盧炳新 孫二琳 王麗寧

(天津市南開醫(yī)院泌尿外科，天津 300100)

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MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的表達及作用機制

盧炳新 孫二琳1王麗寧1

(天津市南開醫(yī)院泌尿外科，天津 300100)

目的 研究單核細胞趨化蛋白(MCP)-1與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在膀胱癌組織中的表達及作用機制。方法 選擇接受手術治療的35例膀胱癌患者保存完好的癌組織石蠟標本為觀察組，另選同期35例在醫(yī)院接受前列腺增生電切手術時同時切取的少量膀胱黏膜標本為對照組，通過免疫組織化學法檢測兩組MCP-1與VEGF的陽性表達情況，另通過雙抗體夾心(ELISA)法檢測兩組組織中MCP-1與VEGF表達，分析MCP-1、VEGF與膀胱癌臨床病理分級的關系及兩指標的相關性。結果 MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的陽性表達率分別是91.43%、85.71%，均明顯高于在正常膀胱組織中的(11.43%、20.00%，P<0.05)；MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的表達水平均分別高于在正常膀胱組織(P<0.05)；MCP-1及VEGF陽性表達與臨床分級及病理分級有關(P<0.05)。Pearson相關性分析可知，膀胱癌組織中MCP-1的表達與VEGF呈正相關，同時MCP-1及VEGF陽性表達與臨床分期及病理分級均呈正相關。結論 MCP-1及VEGF在膀胱癌組織中高表達且與患者臨床及病理分級密切相關，同時二者呈正相關聯(lián)系并共同參與膀胱癌病情進展。

MCP-1；VEGF；膀胱癌

膀胱癌屬于泌尿系統(tǒng)中多發(fā)的惡性腫瘤之一。國外有報道指出，癌癥的形成及發(fā)展與慢性炎癥具有較為明顯的聯(lián)系，“炎癥、癌癥”系統(tǒng)已經(jīng)成為腫瘤臨床的研究熱點之一〔1〕。單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)均是與炎癥反應聯(lián)系緊密的重要因子，其中MCP-1對于炎癥反應過程中的單核細胞趨化及激活具有十分重要的作用，而VEGF也已證實與腫瘤血管的形成聯(lián)系緊密〔2〕。但臨床相關報道較少研究MCP-1及VEGF與膀胱癌病理特征之間的關系〔3〕。本次研究探討MCP-1及VEGF在膀胱癌組織中的表達及作用機制。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 選擇2015年5月至2016年4月在本院接受手術治療的膀胱癌患者保存完好的癌組織石蠟標本35例為觀察組，男30例，女5例，年齡46～72歲，平均(53.48±2.17)歲；腫瘤臨床分期：Tis～T1期3例，T2期11例，T3～T4期21例；病理分級：Ⅰ級4例，Ⅱ級10例，Ⅲ級21例。另選35例同期在醫(yī)院接受前列腺增生電切手術時同時切取少量膀胱黏膜標本為對照組，均為男性，年齡44～70歲，平均(52.97±2.54)歲。兩組的性別以及年齡無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。本次研究由醫(yī)院倫理委員會經(jīng)會議審核通過后實施。

1.2 研究方法 通過免疫組織化學法檢測兩組組織中MCP-1與VEGF的陽性表達情況。免疫組化試劑：兔抗MCP-1多克隆抗體(美國，Santa Cruz公司)和VEGF鼠抗人多克隆抗體(美國，Zymed公司)，SP免疫組化檢測試劑盒及DAB顯色劑購于武漢博士德生物工程公司。嚴格根據(jù)SP試劑盒操作步驟進行處理，抗體通過0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)給予稀釋，濃度1∶100，將PBS替代一抗用于陰性對照。利用枸緣酸鹽的緩沖液進行抗原修復，DAB顯色并用蘇木精復染，最后利用中性樹膠封片，利用光鏡觀察。另通過雙抗體夾心ELISA法檢測各組標本中組織勻漿液的MCP-1與VEGF表達水平，相關試劑盒產(chǎn)自美國的Genzyme公司，嚴格根據(jù)說明書描述的步驟進行操作。

1.3 陽性判定〔4,5〕SP法染色后，在細胞核或質(zhì)中發(fā)現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒為陽性。對5個隨意400倍視野內(nèi)陽性細胞占據(jù)的比率平均數(shù)進行統(tǒng)計，其中陽性細胞數(shù)為10%～25%計為(+)，26%～50%計為()，≥51%記為()。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0軟件，計數(shù)數(shù)據(jù)的比較采用χ2檢驗，計量數(shù)據(jù)比較采用t檢驗。MCP-1與VEGF的相關性利用Pearson法進行評價。

2 結 果

2.1 MCP-1與VEGF在不同膀胱組織中的陽性表達率對比 MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的陽性表達率分別是91.43%及85.71%，均明顯高于其在正常膀胱組織中的陽性表達率11.43%及20.00%(P<0.05)。MCP-1與VEGF的表達均以細胞核或細胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顏色顆粒為陽性，顆粒顏色越深表示陽性程度越高。見圖1，圖2。

圖1 MCP-1的陽性表達(DAB，×200)

圖2 VEGF的陽性表達(DAB，×200)

2.2 MCP-1與VEGF在不同膀胱組織中的表達水平對比 MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的表達水平〔(169.84±15.32)pg/ml、(1 158.84±325.76)ng/L〕均分別明顯高于在正常膀胱組織中的表達水平〔(117.62±12.68)pg/ml，(846.78±214.43)ng/L,P<0.05〕。

2.3 MCP-1及VEGF的陽性表達與臨床病理特征的關系 臨床分期為T3～T4期患者的MCP-1及VEGF陽性率〔19例(59.38%)、20例(66.67%)〕均明顯高于Tis～T1期〔3例(9.38%)、2例(6.67%)〕、T2期〔10例(31.25%)、8例(26.67%)〕，T2期的MCP-1及VEGF陽性率均明顯高于Tis～T1期(P<0.05)。病理分級為Ⅲ級的MCP-1〔21例(65.63%)〕及VEGF陽性率〔18例(60.00%)〕均明顯高于Ⅰ級〔2例(6.25%)、3例(10.00%)〕和Ⅱ級〔9例(28.13%)、9例(30.00%)〕，Ⅱ級的MCP-1及VEGF陽性率均明顯高于Ⅰ級(P<0.05)。

2.4 相關性分析 膀胱癌組織中MCP-1的表達與VEGF呈正相關(r=0.759，P=0.000)，MCP-1及VEGF陽性表達與臨床分期及病理分級均呈正相關(r=0.659，0.708，0.684，0.697；均P=0.000)。

3 討 論

在臨床上，膀胱癌屬于泌尿系統(tǒng)中一類比較常見的惡性腫瘤，其具有較高的發(fā)病率，對患者的身體健康具有較大威脅。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，炎癥過程是導致腫瘤發(fā)生與發(fā)展的重要因素，多數(shù)實體瘤中均含有較多的炎癥細胞浸潤，而這之中的炎癥細胞及腫瘤細胞所分泌出的炎癥介質(zhì)則發(fā)揮了促腫瘤的作用〔6，7〕。較多腫瘤細胞可自主地分泌和表達相應的趨化因子與受體，發(fā)揮雙面作用，既能夠抑制血管形成并趨化機體內(nèi)的免疫活性細胞較強地抵抗腫瘤細胞的生長及轉移，但其又可以促使腫瘤細胞自身及血管的生長，從而間接地加速腫瘤生長及轉移。MCP-1即是這類趨化因子，而VEGF是血管內(nèi)皮生長因子，以往相關研究報道較少涉及二者在膀胱癌組織中的表達情況〔8～10〕。因此，分析膀胱癌患者組織中MCP-1及VEGF表達情況及作用機制，有利于更加全面地掌握膀胱癌的病情進展。

本文研究結果顯示，MCP-1與VEGF在膀胱癌組織中的表達水平均分別明顯高于在正常膀胱組織中的表達水平，這符合國外Aldebasi等〔11，12〕的報道結果，提示膀胱癌發(fā)病與MCP-1及VEGF的表達異常存在緊密聯(lián)系，分析原因可能與MCP-1和VEGF的相關作用機制有關，膀胱癌在形成前期的慢性炎癥環(huán)境條件下，MCP-1的分泌間接激活了膀胱組織中的巨噬細胞及其他單核細胞向炎癥區(qū)域不斷聚集，同時使被活化的有關巨噬細胞釋放出細胞毒性物質(zhì)、干擾素以及白細胞介素等，進而共同參與到炎癥反應過程中〔13，14〕。同時，MCP-1還通過一系列生化作用促進了新生血管的產(chǎn)生，參與到組織的重塑與再生過程中，而VEGF則是通過趨化炎癥組織當中的各類免疫細胞，加速組織內(nèi)皮細胞和成纖維細胞以及上皮細胞增生，促使組織細胞由輕度增生發(fā)展為非典型增生，進而發(fā)生細胞突變，最終導致癌性增生〔15〕。此外，本文結果發(fā)現(xiàn)，膀胱癌組織中MCP-1的表達與VEGF呈正相關。這提示MCP-1與VEGF在膀胱癌的發(fā)病過程當中可能存在一定的協(xié)同調(diào)節(jié)作用，符合國外Shinke等〔16〕的報道?？赡苁且驗镸CP-1能夠促使局部組織細胞不斷表達VEGF，進而誘導血管生成。Yang等〔17〕也證實，MCP-1在極低的濃度水平時即可趨化機體的血管內(nèi)皮細胞，進而致使體內(nèi)血管的形成。在慢性炎癥相關腫瘤組織中的部分單核細胞或巨噬細胞因受到腫瘤細胞分泌出的部分細胞因子產(chǎn)生的影響，逐漸引起MCP-1表達能力變強，進而通過調(diào)節(jié)作用使 VEGF的表達水平也隨之上升，最終促進腫瘤組織生長。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，MCP-1及VEGF陽性表達與臨床分期及病理分級均呈正相關，符合Ito等〔18〕的報道結果，提示MCP-1及VEGF陽性表達與膀胱癌患者的臨床特征之間也具有緊密聯(lián)系，同時MCP-1及VEGF可呈現(xiàn)同向表達。筆者認為原因可能在于MCP-1及VEGF在膀胱癌患者的發(fā)病進程中存在一定的協(xié)同調(diào)控作用，而這也是膀胱癌患者發(fā)病的一種重要的作用機制。有報道證實〔19〕，腫瘤細胞中MCP-1的表達能力上升后，其VEGF表達也隨之上調(diào)，進而加速了腫瘤生長。因此，在臨床治療過程中，嘗試調(diào)節(jié)MCP-1及VEGF的表達水平可能有助于抑制膀胱癌病情的進展。

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〔2016-06-16修回〕

(編輯 郭 菁)

天津市衛(wèi)生局科技基金(2014KZ104)

1 天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院泌尿外科

盧炳新(1971-)，男，博士，主任醫(yī)師，從事泌尿外科腫瘤方面的研究。

R737.14

A

1005-9202(2016)23-5891-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.23.052