趙 暉 王 寶 王啟文 趙 鑫

(吉林省腫瘤醫(yī)院，吉林 長春 130012)

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加熱對肺癌細(xì)胞SPC-A-1分泌細(xì)胞因子的影響

趙 暉 王 寶 王啟文 趙 鑫

(吉林省腫瘤醫(yī)院，吉林 長春 130012)

目的 探討加熱對肺癌細(xì)胞SPC-A-1分泌細(xì)胞因子的影響。方法 培養(yǎng)人肺腺癌細(xì)胞SPC-A-1至對數(shù)生長期，放入恒溫水浴箱加熱，42℃，2 h；復(fù)溫0、12、24、48、72 h，取復(fù)溫不同時間的SPC-A-1細(xì)胞培養(yǎng)上清進(jìn)行腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細(xì)胞介素(IL)-2、干擾素(IFN)-γ、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)等細(xì)胞因子檢測，并與未加熱的SPC-A-1細(xì)胞培養(yǎng)上清液進(jìn)行比較。結(jié)果 42℃加熱2 h后復(fù)溫不同時間的培養(yǎng)上清液中 IL-2、IFN-γ、TNFα均比未加熱的SPC-A-1有不同程度的提高，VEGF分泌量逐漸下降。結(jié)論 42℃加熱2 h可以促進(jìn)IL-2、IFN-γ、TNFα等抗腫瘤細(xì)胞因子分泌的增加，降低VEGF等的分泌。

熱療；肺腺癌細(xì)胞；細(xì)胞因子

熱療是近年來發(fā)展起來的無創(chuàng)傷的腫瘤治療方法。由于在加熱過程中會使血液循環(huán)加速、血管擴張，可以使全身及局部血氧量增加，pH值改變，分泌某些促進(jìn)免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子和蛋白，因而可以改善腫瘤的微環(huán)境，達(dá)到治療腫瘤的目的。本實驗擬探討熱療對腫瘤細(xì)胞SPC-A-1分泌細(xì)胞因子變化的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 IMDM培養(yǎng)基，GIBCO公司；胎牛血清，北京元亨；人肺癌細(xì)胞SPC-A-1，中國科學(xué)院上海生命科學(xué)院；白細(xì)胞介素(IL)-2，干擾素(IFN)-γ，腫瘤壞死因子(TNF)-α，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)檢測試劑盒：上海朗頓公司。恒溫水浴箱，低溫高速離心機，酶標(biāo)儀。

1.2 方法 用含10%胎牛血清的IMDM培養(yǎng)基培養(yǎng)SPC-A-1至對數(shù)生長期，換成無血清培養(yǎng)基。將無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的SPC-A-1放入恒溫水浴箱進(jìn)行加熱，42℃、2 h，然后放回到37℃、5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，分別取復(fù)溫0、2、24、48、72 h的培養(yǎng)細(xì)胞上清保存待用。按照試劑盒說明將TNF-α(480 ng/L)、IL-2(1 200 ng/L)、IFN-γ(1 200 ng/L)、VEGF(3 200 ng/L)等實驗標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋成5個濃度，并設(shè)一個空白對照，加入到已包被好的培養(yǎng)板中，每個濃度設(shè)3復(fù)孔。將上述保存的上清加入到已包被好的培養(yǎng)板內(nèi)進(jìn)行TNF-α、IL-2、IFN-γ、VEGF檢測，同時設(shè)未加熱的培養(yǎng)上清作為對照，每個樣品設(shè)3復(fù)孔。實驗結(jié)果測定：用酶標(biāo)儀以空白孔調(diào)零，450 nm波長測各孔OD值。使用ELISAcalc軟件進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS11.0軟件行單因素方差分析。

2 結(jié) 果

加熱后2、24、48、72 h的TNF-α、IL-2、IFN-γ濃度均比未加熱高;而加熱后VEGF 除了2 h略有升高外，其余24、48、72 h的VEGF濃度均比未加熱降低。見表1。

時間TNF-α(ng/L)IL-2(ng/L)IFN-γ(pg/ml)VEGF(ng/L)0h73.13±25.69207.56±40.68234.68±25.91803.74±157.162h124.39±40.94269.79±38.05259.71±25.85932.98±164.2324h86.79±38.06268.81±38.40266.11±25.87654.20±157.6248h97.90±27.25279.51±37.95253.09±26.02612.07±173.4272h83.57±36.99280.01±38.15250.59±35.43657.51±156.01

3 討 論

熱療是近年來發(fā)展起來的治療腫瘤的新方法。腫瘤熱療是利用物理方法將腫瘤組織加熱到能殺滅腫瘤細(xì)胞的溫度并維持一定時間，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。由于它對人體無副作用并且療效確切，為腫瘤的治療提供了一種新的方法。

TNF-α是由單核-巨噬細(xì)胞分泌的一種小分子蛋白，可以與腫瘤細(xì)胞質(zhì)膜特異性受體結(jié)合，導(dǎo)致溶酶體破裂，釋放出溶酶體酶而促使細(xì)胞自溶。已有研究證實TNF-α對多種腫瘤具有細(xì)胞毒和抑制生長作用，但對正常組織細(xì)胞沒有影響〔1〕。IL-2是一種具有多重生物學(xué)功能的細(xì)胞生長因子，可以促進(jìn)T細(xì)胞生長、增殖及分化〔2〕，調(diào)節(jié)NK細(xì)胞并保持它的自然殺傷力〔3〕，誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的增殖和產(chǎn)生，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的增殖，與其他細(xì)胞因子協(xié)同作用等〔4〕。目前IL-2已被廣泛應(yīng)用于腫瘤的治療。IFN-γ是由活化的T細(xì)胞及NK細(xì)胞產(chǎn)生的一種多功能細(xì)胞因子，除了具有抗病毒活性外，還能抑制腫瘤細(xì)胞增殖和參與調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答〔5〕，因而在腫瘤治療中也起著重要作用。

VEGF為血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性肝素結(jié)合生長因子，在體內(nèi)外均可誘導(dǎo)新生血管形成。近年來的研究顯示，血管生成在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于血管的形成，而VEGF為腫瘤血管生成最有效的促進(jìn)因子。腫瘤發(fā)生后，VEGF表達(dá)顯著增加，而增加的VEGF又反過來促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。

本實驗結(jié)果表明，加熱對抗腫瘤細(xì)胞因子如IL-2、IFN-γ、TNFα等的分泌有提升作用，而對促進(jìn)腫瘤生長的VEGF隨著時間的延長，分泌量逐漸下降。 本實驗證明了熱療可以提高機體的免疫功能、改變腫瘤微環(huán)境，從而治療腫瘤。

1 Rani K，Isabella F，Theresa R，etal.Expression of cell cycle protein in male breast carcinoma〔J〕.World Surg Oncol，2010；8(1)：1-11.

2 Lan RY，Selmi C，Gershwin ME.The regulation，inflammatory，and T cell programming roles of interleukin-2(IL-2)〔J〕.Autoimmun，2008；31(1)：7-12.

3 Gruenbacher G，Gander H，Nussbaumer O，etal.IL-2 costimulation enables statin-mediated activation of human NK cells，preferentially through a mechanism involving CD56+ dendritic cells〔J〕.Cancer Res，2010；70(23)：9611-20.

4 Yang H，Cheng EY，Sharma VK，etal.Dendritic cells with TGF-β1 and IL-2 differentiate na?ve CD4+ T cell into alloantigen-specific and allograft protective Foxp3+ regulatory T cells〔J〕.Transplantation，2012；93(6)：580-8.

5 朱穎慧，朱蘭才，劉然義，等.干擾素-γ治療腫瘤的研究進(jìn)展〔J〕.腫瘤學(xué)雜志，2008；14(1)：4-9.

〔2016-09-05修回〕

(編輯 曲 莉)

趙 鑫(1969-)，男，主任醫(yī)師，主要從事肺癌的診治與基礎(chǔ)研究。

趙 暉(1980-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事非小細(xì)胞肺癌診治研究。

R734.2

A

1005-9202(2016)23-5831-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.23.025