王戰(zhàn)偉 趙輝 韓少良

胃癌組織中B7-H1的表達(dá)及臨床意義研究

王戰(zhàn)偉 趙輝 韓少良

目的 檢測(cè)人體胃癌組織中B7-H1的表達(dá)，探討其與患者臨床病理特征的關(guān)系及對(duì)預(yù)后的影響。方法 采用免疫組化染色法檢測(cè)胃癌組織中B7-H1的表達(dá)，分析其在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與患者臨床病理特征之間的關(guān)系，并繪制患者術(shù)后生存曲線，評(píng)價(jià)B7-H1表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響。結(jié)果 65例胃癌組織中癌細(xì)胞的細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)以及部分腫瘤組織浸潤(rùn)的淋巴管及淋巴細(xì)胞中均有檢測(cè)到B7-H1的陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為36.9%。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或脈管內(nèi)有癌栓的患者B7-H1陽(yáng)性率較高（均P＜0.05）。B7-H1陽(yáng)性表達(dá)的胃癌患者術(shù)后5年生存率（25.0%）低于陰性表達(dá)的患者（56.1%）（P＜0.05）。結(jié)論 B7-H1陽(yáng)性表達(dá)的胃癌患者易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差，B7-H1可作為評(píng)價(jià)胃癌患者預(yù)后的指標(biāo)之一。

B7-H1蛋白 胃癌 臨床病理特征 預(yù)后

B7-H1又稱CD274或程序性死亡配體，是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種免疫共刺激分子，主要表達(dá)在抗原遞呈細(xì)胞上，它與受體結(jié)合后誘導(dǎo)特異性T細(xì)胞凋亡，介導(dǎo)人類腫瘤免疫逃逸進(jìn)而參與腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移[1-2]。目前多種人類實(shí)性腫瘤組織中都有發(fā)現(xiàn)B7-H1，其已成為腫瘤免疫治療的新熱點(diǎn)。本研究運(yùn)用免疫組化方法研究胃癌組織中B7-H1的表達(dá)，結(jié)合患者臨床資料分析B7-H1與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，旨在探索B7-H1在胃癌發(fā)生過(guò)程中的免疫作用機(jī)制及其對(duì)患者預(yù)后的影響。

1 資料和方法

1.1 一般資料 本研究胃癌組織標(biāo)本為溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外科2005年4月至2006年7月因胃癌行手術(shù)治療的65例患者。所有患者術(shù)前未行放療或化療，且均有完整的臨床及隨訪資料。其中男51例，女14例；年齡30～81（61.8±10.8）歲；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者41例，有種植轉(zhuǎn)移或其他臟器轉(zhuǎn)移者9例，脈管內(nèi)有癌栓者29例；胃癌TNM分期Ⅰ期16例，Ⅱ期17例，Ⅲ期23例，Ⅳ期9例。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色 采用SP三步法。主要試劑：小鼠抗人B7-H1（美國(guó)eBioscience公司）、羊抗小鼠二抗、山羊血清、DAB顯色劑、過(guò)氧化氫封閉液（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。取石蠟標(biāo)本3μm厚連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，PBS洗3次（每次5min，下同），抗原修復(fù)液微波熱抗原修復(fù)（中低火15min），PBS洗3次，3%過(guò)氧化氫室溫孵育10min抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，PBS洗3次，山羊血清封閉37℃恒溫箱孵育20min，傾去血清后直接加一抗（B7-H1稀釋濃度為1∶40，陰性對(duì)照用抗體稀釋液代替一抗），置于4℃冰箱過(guò)夜，PBS洗3次，加羊抗小鼠二抗37℃恒溫箱孵育30min后PBS洗3次，DAB顯色，蘇木素核染，脫水，封片。

1.2.2 檢測(cè)結(jié)果判斷 每張切片在×200倍顯微鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)腫瘤區(qū)域進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞核被染成藍(lán)色或淡藍(lán)色，而在細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)有淡黃色、棕黃色或者褐色顆粒的細(xì)胞為陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞，細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)無(wú)著色為陰性細(xì)胞。染色結(jié)果評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：（1）無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；（2）陽(yáng)性細(xì)胞占比＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果判斷：兩項(xiàng)評(píng)分相加＜2分為陰性（-），2～3分為弱陽(yáng)性（+），4～5分為中度陽(yáng)性（++），6～7分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）；結(jié)果≥2分設(shè)為陽(yáng)性組，＜2分設(shè)為陰性組。

1.3 隨訪 所有患者術(shù)后均按常規(guī)診療規(guī)范定期治療和隨診，采用電話隨訪的方式。生存時(shí)間從手術(shù)日開始算起至死亡日或最后隨訪日（2012年1月），以月為單位計(jì)算。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件；計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法；采用Kaplan-Meier法繪制兩組患者生存曲線，兩組間中位生存時(shí)間的比較采用log-rank檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織中B7-H1的表達(dá)情況 見圖1。

圖1 胃癌組織中B7-H1的表達(dá)情況（SP三步法染色，×400）

由圖1可見，胃癌組織中B7-H1主要表達(dá)于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆?；蚝贮S色粗顆粒。

2.2 兩組患者胃癌組織中B7-H1的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見表1。

由表1可見，65例標(biāo)本中有陽(yáng)性標(biāo)本24例（陽(yáng)性率36.9%），陽(yáng)性組患者脈管內(nèi)癌栓及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率均高于陰性組患者。

2.3 兩組患者術(shù)后5年生存情況的比較 截止隨訪終止日，本研究患者中位生存時(shí)間47個(gè)月（1～79個(gè)月）；兩組患者術(shù)后生存曲線見圖2，陽(yáng)性組患者術(shù)后5年中位生存時(shí)間短于陰性組患者（P＜0.05）；其5年生存率亦低于陰性組患者，見表2。

圖2 兩組患者術(shù)后生存曲線的比較

表2 兩組患者術(shù)后5年生存率的比較[例（%）]

3 討論

B7-H1是第3個(gè)被發(fā)現(xiàn)的B7家族成員，屬于負(fù)性共刺激分子，主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜上，且受到多種細(xì)胞因子及腫瘤抗原的調(diào)節(jié)。B7-H1在正常胃黏膜組織中幾乎不表達(dá)[3]，本研究檢測(cè)到B7-H1在胃癌組織中呈高表達(dá)，且在伴有脈管內(nèi)癌栓及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者中的陽(yáng)性表達(dá)率較高。這可能與B7-H1介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞免疫逃逸有關(guān)，提示B7-H1可能參與了胃癌的發(fā)生，且與腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞及淋巴結(jié)中B7-H1及其受體PD-1的特異性高表達(dá)有關(guān)[4]。本研究亦發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性組患者術(shù)后5年中位生存時(shí)間短于陰性組患者，其術(shù)后5年生存率低于陰性組患者，可能是由于B7-H1高表達(dá)患者抗腫瘤免疫功能發(fā)生障礙，更容易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差，這從側(cè)面反映出B7-H1的高表達(dá)可能是影響胃癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素。

目前公認(rèn)抗腫瘤免疫功能障礙是胃癌形成機(jī)制之一，而B7-H1/PD-1信號(hào)通路在該過(guò)程中起到重要的作用，其參與調(diào)節(jié)人體細(xì)胞及體液免疫，尤其是細(xì)胞免疫。在人類多種免疫細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞表面已檢測(cè)到B7-H1的表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)其與人類腫瘤免疫逃逸有著密切的關(guān)系。腫瘤細(xì)胞及腫瘤浸潤(rùn)細(xì)胞上高表達(dá)的B7-H1通過(guò)與受體PD-1結(jié)合，傳遞抑制信號(hào)，調(diào)節(jié)Fas/FasL信號(hào)通路使激活的T細(xì)胞凋亡、失活或發(fā)生功能耗竭，并誘導(dǎo)具有抗腫瘤作用的特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡；B7-H1也可抑制穿孔素的產(chǎn)生，阻礙CD8+T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷；其還可通過(guò)抑制細(xì)胞毒性T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞溶解作用及限制自然殺傷細(xì)胞的作用，使腫瘤細(xì)胞躲過(guò)人體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視，發(fā)生免疫逃逸，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移[5-7]。

綜上所述，B7-H1介導(dǎo)的腫瘤免疫逃逸參與了腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移，根據(jù)本研究結(jié)果推測(cè)B7-H1可作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的指標(biāo)之一，同時(shí)B7-H1介導(dǎo)的免疫逃逸機(jī)制研究有可能成為一項(xiàng)具有良好前景的抗腫瘤研究方向。

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Expression of B7-H1 protein in gastric cancer and its clinical significance

WANG Zhanwei,ZHAO Hui,HAN Shaoliang.Department of General Surgery,the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou 325000,China

Objective To investigate the expression ofB7-H1 in gastric carcinoma and its clinicopathological significance. Methods Immunohistochemical staining was used to detect the expression of B7-H1 protein in gastric cancer.The relationship between the B7-H1 protein expression and clinicopathological parameters was analyzed. Results Immunohistochemical staining revealed that B7-H1 was expressed on membrane,cytoplasm of cancer cells and tumor infiltrating lymphocytes.B7-H1 protein in gastric cancer was correlated with lymph node metastasis and vessel infiltration(P＜0.05).The postoperative 5-year survival rate of patients with negative B7-H1 expression(25.0%)was lower than that of those with positive B7-H1 expression (56.1%,P＜0.05). Conclusion Gastric cancer patients with B7-H1 positive expression are likely to have lymph node metastasis and poor prognosis,indicating that it might be used as an indicator ofprognosis for gastric cancer patients.

B7-H1 protein Gastric cancer Clinicopathologic feature Prognosis

2015-09-24）

（本文編輯：李媚）

325000 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科（王戰(zhàn)偉為研究生，現(xiàn)在湖州市中心醫(yī)院工作）

韓少良，E-mail：SLhan88@hotmail.com