陶有娣 王 瀟 陳 健

(廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院，福建 廈門 361000)

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運(yùn)用高通量RNA測(cè)序探討絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松與免疫功能的關(guān)系

陶有娣 王 瀟 陳 健1

(廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院，福建 廈門 361000)

目的 探討絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松與免疫功能的關(guān)系。方法 選取6例符合要求的絕經(jīng)后病人，3例骨質(zhì)疏松患者為實(shí)驗(yàn)組，3例非骨質(zhì)疏松者為對(duì)照組。雙能X線吸收儀測(cè)定骨密度?？崭钩槿≈忪o脈血適量，提取外周血單個(gè)核細(xì)胞RNA。 Nanodrop分光光度計(jì)及瓊脂糖電泳對(duì)RNA進(jìn)行質(zhì)檢，構(gòu)建RNA文庫。用 Illumina Hiseq2000平臺(tái)測(cè)序，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，尋找差異表達(dá)基因，并且對(duì)這些差異表達(dá)基因進(jìn)行功能富集分析。結(jié)果 根據(jù)差異分析P<0.05閾值篩選兩組的差異基因，這些差異表達(dá)基因功能富集顯示，大多集中在與免疫相關(guān)的信號(hào)通路上，如防御反應(yīng)(IL-15,IL-1 RAP,TNFAIP6,TNFRSF4,IL-2RA,IL-8等)，免疫反應(yīng)(CD8A,CD8B,IL-15,TNFRSF13C CD79B,CD14等)，炎癥反應(yīng)(IL-15,CD24,TLR10,TNFAIP6等)，白細(xì)胞活化(IL-8,CD8A,CD8B等)和淋巴細(xì)胞活化(CD3G,CD8A,CD8B,THEMIS,KIR2DS4,KIR3DL1等)。結(jié)論 絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的發(fā)生與患者的免疫功能改變有一定的關(guān)系。

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松；高通量RNA測(cè)序；免疫功能

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松屬于原發(fā)性骨質(zhì)疏松，源于絕經(jīng)期卵巢功能的退化，成骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨形成與破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收失平衡，導(dǎo)致系統(tǒng)性骨骼紊亂，骨密度降低，骨組織微環(huán)境退化及骨折脆性與敏感性增加〔1〕。有研究表明，絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松發(fā)生過程中，雌激素缺乏導(dǎo)致T細(xì)胞活性增加，活化的T細(xì)胞分泌的一些炎性因子增加，如腫瘤壞死因子(TNF)-α、核因子(NF)κB受體活化因子受體的配體(RANKL),進(jìn)一步提高了破骨細(xì)胞活性〔2〕。在雌激素缺乏的情況下，活化的T細(xì)胞與TNF的來源最密切。也有報(bào)道表明T細(xì)胞缺陷的裸鼠對(duì)卵巢切除后的骨量丟失具有保護(hù)作用〔3〕。說明T淋巴細(xì)胞在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的發(fā)生發(fā)展中占重要的一部分。

在骨質(zhì)疏松的發(fā)生發(fā)展中，骨保護(hù)素(OPG)/RANKL/RANK 信號(hào)通路起重要作用〔4〕。與RANKL競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合RANK,調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的生成，而B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生OPG占骨髓的64%，骨保護(hù)素負(fù)性調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的生成。研究表明，B淋巴細(xì)胞缺乏的小鼠表現(xiàn)出持續(xù)的骨質(zhì)疏松及骨髓中OPG水平下降，這種情況可以被B淋巴細(xì)胞重建所補(bǔ)救〔5〕。

高通量測(cè)序是近年來一個(gè)熱門的技術(shù)，主要特點(diǎn)是測(cè)序通量高，測(cè)序時(shí)間和成本顯著下降〔6〕。本研究運(yùn)用高通量RNA測(cè)序技術(shù)，從基因水平進(jìn)一步探討骨質(zhì)疏松與免疫功能間的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 選取6例絕經(jīng)后婦女，符合以下條件：(1)年齡50～60歲，絕經(jīng)2年以上、10年以下，自愿加入該實(shí)驗(yàn)研究，所有受試者均來自廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院門診病人。(2)骨質(zhì)疏松組：符合1994年世界衛(wèi)生組織確立的骨質(zhì)疏松診斷標(biāo)準(zhǔn)，即雙能X線吸收儀測(cè)定股骨頸或腰椎骨密度T值<-2.5標(biāo)準(zhǔn)差。(3)健康對(duì)照組：雙能X線吸收儀測(cè)定股骨頸或腰椎骨密度T值>-1標(biāo)準(zhǔn)差。(4)以下情況兩組均予排除：近期或以前經(jīng)過抗骨質(zhì)疏松治療(雙磷酸鹽類，特立帕肽，雷尼酸鍶，雷洛昔芬)，近1個(gè)月使用過治療骨質(zhì)疏松中藥者，近3個(gè)月內(nèi)采用激素替代治療和使用降鈣素(密鈣息和益鈣寧等)，1年內(nèi)應(yīng)用唑來膦酸注射液者；以前或現(xiàn)在患影響骨或免疫系統(tǒng)疾病，包括早絕經(jīng)(絕經(jīng)年齡<40歲)、甲狀旁腺功能亢進(jìn)、未經(jīng)治療的甲狀腺功能亢進(jìn)、骨軟化癥、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、多發(fā)性骨髓瘤、脊柱結(jié)核、腫瘤患者、人類免疫缺陷病毒(HIV)感染、乙型或丙型慢性肝炎、慢性腎功能或肝衰竭，或嚴(yán)重畸形、殘廢、喪失勞動(dòng)力；以前或現(xiàn)在采用影響骨與免疫系統(tǒng)的療法：長(zhǎng)期類固醇治療，免疫抑制治療(化學(xué)療法，甲氨蝶呤，環(huán)孢素，TNF-α阻斷劑等)；合并新鮮骨折及嚴(yán)重多處骨折患者。

1.2 主要試劑、儀器 Trizol(美國(guó)Ambion 公司)；人淋巴細(xì)胞分離液CBD(中國(guó)斯坦姆生物公司)；RNA建庫TruSeq? RNA LT Sample Prep Kit v2(美國(guó)Illumina公司)，測(cè)序試劑 TruSeq PE Cluster Kit v3-cBot-HS，TruSeq SBS Kit v3-HS(200-cycles)(美國(guó) illumina公司)；捕獲磁珠AmpureBeads(美國(guó)Beckman公司)；Qubit定量 Quant-iTTMPicoGreen? dsDNA Assay Kit (美國(guó)life公司)Hisq2000高通量測(cè)序儀；CBOT簇生成儀(美國(guó)Illumina公司)；Nanodrop(美國(guó)Thermo公司)；Qubit(美國(guó)Invitrogen公司)；普通PCR儀(美國(guó)Life公司)；電泳儀(中國(guó)天能公司)；凝膠成像系統(tǒng)(中國(guó)天能公司)

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

1.3.1 提取RNA 空腹抽取6例研究對(duì)象肘靜脈血適量，加入等體積的人淋巴細(xì)胞分離液CBD，高速離心(2 000 r/min)分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞，生理鹽水洗滌離心1次，棄上清，加1 ml TRIzol試劑混勻，再經(jīng)純化提取外周血單個(gè)核細(xì)胞RNA，測(cè)定濃度。

1.3.2 RNA質(zhì)檢 用1 μl Nanodrop儀器(美國(guó)Thermo公司)對(duì)提取的RNA進(jìn)行質(zhì)檢。

1.3.3 構(gòu)建測(cè)序文庫 將RNA分子隨機(jī)打斷并使用隨機(jī)引物將RNA片段反轉(zhuǎn)錄成cDNA分子，然后兩端加上特定的接頭。

1.3.4 錨定橋接 測(cè)序過程都在Illumina公司提供的流動(dòng)槽中進(jìn)行。一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的流動(dòng)槽含有8個(gè)通道,每個(gè)通道的內(nèi)表面有無數(shù)被固定的單鏈接頭。上述步驟得到的帶接頭的DNA 片段變性成單鏈后與測(cè)序通道上的接頭引物結(jié)合形成橋狀結(jié)構(gòu)，用于接下來的橋式PCR擴(kuò)增。加入每個(gè)通道的是之前構(gòu)建好的DNA片段文庫。

1.3.5 預(yù)擴(kuò)增 添加未標(biāo)記的dNTP和普通Taq酶進(jìn)行固相橋式PCR擴(kuò)增，單鏈橋型待測(cè)片段被擴(kuò)增成為雙鏈橋型片段。通過變性釋放出互補(bǔ)的單鏈，錨定到附近的固相表面。通過不斷循環(huán)，將會(huì)在流動(dòng)槽的固相表面上獲得上百萬條成簇分布的雙鏈待測(cè)片段。

1.3.6 單堿基延伸測(cè)序 在測(cè)序的流動(dòng)槽中加入四種熒光標(biāo)記的dNTP、DNA聚合酶以及接頭引物進(jìn)行擴(kuò)增，在每一個(gè)測(cè)序簇延伸互補(bǔ)鏈時(shí)，每加入一個(gè)被熒光標(biāo)記的dNTP就能釋放出相對(duì)應(yīng)的熒光，測(cè)序儀通過捕獲熒光信號(hào)，并通過計(jì)算機(jī)軟件將光信號(hào)轉(zhuǎn)化為測(cè)序峰，從而獲得待測(cè)片段的序列信息。計(jì)算機(jī)軟件將同一位置坐標(biāo)上檢測(cè)到的堿基依次連接，形成讀段。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用 SPSS13.0 軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 采用Tophat軟件對(duì)預(yù)處理后樣本序列與參考基因組序列進(jìn)行全基因組序列比對(duì)，計(jì)算序列的全基因 組覆蓋情況和計(jì)算RNA 的表達(dá)量，使用基因組為hg19，比對(duì)參數(shù)使用默認(rèn)。結(jié)果顯示各個(gè)樣本的定位百分比均在90%以上，即樣本RNA合格，可以用于下一步的測(cè)序步驟。見表1。

表1 六個(gè)樣本的質(zhì)檢比對(duì)概述

項(xiàng)目骨質(zhì)疏松組185R186R188R非骨質(zhì)疏松組190R192R334D原始讀段數(shù)目20,541,05419,148,91119,861,15519,060,99718,987,93316,223,061定位百分比94.61%94.16%94.27%94.14%93.82%92.59%豐度5.42%4.25%5.06%6.81%4.57%2.92%未定位百分比5.39%5.84%5.73%5.86%6.18%7.41%

原始讀段數(shù)目：各個(gè)樣本原始讀段數(shù)目；定位百分比：定位上的讀段數(shù)占原始讀段總數(shù)的百分比；豐度：定位在高豐度基因(例如核糖體rRNA)上的讀段數(shù)占原始讀段總數(shù)的百分比；未定位百分比：未定位上的讀段數(shù)占原始讀段的總數(shù)百分比

2.2 基因體富集分析(GO) 根據(jù)P<0.05篩選出兩組的差異表達(dá)基因，將獲得的差異基因列表或者轉(zhuǎn)錄本列表通過DAVID (http://david.abcc.ncifcrf.gov/)進(jìn)行GO(Gene Ontology)富集分析，研究差異基因在GO中的分布狀況將闡明實(shí)驗(yàn)中樣本差異在基因功能上的體現(xiàn)。GO分為三類：生物學(xué)過程(biological process)，分子功能(molecular function)和細(xì)胞組成(cellular componen)。結(jié)果顯示這些差異表達(dá)基因在生物功能方面，大多與免疫功能相關(guān)，如防御反應(yīng)、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、白細(xì)胞活化等。見表2。

2.3 全基因組及代謝途徑數(shù)據(jù)庫(KEGG)通路(Pathnay)富集分析 在生物體內(nèi)，不同基因相互協(xié)調(diào)行使其生物學(xué)功能，通過Pathway 顯著性富集分析能夠確定差異基因參與的最主要的生化代謝途徑和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。KEGG (Kyoto Encyclopedia of genes and Genomes，www.genome.jp/kegg/)是有關(guān)Pathway的主要公共數(shù)據(jù)庫。將獲得的差異基因列表或者轉(zhuǎn)錄本列表通過DAVID (http://david.abcc.ncifcrf.gov/)進(jìn)行KEGG通路富集分析。結(jié)果顯示差異基因富集在與免疫相關(guān)的信號(hào)通路上。 見表3。

表2 通過P<0.05篩選得到絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松組與非骨質(zhì)疏松組差異表達(dá)基因，對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行GO功能富集

目錄名稱P值基因生物功能防御反應(yīng)1.60E-07S100A8,IL-15,IL1RAP,LTF,TNFAIP6,CD40LG,TNFRSF4,CD24,IL2RA,IL-8,RNASE3,S100A12,CD19,P2RX1,CD14…免疫反應(yīng)4.46E-07CD8A,CD8B,IL-15,LTF,DPP8,PRG2,CD40LG,TNFRSF4,CD24,TLR10,IL-2RA,IL-8,TNFRSF13C,CD79B,CD14…炎癥反應(yīng)2.16E-05CCL3,S100A8,IL-15,TNFRSF4,FOS,MEFV,CD24,TLR10,IL-2RA,IL-8,S100A12,TNFAIP6,CD14…白細(xì)胞活化5.83E-05IL-8,CD8A,CD8B,IL-15,TNFRSF4,IFNAR1,AZU1,CD40LG,LAX1,CD2,CD24,KIR3DL1,DPP4…淋巴細(xì)胞活化2.38E-04CD3G,CD8A,CD8B,THEMIS,KIR2DS4,IL-15,TNFRSF4,IFNAR1,CD40LG,LAX1,MS4A1,CD2,CD24,KIR3DL1,DPP4…分子功能氧氣運(yùn)輸活性4.21E-06HBM,HBQ1,HBG1,HBA2,HBG2,HBA1,HBB,HBD細(xì)胞因子結(jié)合1.70E-05IL-2RA,CMKLR1,TNFRSF25,TGFBR1,ELANE,CXCR1,CXCR2,TNFRSF4,IL-11RA,IFNAR1,CCR6,CCR5,IL1RAP,TGFBR3,IL5RA,THBS1…氧氣結(jié)合2.94E-05HBM,HBQ1,HBG1,HBA2,CYP4F3,CYP2E1,HBG2,HBA1,HBB,SOD2HBD…碳水化合物結(jié)合0.0011838ENPP3,FCER2,CLEC17A,CD69,CD22,CLEC4C,CD24,PRG2,CLC,TNFAIP6,SI-GLEC1,KLRG1,CLEC12A,IGF2R,CLEC12B,TGFBR3,CD14…血紅素結(jié)合0.002341HBM,CYP2D6,FADS3,HBA2,HBA1,CYP2E1,CYP27A1,HBQ1,MPO,CYP4F3,HBG1,HBG2,HBB,HBD…細(xì)胞組成質(zhì)膜部分1.42E-10SEC31B,SLC22A18,RALB,SLC4A1,KLRD1,KIR2DL1,SYT11,NOTCH2,SLC4A10,SYTL2,TP53I13,SORL1,SYNGR1,KCNIP2,PILRB,RAP2A…細(xì)胞表面3.48E-04CD69,CD2,RC3H2,CD22,MS4A2,FCER1A,IL-2RA,ELANE,TNFRSF13C,NOTCH2,CD19,CCR5,TGFBR3,AMOT,CD226,TP53I13,CTSG…胞外區(qū)域0.004373UTS2,MMP8,PGLYRP1,CBLN3,RETN,LYNX1,COLQ,CD40LG,CCL3FCER2,PI3,TGFBR3,CD8A,CD8B,MMP28,MMP25,LNPEP,CAMP,CA2…

表3 根據(jù)P<0.05,篩選得到絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松組與非骨質(zhì)疏松組差異表達(dá)基因，對(duì)其進(jìn)行Pathway顯著性分析

KEGG通路基因數(shù)P值基因抗原呈遞通路124.58E-04HLA-DQB1,CD8A,CD8B,HLA-DRB5,KIR2DS4,KIR2DL1,HS-PA1A,KIR2DL3,KLRD1,HLA-DOB,KIR3DL1,KIR2DL4自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性通路158.83E-04PIK3CG,KIR2DS4,IFNAR1,TNFRSF10C,PIK3CA,KIR2DL1,PPP3CA,KIR2DL3,NFATC2,PIK3R3,SH2D1B,FCGR3B,KLRD1,KIR3DL1,KIR2DL4趨化因子信號(hào)通路160.008356457PIK3CG,CCL3,GNAI3,ROCK1,IL-8,ROCK2,CXCR1,CXCR2,FOXO3,CCR6,CCR5,ADCY9,PIK3CA,PIK3R3,PLCB1,GNG7B細(xì)胞受體信號(hào)通路90.010366428PIK3CG,FOS,CD19,CD22,PIK3CA,CD79B,PPP3CA,PIK3R3,NFATC2T細(xì)胞受體信號(hào)通路100.030121964PIK3CG,FOS,CD3G,CD8A,CD8B,CD40LG,PIK3CA,PPP3CA,PIK3R3,NFATC2

基因數(shù)：富集到該KEGG通路的基因數(shù)

3 討 論

骨骼與免疫系統(tǒng)在細(xì)胞起源、空間分布、功能及調(diào)控等方面存在許多相似性，免疫與骨骼系統(tǒng)有一些共同的調(diào)節(jié)因子，如細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)錄因子及受體〔7〕。Arron等〔8〕于2000年第一次使用骨免疫學(xué)描述免疫細(xì)胞與骨骼系統(tǒng)之間的相互作用。這兩者間的密切聯(lián)系使得在生理及病理?xiàng)l件下均相互作用，尤其是一個(gè)系統(tǒng)的病態(tài)激活影響另一個(gè)系統(tǒng)，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中，免疫系統(tǒng)的異?；罨绊懝侵亟▽?dǎo)致病理性骨吸收〔9〕。而且，在慢性炎癥狀態(tài)，骨形成與骨吸收之間的平衡偏向于破骨介導(dǎo)的骨吸收，尤其是近年來對(duì)OPG/RANKL/RANK〔10〕系統(tǒng)的深入研究，使人們對(duì)骨與免疫系統(tǒng)之間的相互作用機(jī)制有更深的認(rèn)識(shí)。RANK屬于TNF超家族，很多的組織及細(xì)胞均表達(dá)RANK，如骨骼肌、肝臟、乳腺，單核巨噬細(xì)胞系、B、T淋巴細(xì)胞、樹突細(xì)胞等。RANK的活化可刺激破骨前體細(xì)胞向成熟的破骨細(xì)胞分化及成熟的破骨細(xì)胞活化。RANKL 同樣屬于TNF超家族。骨組織及骨外組織細(xì)胞均可表達(dá)RANKL，如成骨細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)、骨細(xì)胞、乳腺等〔11〕。而且，免疫系統(tǒng)的很多細(xì)胞也可表達(dá)RANKL，如單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、樹突細(xì)胞、B、T淋巴細(xì)胞。已知這些免疫細(xì)胞可以產(chǎn)生促炎性細(xì)胞因子，通過加強(qiáng)RANK/RANKL信號(hào)通路導(dǎo)致骨破壞〔10〕。

高通量RNA測(cè)序，在測(cè)序過程中，由于RNA隨機(jī)片段化和采用隨機(jī)引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄等，所得cDNA片段較均勻地取自各轉(zhuǎn)錄本。因此，RNA測(cè)序得到的讀段可以視為對(duì)轉(zhuǎn)錄組隨機(jī)打斷后的隨機(jī)采樣，這是人們使用統(tǒng)計(jì)模型來對(duì)轉(zhuǎn)錄組和基因表達(dá)作參數(shù)估計(jì)分析的理論基礎(chǔ)〔12〕。

有研究表明，骨質(zhì)疏松性骨折的發(fā)生與很多慢性炎癥性疾病相關(guān)，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、慢性阻塞性肺疾病及一些病毒感染〔13〕。Breuil等〔14〕觀察26例伴有骨質(zhì)疏松性骨折的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松女性及24例年齡和雌激素水平匹配的健康對(duì)照組的免疫細(xì)胞的表型和功能特性。他們首次觀察到B淋巴細(xì)胞數(shù)目減少，由此推測(cè)B細(xì)胞的這種改變可能與體內(nèi)骨髓微環(huán)境改變有關(guān)，并且獨(dú)立于年齡和雌激素狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)GO富集分析顯示兩組差異表達(dá)基因在生物功能方面大多與免疫功能相關(guān)，如防御反應(yīng)、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、白細(xì)胞活化等。KEGG通路分析結(jié)果表明，絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的發(fā)生與免疫功能改變有一定的關(guān)系。由此推測(cè)絕經(jīng)后，患者自身免疫功能與骨微環(huán)境相互作用，引起骨形成與骨吸收之間的平衡偏向于破骨介導(dǎo)的骨吸收。

目前兩種主要治療骨質(zhì)疏松的藥物是抑制骨吸收和刺激新骨形成。抑制骨吸收藥物包括雙膦酸鹽類，如依替膦酸鈉、阿侖膦酸鈉、利塞膦酸鈉和唑來膦酸;雌激素與選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑——雷洛昔芬;鮭魚降鈣素和狄諾塞麥。目前唯一的刺激新骨形成藥物是特立帕肽〔15〕。本實(shí)驗(yàn)從基因表達(dá)水平研究骨質(zhì)疏松與免疫功能的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)兩組絕經(jīng)后病人的差異表達(dá)基因大部分集中在與免疫功能相關(guān)的信號(hào)通路上。

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〔2016-01-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

Relationship between postmenopausal osteoporosis and immune function

TAO You-Di, WANG Xiao, CHEN Jian.

College of Medicine，Xiamen University，Xiamen 361000，F(xiàn)ujian，China

Objective To detect the relationship between postmenopausal osteoporosis and immune function.Methods The study involved 6 women, including 3 postmenopausal osteoporosis and 3 postmenopausal non-osteoporotic women. BMD measurement was performed by dual-energy X-ray absorptiometry. After an overnight fast, morning blood was drawn from the candidates. Total RNA was extracted from peripheral blood mononuclear cells. RNA quality and purity were confirmed with a Nanodrop spectrophotometer and electrophoresis. RNA library was constructed. With Illumina Hiseq 2000 sequencing platform, dates and searched for differentially expressed genes(DEGs)were collected. Afterwards, functional and pathway analyses were conducted.Results The DEGs were mainly enriched in GO term of defense response (e.g.,IL-15,IL-1 RAP,TNFAIP6,TNFRSF4,IL-2 RA,IL-8),immune response(e.g., CD8A,CD8B,IL-15,TNFRSF13C,CD79B,CD14),inflammatory response(e.g., IL-15,CD24,TLR10,TNFAIP6),leukocyte activation(e.g., IL-8,CD8A,CD8B),lymphocyte activation(e.g., CD3G,CD8A,CD8B,THEMIS,KIR2DS4,KIR3DL1).Conclusions The postmenopausal osteoporosis is associated with changes of immune function.

Postmenopausal osteoporosis; High-throughput RNA sequencing; Immune function

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81272168);福建省醫(yī)學(xué)創(chuàng)新課題資助項(xiàng)目(No.2012-CXB-32)

1 廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)科

陳 健(1963-)，男，博士，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事骨質(zhì)疏松研究。

陶有娣(1989-)，女，在讀碩士，主要從事骨質(zhì)疏松研究。

R3

A

1005-9202(2016)23-5812-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.23.017