邱懷娜 查賀飛 曲佳樂 王 梅 李 璐 齊艷偉 黃 俊 楊 權(quán)

(廣州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室，廣州醫(yī)科大學(xué)中法霍夫曼免疫研究所，廣州511436)

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激活核受體PXR促進(jìn)小鼠GM-CSF來源的樹突狀細(xì)胞的分化①

邱懷娜 查賀飛 曲佳樂 王 梅 李 璐 齊艷偉 黃 俊 楊 權(quán)

(廣州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室，廣州醫(yī)科大學(xué)中法霍夫曼免疫研究所，廣州511436)

目的：研究孕烷受體(PXR)激動(dòng)劑pregnane-16α-carbonitrile(PCN)對(duì)小鼠GM-CSF來源樹突狀細(xì)胞(DC)分化的影響。方法：建立小鼠DC體外GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)分化體系，并用PCN對(duì)體系進(jìn)行處理。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD11c+DC的比例；ELISA和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DC產(chǎn)生細(xì)胞因子IFN-γ、IL-1、IL-2和IL-12的量；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time RT-PCR)檢測(cè)調(diào)控DC分化相關(guān)信號(hào)通路基因的表達(dá)。結(jié)果：成功建立小鼠DC體外分化體系；PCN處理能顯著促進(jìn)DC分化，且DC產(chǎn)生的細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2的量顯著增多；Real-time RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，PCN處理組中調(diào)控DC分化的Notch和Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因HES1、WISP1和WISP2的表達(dá)量顯著上升。結(jié)論：PXR激動(dòng)劑PCN能顯著促進(jìn)小鼠GM-CSF來源的DC的分化及其IFN-γ和IL-2的產(chǎn)量，并且這種促進(jìn)作用可能是通過Notch和Wnt信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)控。

樹突狀細(xì)胞；分化；Pregnane X Receptor；Notch信號(hào)通路；Wnt信號(hào)通路

樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell,DC)是由Steinman 于1973年首次在小鼠脾臟中發(fā)現(xiàn)，因其具有特殊的星形形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)而得名[1，2]。DC是機(jī)體內(nèi)功能最強(qiáng)大的專職抗原提呈細(xì)胞，能通過模式識(shí)別受體識(shí)別外來抗原，并遷移到外周淋巴器官將經(jīng)其加工后的抗原提呈給T細(xì)胞，從而激活初始T細(xì)胞，啟動(dòng)抗原特異性的獲得性免疫反應(yīng)[3，4]?？梢哉fDC是免疫系統(tǒng)的多能調(diào)控者，是連接固有免疫和獲得性免疫反應(yīng)的重要因子[5]。研究已證實(shí)，DC的分化受復(fù)雜的信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)調(diào)控，其中包括細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子等[6，7]。近期的研究表明，脂質(zhì)信號(hào)通路在DC分化過程中起到重要的作用，核受體(Nuc-lear receptor)調(diào)控的脂類物質(zhì)與DC分化調(diào)控基因表達(dá)的變化相關(guān)[8]。孕烷受體(Pregnane X receptor,PXR)是核受體超家族中的一員，高表達(dá)于肝臟和腸道，低表達(dá)于許多其他組織，調(diào)節(jié)葡萄糖、脂質(zhì)和膽固醇眾多物質(zhì)的體內(nèi)代謝平衡[9]。PXR的激活能誘導(dǎo)藥物代謝酶和相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)，在藥物代謝、肝臟解毒、腸道炎癥以及腫瘤耐藥性方面具有重要作用[10]。PXR同時(shí)表達(dá)于免疫細(xì)胞中[11]，并具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎癥作用，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的增殖和功能[12-14]。但是目前PXR在DC分化過程中的作用尚無報(bào)道。為此，本研究通過使用PXR激動(dòng)劑PCN處理DC[15]，檢測(cè)誘導(dǎo)體系中CD11c+DC的比例、細(xì)胞因子分泌量以及調(diào)控DC分化的信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)，闡述PXR對(duì)小鼠DC分化的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 6～8周SPF級(jí)雌性C57BL/6小鼠，由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。PBS緩沖液、RPMI1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)、β-巰基乙醇和TRIzol購自Invitrogen公司；紅細(xì)胞裂解液、青霉素、鏈霉素、氯仿、異丙醇和乙醇購自生工生物工程(上海)股份有限公司；小鼠 GM-CSF和IL-4購自Peprotech公司；PCN和LPS購自Sigma公司；PrimeScript? RT reagent Kit和SYBR? Premix Ex TaqTM購自TaKaRa公司；Real-time RT-RCR引物由Invitrogen公司合成；PE-Cy5標(biāo)記的抗小鼠CD11c、PE標(biāo)記的抗小鼠IFN-γ、FITC標(biāo)記的抗小鼠IL-2流式抗體購自eBioscience公司；ELISA試劑盒購自BD公司；倒置生物顯微鏡購自Leica Microsystems公司；CO2培養(yǎng)箱和Nanodrop2000c儀購自Thermofisher scientific公司；FACS Calibur流式細(xì)胞檢測(cè)儀購自Beckman Coulter公司；S1000 PCR儀和CFX96 Real-time PCR儀購自Bio-Rad公司；酶標(biāo)儀購自Promega公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠DC體外分化誘導(dǎo) 將小鼠快速頸椎脫臼處死，于75%的消毒酒精中浸泡5 min，取脛骨和股骨。將脛骨和股骨兩端輕微剪開，用5 ml注射器吸取適量RPMI1640 培養(yǎng)基，插入骨髓腔，將骨髓細(xì)胞完全沖出，得到骨髓細(xì)胞懸液；3 500 r/min離心5 min，棄上清；加入3 ml紅細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞，室溫裂解5 min，加入27 ml PBS緩沖液終止裂解；3 500 r/min離心5 min，棄上清；加入適量RPMI1640 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)；按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算接種孔數(shù)，每孔2×106細(xì)胞，2 ml培養(yǎng)基；按比例加入各種培養(yǎng)因子，使終濃度為：10%胎牛血清(FBS)、1%雙抗(鏈霉素和青霉素)、50 μmol/L 2-巰基乙醇、20 ng/ml GM-CSF和10 ng/ml IL-4；用RPMI1640 培養(yǎng)基將細(xì)胞懸液濃度調(diào)整至1×106cells/ml，混勻，接種培養(yǎng)；每隔3 d更換新鮮培養(yǎng)液：吸棄1.8 ml舊培養(yǎng)液，加入2 ml含各種培養(yǎng)因子的新的完全培養(yǎng)液。

1.2.2 藥物處理DC 分為對(duì)照組、PCN 20 μmol/L處理組、PCN 40 μmol/L處理組。細(xì)胞接種24 h內(nèi)加藥處理細(xì)胞，處理組：加入2 μl溶劑(DMSO)，輕輕混勻；PCN 20 μmol/L處理組：加入2μl的PCN 20 mmol/L儲(chǔ)存液，輕輕混勻；PCN 40 μmol/L處理組：加入2 μl的PCN 40 mmol/L儲(chǔ)存液，輕輕混勻；更換培養(yǎng)液的同時(shí)重新加藥處理細(xì)胞。對(duì)于細(xì)胞因子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，增加LPS刺激細(xì)胞：DC誘導(dǎo)第5天，各實(shí)驗(yàn)組均加入100 ng/ml的LPS處理24 h。

1.2.3 Real-time RT-RCR檢測(cè)基因表達(dá) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，收集相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的2×106個(gè)待檢測(cè)細(xì)胞，提取總的RNA并測(cè)定濃度和純度，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組各取100 ng RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄；使用PrimeScript? RT reagent Kit進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行；使用SYBR? Premix Ex TaqTM進(jìn)行Real-time PCR，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。各檢測(cè)基因引物序列如表1所示，選用β-actin作為內(nèi)參基因。

1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DC表型 細(xì)胞接種12 h，加入PCN對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。DC誘導(dǎo)第3天，更換新鮮的完全培養(yǎng)基，同時(shí)加入相應(yīng)濃度的PCN處理細(xì)胞；DC誘導(dǎo)第6天，收集1×106個(gè)待檢測(cè)細(xì)胞，3 500 r/min離心5 min，棄上清；按說明書用量將適量抗體加入100 μl PBS中，混勻，加入細(xì)胞沉淀中，渦旋震蕩15 s；4℃避光孵育30 min；加入3 ml PBS緩沖液終止染色 ，3 500 r/min離心5 min，棄上清；重復(fù)洗滌細(xì)胞1次；細(xì)胞沉淀中加入500 μl含2%多聚甲醛的PBS緩沖液重懸細(xì)胞，渦旋混勻；流式細(xì)胞儀檢測(cè)，讀取50 000個(gè)細(xì)胞，結(jié)果在CellQuest (Becton Dickinson,Mountain View,CA)軟件上進(jìn)行分析。

表1 Real-time RT-PCR 引物序列

Tab.1 Primers for Real-time RT-PCR detection

GeneForwardprimer(5′?3′)Reverseprimer(5′?3′)Productsize(bp)CYP3A11CACACTTTCCTTCACCCTGCTATCATACGTGGGAGGTGCC110HES1GAGTGCATGAACGAGGTGACCGTTGATCTGGGTCATGCAG109WISP1AGCCTACACTAGTCCCTGGATCTTCCCTGCCTTGATGTGT164WISP2CCAGGAGAATACAGGTGCCAAGGAGTGACAAGGGCAGAAA122β?actinGTGGGAATGGGTCAGAAGGACTTCTCCATGTCGTCCCAGT120

1.2.5 培養(yǎng)上清細(xì)胞因子含量檢測(cè) 細(xì)胞接種12 h，加入PCN對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。DC誘導(dǎo)第3天，更換新鮮的完全培養(yǎng)基，同時(shí)加入相應(yīng)濃度的PCN處理細(xì)胞；DC誘導(dǎo)第5天，加入LPS處理細(xì)胞。LPS處理24 h后，收集待檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清，采用ELISA試劑盒檢測(cè)相應(yīng)細(xì)胞因子的含量，操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線用間接法計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組中相應(yīng)細(xì)胞因子的含量(pg/ml)。

1.2.6 流式胞內(nèi)因子染色 細(xì)胞接種12 h，加入PCN對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。DC誘導(dǎo)第3天，更換新鮮的完全培養(yǎng)基，同時(shí)加入相應(yīng)濃度的PCN處理細(xì)胞；DC誘導(dǎo)第5天，加入LPS處理細(xì)胞。LPS處理24 h后，收集待檢測(cè)細(xì)胞。將細(xì)胞終濃度調(diào)至2×106ml，加入佛波醇-乙酸酯(PMA) 20 ng/ml，離子霉素1 μg/ml，渦旋振蕩混勻。37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育1 h后，加布雷菲德菌素A(BFA)10 μg/ml繼續(xù)孵育4 h。加入2 ml PBS， 4℃、1 860 r/min離心5 min。重復(fù)2次。PBS重懸細(xì)胞，每管加入2 ml 4%的多聚甲醛，充分混合，避光靜置8 min。PBS洗滌，4℃、2 500 r/min離心5 min。每管加入細(xì)胞因子染色液(含Saponin)100 μl，4℃靜置過夜。加入相應(yīng)熒光標(biāo)記抗體各1 μl/每管，充分混勻，4℃避光靜置30 min。細(xì)胞因子染色液(不含Saponin)2 ml，2 500 r/min離心5 min，重復(fù)2次。用細(xì)胞因子染色液重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)，讀取50 000個(gè)細(xì)胞。

2 結(jié)果

2.1 DC分化過程中PXR靶基因的表達(dá) 接種后，收集第0、3、6天的細(xì)胞， Real-time RT-RCR檢測(cè)PXR靶基因CYP3A11的表達(dá)。與第0天相比，誘導(dǎo)培養(yǎng)3 d后的細(xì)胞中，CYP3A11的表達(dá)量顯著上調(diào)(1.2±0.23)與(5.96±0.88)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖1)；與第3天相比，誘導(dǎo)培養(yǎng)6 d后的細(xì)胞中，CYP3A11的表達(dá)量顯著上調(diào)(5.96±0.88)與(14.65±1.4)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，圖1)。說明在小鼠骨髓細(xì)胞向DC分化的過程中，PXR處于激活狀態(tài)，其靶基因表達(dá)在分化過程中表達(dá)顯著上調(diào)。

2.2 PXR激動(dòng)劑PCN促進(jìn)DC的分化 細(xì)胞接種12 h，加入PCN處理細(xì)胞。倒置顯微鏡下觀察，細(xì)胞生長狀態(tài)良好，說明各實(shí)驗(yàn)組濃度藥物未產(chǎn)生細(xì)胞毒作用。收集藥物處理第0天、第3天和第6天的細(xì)胞進(jìn)行Real-time RT-RCR檢測(cè)，結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，PCN 20 μmol/L處理組和PCN 40 μmol/L處理組的細(xì)胞中CYP3A11的表達(dá)在DC分化過程中均顯著上調(diào)(P<0.01，P<0.05，圖2)，說明PCN成功激活了PXR。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)體系中CD11c+DC的比例：對(duì)照組CD11c+DC細(xì)胞的比例為(49.48±4.1)%；PCN 20 μmol/L處理組CD11c+DC細(xì)胞的比例為(59.2±7.86)%；PCN40 μmol/L處理組CD11c+DC細(xì)胞的比例為(71.25±4.2)%(圖2)。結(jié)果表明，PXR激動(dòng)劑PCN處理能顯著促進(jìn)培養(yǎng)體系中DC的分化，提高CD11c+DC細(xì)胞的比例，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，并且這種促進(jìn)作用具有濃度依賴性。

2.3 PXR激動(dòng)劑PCN促進(jìn)DC產(chǎn)生細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2 ELISA檢測(cè)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，PCN 40 μmol/L處理組DC培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2的含量顯著上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01、P<0.05，圖3A)；而細(xì)胞因子IL-1和IL-12的含量在對(duì)照組和PCN 40 μmol/L處理組中無明顯變化，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，圖3A)。流式胞內(nèi)因子染色檢測(cè)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，PCN 40 μmol/L處理組的CD11c+DC細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2的比例顯著上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01、P<0.05，圖3B)。上述結(jié)果表明，PXR激動(dòng)劑PCN處理能顯著促進(jìn)培養(yǎng)體系中的CD11c+DC細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2。

圖1 Real-time RT-RCR檢測(cè)DC分化過程中CYP3A11的表達(dá)Fig.1 Real-time RT-RCR detecting expression of CYP3A11 gene during DC differentiationNote: * .P<0.05 vs 0 d;**.P<0.01 vs 3 d.

圖2 PCN處理后培養(yǎng)體系中CYP3A11的表達(dá)和CD11c+ DC細(xì)胞的比例Fig.2 Expression of CYP3A11 gene and proportion of CD11c+ DC were measured after PCN treatmentNote: *.P<0.05 vs control group;**.P<0.01 vs control group.

圖3 ELISA和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-1、IL-2和IL-12的含量Fig.3 Protein levels of IFN-γ,IL-1,IL-2 and IL-12 were measured by ELISA and flow cytometryNote: *.P<0.05 vs control group;**.P<0.01 vs control group;NS.No significance.

圖4 Real-time RT-RCR檢測(cè)PCN處理的DC中HES1、WISP1和WISP2的表達(dá)Fig.4 Real-time RT-RCR detecting expression of HES1,WISP1 and WISP2 in DC treated with PCNNote: *.P<0.05 vs control group.

2.4 PXR激動(dòng)劑PCN促進(jìn)培養(yǎng)體系中HES1、WISP1和WISP2的表達(dá) PCN處理24 h后，Real-time RT-RCR檢測(cè)調(diào)控DC分化的Notch 和Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因HES1、WISP1和WISP2的表達(dá)。與對(duì)照組相比，PCN 20 μmol/L處理組和PCN 40 μmol/L處理組細(xì)胞中HES1、WISP1和WISP2的表達(dá)顯著上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖4)。結(jié)果表明， PCN處理能顯著促進(jìn)細(xì)胞中Notch 和Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)，說明PCN對(duì)DC分化的調(diào)控作用可能與Notch 和Wnt信號(hào)通路的激活有關(guān)。

3 討論

DC是介導(dǎo)固有免疫反應(yīng)和啟動(dòng)獲得性免疫反應(yīng)的重要免疫細(xì)胞，能識(shí)別、加工和提呈外來抗原，同時(shí)維持免疫耐受，保證在正常生理情況下效應(yīng)T細(xì)胞不會(huì)攻擊自身正常細(xì)胞或組織產(chǎn)生的抗原[5,16]。研究已證實(shí)多種信號(hào)通路在DC分化過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用，其中包括Wnt、Notch、NF-κB以及JAK/STAT等[17-19]。PXR是核受體超家族中的一員，能被多種激動(dòng)劑激活，從而對(duì)其功能進(jìn)行研究。目前對(duì)PXR的研究主要集中在藥物代謝、肝臟脂肪病變、腸道炎癥、肥胖、心血管疾病以及腫瘤藥物反應(yīng)等領(lǐng)域[10,20，21]，其在免疫系統(tǒng)中的調(diào)節(jié)作用研究甚少，對(duì)DC分化的影響尚未見相關(guān)報(bào)道。

Zhong等[22]報(bào)道核受體LXR(Liver X receptor)激動(dòng)劑GW3965能通過抑制STAT3信號(hào)通路的磷酸化從而促進(jìn)DC的分化[23]。更有研究報(bào)道PCN能誘導(dǎo)抗原提呈細(xì)胞中MHCⅡ基因家族成員RT1.B的表達(dá)。說明核受體家族在樹突狀細(xì)胞的分化過程中可能具有很重要的調(diào)控作用。本研究首先成功建立了小鼠骨髓細(xì)胞向DC分化的體外誘導(dǎo)體系，并用PXR激動(dòng)劑PCN處理DC。藥物處理后細(xì)胞生長狀態(tài)良好，說明本研究使用的藥物濃度并未產(chǎn)生細(xì)胞毒作用。本研究發(fā)現(xiàn)PXR低表達(dá)于小鼠骨髓細(xì)胞中(結(jié)果省略)，并且在DC分化過程中PXR靶基因CYP3A11表達(dá)顯著上調(diào)，說明在小鼠骨髓細(xì)胞向DC分化的過程中，PXR處于激活狀態(tài)，其靶基因CYP3A11對(duì)于DC分化可能是一個(gè)必需的有利因子。隨后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，誘導(dǎo)體系經(jīng)PCN處理后，PXR靶基因CYP3A11表達(dá)上調(diào)，體系中CD11c+DC的比例顯著上升，并且這種上調(diào)作用具有藥物濃度依賴性。本研究結(jié)果首次證實(shí)了核受體家族中的另一成員PXR能調(diào)控小鼠GM-CSF來源的DC的分化。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PCN處理能顯著促進(jìn)DC功能相關(guān)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2的產(chǎn)量。IFN-γ和IL-2是DC分泌的重要細(xì)胞因子，可上調(diào)DC 中MHC Ⅰ類和Ⅱ類分子的表達(dá)，促進(jìn)DC將抗原肽提呈給初始T細(xì)胞，促進(jìn)T、B細(xì)胞增殖和分化，啟動(dòng)獲得性免疫應(yīng)答反應(yīng)[24，25]，同時(shí)誘導(dǎo)CTL和NK細(xì)胞的殺傷活性，在抗病毒和抗腫瘤免疫反應(yīng)中具有重要作用[26]。有研究表明，PXR可調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)[13]。從本研究結(jié)果推測(cè)，PXR激動(dòng)劑PCN通過促進(jìn)誘導(dǎo)體系中DC產(chǎn)生IFN-γ和IL-2，而分泌的IFN-γ和IL-2可幫助DC激活多種免疫細(xì)胞，從而調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)反應(yīng)活性。

本研究結(jié)果顯示，PCN處理DC后，調(diào)控DC分化的Notch和Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因HES1、WISP1和WISP2表達(dá)顯著上調(diào)，說明Notch和Wnt處于激活狀態(tài)。研究表明，Notch和Wnt信號(hào)通路在對(duì)DC的分化具有重要的調(diào)控作用[27]；Zhou等[17]研究表明在造血祖細(xì)胞中激活Notch信號(hào)通路可促進(jìn)DC的分化，而這種促進(jìn)作用是由Wnt信號(hào)通路介導(dǎo)的。Becker等[28]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)激活Wnt信號(hào)通路能促進(jìn)DC的產(chǎn)生。由此推測(cè)，PXR激動(dòng)劑PCN可能是通過激活Notch和Wnt信號(hào)通路從而促進(jìn)DC的分化。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示核受體超家族成員PXR的激動(dòng)劑PCN能顯著促進(jìn)小鼠GM-CSF來源DC的分化，促進(jìn)其產(chǎn)生細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2，并且這種促進(jìn)作用可能是通過激活Notch和Wnt信號(hào)通路的活性進(jìn)行調(diào)控的。本研究結(jié)果為闡明DC分化機(jī)制，完善調(diào)控DC分化信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)提供了新的線索；為PXR在免疫系統(tǒng)中的調(diào)控作用提供了新的理論依據(jù)；為疾病免疫治療方案制定及新藥研發(fā)提供了新的思路。

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[收稿2016-04-01 修回2016-05-16]

(編輯 倪 鵬)

Activation of PXR promotes differentiation of mouse GM-CSF derived dendritic cells

QIU Huai-Na,ZHA He-Fei,QU Jia-Le,WANG Mei,LI Lu,QI Yan-Wei,HUANG Jun,YANG Quan.

Department of Pathogen Biology & Immunology,School of Basic Sciences,Guangzhou Medical University;Sino-French Hoffmann Institute,Guangzhou Medical University,Guangzhou 511436,China

Objective:To investigate the influence of Pregnane X Receptor (PXR) agonist pregnane-16α-carbonitrile (PCN) on mouse GM-CSF derived dendritic cell (DC) differentiation.Methods: Mouse DC differentiation was induced by GM-CSF and IL-4 in vitro,and treated with PCN.The proportion of CD11c+DC was measured by flow cytometry;the production of Interferon-γ (IFN-γ),Interleukin-1 (IL-1),Interleukin-2 (IL-2) and Interleukin-12 (IL-12) of DC were analyzed by ELISA and flow cytometry;Real-time RT-RCR was used to detect the expression of genes involved in the signaling pathway which regulated DC differentiation.Results: Mouse DC was successfully induced by GM-CSF and IL-4 in vitro.Treatment of PCN significantly increased the percentage of CD11c+DC and the protein levels of IFN-γ and IL-2 produced by DC were notably enhanced.Real-time RT-RCR results indicated that the expression of Notch and Wnt signaling pathway related genes HES1,WISP1 and WISP2 were up-regulated in PCN treatment group when compared to control group.Conclusion: The PXR agonist PCN can promote the differentiation of mouse GM-CSF derived DC and increased the production of IFN-γ and IL-2 by DC,and Notch and Wnt signaling pathway may play a pivotal role in this process.

Dendritic cells;Differentiation;Pregnane X Receptor;Notch signaling pathway;Wnt signaling pathway

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.11.006

①本文受廣州醫(yī)科大學(xué)科學(xué)科研項(xiàng)目資助(2015C01)。

邱懷娜(1983年-)，女，博士，講師，主要從事腫瘤分子免疫方面的研究，E-mail：autumn611@163.com。

及指導(dǎo)教師：楊 權(quán)(1985年-)，男，博士，講師，主要從事腫瘤分子免疫方面的研究，E-mail：yquangy20 15@163.com。

R392.12 R392.11

A

1000-484X(2016)11-1593-05