汪秀月

（安徽省阜陽市食品藥品檢驗檢測中心，安徽 阜陽 236015）

高效液相色譜法測定骨刺片中柚皮苷含量

汪秀月

（安徽省阜陽市食品藥品檢驗檢測中心，安徽 阜陽 236015）

目的 建立測定骨刺片中柚皮苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱為Waters Fire C18柱（250mm×4．6mm，5 m），流動相為乙腈－水（20∶80），檢測波長為283 nm，流速為1．0 m L／min，柱溫為30℃。結(jié)果 柚皮苷進(jìn)樣量在0．280 32～2．803 2 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r＝1．000 0，n＝5），平均加樣回收率為99．15%，RSD為1．65%（n＝9）。結(jié)論 該方法簡便快速，重復(fù)性好，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于骨刺片中柚皮苷含量的測定。

骨刺片；高效液相色譜法；柚皮苷

骨刺片是由昆布、骨碎補(bǔ)、黨參、桂枝、威靈仙、牡蠣（煅）、杜仲葉、雞血藤、附片、川烏(制)、草烏(制)、延胡索（制）、白芍等15味中藥組方的中藥成方制劑，具有散風(fēng)邪、祛寒濕、舒筋活血、通絡(luò)止痛的功效，臨床用于治療頸椎、胸椎、腰椎、跟骨等骨關(guān)節(jié)增生性疾病，對風(fēng)濕、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎有一定療效[1]。其收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)，原標(biāo)準(zhǔn)只對馬錢子進(jìn)行薄層鑒別，未對骨碎補(bǔ)進(jìn)行質(zhì)量控制[2]。為了有效控制骨刺片的質(zhì)量，參考文獻(xiàn)[3－8]并反復(fù)試驗，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法對方中骨碎補(bǔ)的主要成分柚皮苷進(jìn)行了定量研究，該方法結(jié)果準(zhǔn)確，可作為該制劑中骨碎補(bǔ)的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Waters e2695型高效液相色譜儀，Waters 2998型二極管陣列檢測器，Empowers色譜工作站（Waters公司）；HS3120型超聲波處理儀；Mettler AB265S（0．01 mg）電子天平；Sartorius BS124S（0．1 mg）電子天平。柚皮苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為 110722－200613）；甲醇、乙腈為色譜純；水為重蒸水；骨刺片（南京同仁堂藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號為111007，120711，120607）。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Waters Fire C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流動相：乙腈－水（20∶80）；檢測波長：283 nm；流速：1．0mL／min；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：30℃。理論板數(shù)按柚皮苷峰計算應(yīng)不低于4 000，陰性無干擾。色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的柚皮苷對照品17．52mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液；精密量取對照品貯備液5mL，置25m L容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品20片，精密稱定，研細(xì)混勻，取約0．5 g，精密稱定，置25mL容量瓶中，加甲醇約20 m L，超聲處理30 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0．45μm微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液。按處方及制法，制成缺骨碎補(bǔ)的陰性對照樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取對照品溶液（質(zhì)量濃度為0．140 16 g／L）2，5，10，15，20μL，進(jìn)樣測定，以柚皮苷進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝1 651 178．08X－73 162．74，r＝1．000 0（n＝5）。結(jié)果表明，柚皮苷進(jìn)樣量在0．280 32～2．803 2μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為0．4%（n＝5），表明儀器的精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，按擬訂色譜條件每間隔2 h進(jìn)樣1次，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果峰面積的RSD為1．1%（n＝5），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：精密稱取同一批樣品，按2．2項下方法制備供試品溶液6份，分別進(jìn)樣測定含量。結(jié)果每片樣品中含柚皮苷0．354mg，RSD為1．1%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：取同一批骨刺片（批號為111007）研細(xì)混勻后，取約0．3 g，精密稱定，取6份，分別精密加入上述對照品貯備液2．0 m L，按2．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 柚皮苷加樣回收試驗結(jié)果（n＝6）

2．4 樣品含量測定

取上述3批骨刺片樣品，按擬訂方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，計算柚皮苷的含量。結(jié)果批號為111007，120711，120607的樣品中，柚皮苷的含量分別為每片0．354，0．375，0．328mg。

3 討論

本研究中參考2010年版《中國藥典（一部）》[1]“三七傷藥片”中骨碎補(bǔ)所含柚皮苷的測定方法，在設(shè)計樣品提取過程時，同時比較了加熱回流和超聲提取對測定結(jié)果的影響，未發(fā)現(xiàn)較大差異，且回流提取時間短，效果理想。同時比較了使用甲醇、80%甲醇和50%甲醇處理樣品的情況，結(jié)果使用甲醇提取效果較好，故在本研究中使用甲醇作為提取溶劑，改良使用25mL容量瓶，直接定容減少了錐形瓶稱量定容造成的誤差。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：451．

[2]WS3－B－3290－98．衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十七冊)[S]．

[3]曹 玲，馮有龍，王亞超，等．骨刺片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 [J]．中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2011，12（3）：191－195．

[4]范 興，楊成梓，曾偉生，等．HPLC法測定燙骨碎補(bǔ)中柚皮苷的含量[J]．海峽藥學(xué)，2013，25（11）：74－76．

[5]李 麗．RP－HPLC法測定橘紅痰咳液中柚皮苷的含量[J]．黑龍江科技信息，2014（6）：81．

[6]姚澤炳，周 瑾．高效液相法測定橘紅片中柚皮苷和橙皮苷的含量[J]．中國藥事，2012，26（11）：1 243－1 245．

[7]李 勁．高效液相色譜法測定骨刺寧膠囊中柚皮苷的含量[J]．中國醫(yī)藥指南，2012，35（10）：448－449．

[8]文才華，涂文升．高效液相色譜法測定平消片中柚皮苷的含量[J]．臨床合理用藥，2012，4(2A）：60－61．

Content Determ ination of Naringin in Guci Tab lets by HPLC

Wang Xiuyue
（Fuyang Institute for Food and Drug Control，F(xiàn)uyang，Anhui，China 236015）

Objective To establish an HPLC method for the content determination of naringin in Guci Tablets．M ethods The chromatographic column was Waters Fire C18column（250 mm×4．6 mm，5μm），the mobile phase was acetonitrile－water（20∶80），the detection wavelength was 283 nm，the flow rate was 1．0 mL／min，the column temperature was 30℃．Results The linear relation was good when the injection volume of naringin was in the range of 0．280 32－2．803 2μg（r＝1．000 0，n＝5）．The average recovery rate was 99．15%，and RSD was 1．65%（n＝9）．Conclusion This method is simple，rapid，has good repeatability，high sensitivity and is reliable，which can be used for the content determination of naringin in Guci Tablets．

Guci Tablets；HPLC；naringin

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)04－0077－02

2015－02－27；

2015－07－01)