曹 宏 牛 犁 余 方 劉 歡 楊桂芳

(武漢大學中南醫(yī)院病理科，湖北 武漢 400071)

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CIK維持治療對老年中晚期非小細胞肺癌患者組織基質(zhì)金屬蛋白酶-7及上皮生長因子受體蛋白表達的影響

曹 宏 牛 犁 余 方 劉 歡 楊桂芳

(武漢大學中南醫(yī)院病理科，湖北 武漢 400071)

目的 探討CIK維持治療對老年中晚期非小細胞肺癌(NSCLC)患者組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-7及上皮生長因子受體蛋白(EGFR)蛋白表達的影響。方法 選取經(jīng)病理組織學和細胞學證實Ⅲα～Ⅳ期NSCLC患者78例，按隨機數(shù)字表法分組，對照組39例化療后給予對癥支持治療，研究組39例在化療后予以CIK維持治療，對比兩組患者間生存質(zhì)量、炎癥因子及T淋巴細胞水平，同時測量兩組MMP-7及EGFR蛋白水平。結(jié)果 研究組治療后MMP-7及EGFR蛋白表達陽性率(30.77%、17.95%)低于對照組(53.85%、38.46%)(P<0.05)。與對照組比較，研究組治療后生存質(zhì)量優(yōu)于對照組，治療后白細胞介素(IL)-2、IL-12和干擾素(IFN)-γ水平高于對照組，治療后CD8+水平低于對照組，CD4+及CD4+/CD8+水平高于對照組(P<0.05)。結(jié)論 采用CIK維持治療能降低老年中晚期NSCLC患者組織MMP-7及EGFR蛋白表達水平，提高生活質(zhì)量及免疫功能，效果顯著。

CIK維持治療；中晚期非小細胞肺癌；基質(zhì)金屬蛋白酶-7；上皮生長因子受體

晚期非小細胞肺癌(NSCLC)患者無法接受靶向治療，化療仍是主要的治療方法〔1〕。雖然標準化放療一定程度上可以提高患者的生存率，然而嚴重的毒性反應(yīng)及晚期肺癌患者免疫力低下等因素相互影響，導(dǎo)致NSCLC的一線維持化療效果極差。隨著生物免疫的研究深入，細胞因子誘導(dǎo)的殺傷(CIK)細胞在延長晚期NSCLC患者生存期和改善生活質(zhì)量方面取得新進展〔2，3〕。本次研究探討CIK維持治療對老年中晚期NSCLC患者組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-7及上皮生長因子受體(EGFR)蛋白表達的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年1月至2014年3月來我院經(jīng)病理組織學和細胞學證實Ⅲα～Ⅳ期NSCLC患者78例，一線化療伴或不伴放療后療效評價疾病穩(wěn)定(SD)或以上，經(jīng)我院倫理委員會審核通過，排除存在嚴重心律失常、冠心病、充血性心力衰竭等患者；排除CIK細胞生物治療過敏者；妊娠期婦女及哺乳期婦女除外，患者或家屬簽字同意，積極配合此次研究。按隨機數(shù)字表法分組，對照組39例化療后給予一般對癥支持治療，男25例，女14例，平均年齡(51.23±7.56)歲，腺癌23例，鱗癌16例；Ⅲa期4例，Ⅲb期13例，Ⅳ期22例；腫瘤直徑2.61～5.19 cm；研究組39例在化療后予以CIK維持治療，男24例，女15例，平均年齡(50.94±7.48)歲，腺癌24例，鱗癌15例；Ⅲa期3例，Ⅲb期14例，Ⅳ期22例；腫瘤直徑2.57～5.21 cm，兩組間基本資料具有可比性(P>0.05)。

1.2 CIK細胞制備及分組 清晨空腹使用真空采血管采集外周靜脈血50 ml，加入等量0.9%NaCl稀釋，用淋巴細胞分離液密度梯度離心，分離并收集單個核細胞，生理鹽水洗滌，用GT-T551培養(yǎng)液重懸外周血單個核細胞(PBMC)。CIK細胞擴增:第0天加入干擾素(IFN)-γ 3 000 U/ml，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24 h后加入白細胞介素(IL)-2 3 000 U/ml、CD3單抗100 ng/ml繼續(xù)培養(yǎng)。觀察細胞生長狀態(tài)，適時擴增，培養(yǎng)10～12 d收獲細胞，洗滌后重懸100 ml生理鹽水中，貼標簽封口。對照組在化療后給予對癥支持治療；研究組在化療后予以CIK維持治療，放化療結(jié)束1個月后開始輸注，5 d/周期，2個月為1個周期，每周期回輸細胞總數(shù)不少于15×109個。要求接收到細胞制劑后的30 min內(nèi)回輸給患者，輸注前30 min肌內(nèi)注射異丙嗪12.5 mg，CIK細胞輸注期間使用心電監(jiān)護儀監(jiān)測生命體征變化。

1.3 觀測指標

1.3.1 MMP-7及EGFR蛋白水平 由專業(yè)醫(yī)師于CIK治療前和第2次CIK治療1個月后采用S-P免疫組化染色法測定組織MMP-7及EGFR蛋白表達。鼠抗人EGFR單克隆抗體由德國Boster公司提供，MMP-9單克隆抗體由福州邁新生物技術(shù)公司提供。

1.3.2 生活質(zhì)量 由專業(yè)醫(yī)師于CIK治療前和第2次CIK治療1個月后采用歐洲癌癥研究組織(EROTC)生存質(zhì)量測定表(QLQ-C30)中的整體生活質(zhì)量量表(GHS)測定生存質(zhì)量，其中有5個功能量表:軀體功能、角色功能、社會功能、情緒功能和認知功能，功能量表分數(shù)越高,表示生活質(zhì)量狀態(tài)越好。

1.3.3 炎癥因子水平 由專業(yè)醫(yī)師于CIK治療前和第2次CIK治療1個月后采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測NSCLC患者外周血清IL-2、IL-12和IFN-γ的表達水平，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3.4 T淋巴細胞亞群 由專業(yè)醫(yī)師于CIK治療前和第2次CIK治療1個月后采集患者外周血2 ml，置于抗凝管中，F(xiàn)icoll密度梯度離心法分離血清，低溫條件下待用，采用流式細胞儀測定T淋巴細胞變化情況，主要包括CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平，試劑盒為美國BD公司提供。

1.3.5 安全性評價 治療期間進行常規(guī)化驗檢查，觀察并記錄患者CIK回輸過程中不良反應(yīng)狀況。

1.4 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件計量資料行t檢驗，計數(shù)資料行R×Cχ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者治療前后MMP-7及EGFR蛋白水平對比 與治療前(76.92%、51.28%)比較，研究組治療后MMP-7及EGFR蛋白陽性率均降低，研究組治療后MMP-7及EGFR蛋白陽性率(30.77%、17.95%)低于對照組(53.85%、38.46%)(P<0.05)。對照組治療前MMP-7、EGFR蛋白陽性率(74.36%、53.85%)與治療后比較無顯著差異。

2.2 兩組患者治療前后生存質(zhì)量分析 與治療前比較，對照組患者治療后軀體功能、角色功能、社會功能、情緒功能評分升高，研究組治療后軀體功能、角色功能、社會功能、情緒功能和認知功能評分升高，研究組治療后軀體功能、角色功能、社會功能、情緒功能評分高于對照組(P<0.05)。見表1。

2.3 兩組患者治療前后炎癥因子水平分析 與治療前比較，對照組患者治療后IL-2、IFN-γ水平升高，研究組患者治療后IL-2、IL-12和IFN-γ水平顯著升高，研究組治療后IL-2、IL-12和IFN-γ水平高于對照組，具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

2.4 兩組患者治療前后T淋巴細胞亞群水平對比 與治療前比較，對照組患者治療后CD8+水平降低，研究組患者治療后CD8+水平降低，CD4+及CD4+/CD8+水平升高，研究組治療后CD8+水平低于對照組，CD4+及CD4+/CD8+水平高于對照組(P<0.05)。見表3。

2.5 安全性評價 研究組CIK細胞回輸過程及回輸后共4例發(fā)熱，以低熱為主，對癥處理后緩解；3例出現(xiàn)皮疹等癥狀，自行緩解。未出現(xiàn)明顯肝腎功能異常、骨髓抑制等不良反應(yīng)。

組別時間點軀體功能角色功能社會功能情緒功能認知功能對照組治療前58.7±11.745.8±11.349.4±11.261.6±11.763.4±14.8治療后68.9±12.11)56.4±12.81)58.6±12.21)71.2±12.31)70.3±13.4研究組治療前59.3±11.345.3±11.750.3±11.360.9±11.964.0±14.1治療后76.4±13.31)2)66.9±13.71)2)69.7±13.51)2)80.3±13.91)2)72.5±15.21)

與治療前比較：1)P<0.05；與治療后對照組比較：2)P<0.05；下表同

組別時間點IL-2IL-12IFN-γ對照組治療前62.15±7.2151.23±6.1352.33±6.54治療后65.51±7.331)59.12±6.751)54.18±5.82研究組治療前61.67±6.8950.98±6.2453.12±6.71治療后72.12±7.831)2)68.71±7.021)2)74.51±8.161)2)

組別時間點CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+對照組治療前63.12±4.9533.26±4.2530.75±3.461.17±0.21治療后64.11±4.5833.68±4.5729.16±3.101)1.16±0.19研究組治療前63.41±5.0233.19±4.1830.51±3.391.16±0.20治療后64.13±4.9337.56±4.861)2)27.05±3.781)2)1.31±0.221)2)

3 討 論

肺癌中80%～90%的NSCLC患者確診時已為晚期,前化放療在一定程度上能殺滅絕大多數(shù)的腫瘤細胞〔4〕，然而總生存期等方面仍較低，長時間的持續(xù)化療會導(dǎo)致血液毒性、肝腎損害、乏力等較多不良反應(yīng)，嚴重影響患者的治療依從性及生活質(zhì)量。近年來隨著對腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移機制領(lǐng)域方面的不斷深入研究，發(fā)現(xiàn)MMP-7和EGFR的表達與NSCLC的惡性程度及生物學行為密切相關(guān)〔5〕。采用CIK細胞可在體外大量增殖并直接殺傷腫瘤細胞〔6〕。然而，現(xiàn)階段關(guān)于CIK維持治療對老年中晚期NSCLC患者組織MMP-7及EGFR蛋白表達的研究較少。

MMP-7是與多種腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的MMP〔7,8〕。EGFR是上皮生長因子(EGF)細胞增殖和傳導(dǎo)的受體，EGFR腫瘤患者表達量高預(yù)后較差〔9〕。本次研究發(fā)現(xiàn)CIK維持治療可以降低老年中晚期NSCLC患者組織MMP-7及EGFR蛋白表達水平，經(jīng)靜脈回輸體內(nèi)后可以聚集在腫瘤發(fā)生部位，發(fā)揮殺傷局部腫瘤的作用。

NSCLC患者年齡較大，腫瘤期別較晚，患者經(jīng)過放化療后抵抗力弱、免疫能力低下〔10〕，IL-2、IL-12和IFN-γ能刺激自然殺傷(NK)細胞或CTL的殺瘤活性，既能抑制腫瘤細胞增殖又能直接殺傷腫瘤細胞〔11〕。IL-12降低時，腫瘤患者會出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移或惡液質(zhì)。IFN-γ含量增高可以延長疾病進展時間及總生存時間。本研究說明將CIK細胞用于中晚期NSCLC患者的維持治療，可促進免疫反應(yīng)，修復(fù)免疫功能，加強自身抗腫瘤能力。

惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機體的免疫功能失調(diào)關(guān)系密切，免疫系統(tǒng)無法識別和清除惡變細胞，導(dǎo)致腫瘤細胞能夠逃逸機體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和清除〔12〕。CIK細胞兼具T淋巴細胞的殺瘤活性和NK細胞的非主要組織相容性復(fù)合體限制性殺瘤特點〔13〕，本次研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)CIK維持治療后患者免疫水平均升高，說明CIK維持治療可改善機體免疫功能、提高生活質(zhì)量，因而被認為是新一代抗腫瘤過繼細胞免疫治療的重要手段。

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〔2015-12-30修回〕

(編輯 袁左鳴)

楊桂芳(1961-)，女，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事腫瘤病理研究。

曹 宏(1982-),女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤病理研究。

R73

A

1005-9202(2016)23-5903-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.23.057