA Yan,FENG Jia,CAI Jie,YUAN Lin,SU Lin-Chong,HUANG Qin,XIANG Yan.

Provincial Key Laboratory of Occurrence and Intervention of Rheumatic Diseases of Huibei University for Nationalities,Enshi 445000,China

Objective:To observe the influence of Wenyang Huoxue Tongluo(WHT) medicine in mice with bleomycin-induced scleroderma(BIS) of TGF-β 1 and MCP-1 levels.Methods: Bleomycin was injected into the subcutaneous tissue of mice to establish BIS models.The BIS mice were fed with WHT,prednisone,WHT plus prednisone or saline only as control for 28 days.The pathological changes in the skin and lung tissue of mice were evaluated with HE staining and Masson staining.The level of TGF-β1 and MCP-1 in serum was detected with ELISA,as well as which in the skin tissue was detected with immunohistochemistry.Results: ①The location and amount of TGF- β1and MCP-1 in skin and lung tissue were different in BIS mice.Expression of TGF-β1 and MCP-1 in BIC mice skin tissue were significantly decreased in WHT or WHT+prednisone treated groups compared to no-treated ones (P<0.05,respectively),especially in WHT+prednisone one.②In serum of BIS mice,TGF-β1 and MCP-1 increased significantly than in normal control (P<0.01).And after treated with WHT or WHT+prednisone,the level of TGF-β1 and MCP-1 were significantly decreased (P<0.05) compared with no-treated one,especially in WHT+prednisone one.Conclusion: WHT can improve the pathological changes in skin and pulmonary tissue of BIS mice,which might partially result from that WHT down-regulate TGF-β1 and MCP-1 in serum and skin tissue from BIS mice.

Bleomycin-incuced scleroderma;Wenyang Huoxue Tongluo medicine(WHT); Transforming growth factor-β1; Monocyte chemoattractant protein-1

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.11.012

①本文為國家自然科學基金項目(81260458)和湖北省科技廳項目(2012FFA061)。

譚利平(1986年-)，女，碩士，醫(yī)師，主要從事風濕免疫學方面研究。

及指導教師：向 陽(1961年-)，男，博士，教授，主任醫(yī)師，院長，碩士生導師，主要從事臨床、教學、科研等方面工作。

R259

A

1000-484X(2016)11-1621-06

②恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院，恩施 445000。

③荊門市第二人民醫(yī)院，荊門 448000。

④湖北民族學院附屬民大醫(yī)院，恩施 445000。

⑤武漢市武昌醫(yī)院，武漢 430063。