周琴 張勤 李光乾 周素芽

●論 著

PDTC對(duì)驚厥持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬細(xì)胞凋亡及TLR4、caspase-3表達(dá)的影響

周琴 張勤 李光乾 周素芽

目的 觀察大鼠驚厥持續(xù)狀態(tài)后海馬中Toll樣受體4（TLR4）、NF-κB和半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的動(dòng)態(tài)表達(dá)及神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化，探討吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（PDTC）對(duì)驚厥后腦損傷的可能保護(hù)機(jī)制。方法 將106只SD大鼠隨機(jī)分為0.9%氯化鈉組（A組）、SC組（B組）和PDTC組（C組），B組根據(jù)大鼠驚厥后處死時(shí)間（4、24、48和72h），分為B1～B4組，B組和C組大鼠驚厥持續(xù)狀態(tài)模型的制作采用氯化鋰-匹羅卡品法，C組在大鼠制模成功后，每天腹腔注射PDTC（100mg/kg）1次，連用3d，于驚厥后72h處死。電鏡觀察海馬超微結(jié)構(gòu)改變；免疫組化法測(cè)定大鼠海馬NF-κB/p65的表達(dá)；RT-PCR法檢測(cè)海馬TLR4、caspase-3 mRNA表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化；TUNEL法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)的變化。結(jié)果 B組大鼠海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)損傷存在動(dòng)態(tài)變化，72h內(nèi)病變進(jìn)行性加重；C組大鼠病理改變較B4組減輕。B1～B4組海馬神經(jīng)元胞核內(nèi)有不同程度NF-кB/p65的表達(dá)，且較A組明顯升高（P＜0.05或0.01）。C組較B4組NF-κB/p65表達(dá)明顯下降（P＜0.01）。B1～B4組TLR4、caspase-3 mRNA的表達(dá)量均高于A組（P＜0.05或0.01），且隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，72h達(dá)到高峰；C組TLR4、caspase-3 mRNA的表達(dá)較B4組明顯降低（P＜ 0.05）。B組在驚厥24h后海馬CA1區(qū)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)已明顯高于A組（P＜0.01），72h達(dá)高峰，而C組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較B4組明顯下降（P＜0.01）。結(jié)論 驚厥持續(xù)狀態(tài)后大鼠海馬TLR4、NF-κB/p65和caspase-3的表達(dá)增強(qiáng)。NF-κB抑制劑PDTC可以下調(diào)TLR4和caspase-3的表達(dá)，并使神經(jīng)細(xì)胞凋亡減輕；提示TLR4/NF-κB信號(hào)通路在驚厥后海馬細(xì)胞凋亡的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起促進(jìn)作用。

驚厥 凋亡 Toll樣受體4 NF-κB 半胱氨酸蛋白酶-3 吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽

【 Abstract】 Objective To investigate the effects of pirrolidine dithiocarbamate(PDTC)on expression of TLR4,NF-кB, caspase-3 and the change of neuron apoptosis in hippocampus of status convulsion rats. Methods One hundred and six male Sprague-Dawley（SD）rats were randomly divided into control group(A),convulsion group(B)and PDTC group(C).then group B were randomly divided into four subset groups (B1-B4),which would be executed at 4h,24h,48h,72h after convulsion discontinued.Continuous epilepticus was induced by injecting lithium chloride and pilocarpine,and rats in group C were daily injected with 100mg/kg PDTC 30 min after convulsion discontinued for 3 days.The histopathological changes in hippocampus were observed with electron microscope,NF-κB/p65 protein was detected by immunohistochemistry(IHC),the expression of TLR4 and caspase-3 mRNAwas detected by RT-PCR.The neuron apoptosis was examined by TUNEL.Results Neuronal injury was observed in group B with electron microscope,and the change was increased gradually after seizure induced;neuronal injury in group C was milder than that in group B at 72h.IHC staining showed that more positive expression of NF-кB/p65 was observed in nuclei of hippocampal neurons in group B,compared with group A (P＜0.05),and the protein expression of NF-кB/p65 in group C was much lower than that in group B4(P＜0.01).The mRNA expression of TLR4 and caspase-3 in rat hippocampus of group B was significantly elevated than that in group A(P＜0.05);and the tendency was increased gradually reaching the peak at 72 h after seizure,and that in group C was much lower than that in B4 group(P＜0.01).The TUNEL positive cells in hippocampus CAlofgroup B were more than those ofgroup A at 24h after seizure(P＜0.01)reaching the peak at 72h;andthe TUNEL positive cells in group C were lower than those in B4 group(P＜0.01). Conclusion The expression of TLR4,NF-кB and caspase-3 increased after SC in rats.PDTC can down-regulate the expression of TLR4 and caspase-3 and inhibit neuronal apoptosis in hippocampus ofrats with pilocarpine-induced seizures.These results suggest that TLR4/NF-κB may have protective effect on the development ofthe hippocampus apoptosis caused by status convulsion.

有研究發(fā)現(xiàn)，持續(xù)驚厥發(fā)作后將導(dǎo)致以海馬區(qū)為主的選擇性腦損傷，而神經(jīng)細(xì)胞的死亡分為壞死與凋亡，壞死是被動(dòng)的突發(fā)性細(xì)胞腫脹與溶解過(guò)程，凋亡則屬于主動(dòng)程序性細(xì)胞死亡[1]。因細(xì)胞凋亡可以被調(diào)控，故其在驚厥后腦損傷中的作用日益受到關(guān)注。研究表明，免疫炎癥反應(yīng)參與了驚厥引起的腦損傷過(guò)程[2]，筆者之前研究發(fā)現(xiàn)，驚厥持續(xù)狀態(tài)后大鼠海馬Toll樣受體4（Tolllike receptor 4，TLR4）/NF-κB信號(hào)通路被激活，并促進(jìn)了驚厥持續(xù)狀態(tài)后大鼠海馬的損傷[3]?，F(xiàn)進(jìn)一步研究在驚厥持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元凋亡中TLR4/NF-κB信號(hào)通路的可能作用。

1 材料和方法

1.1 材料 清潔級(jí)雄性SD大鼠106只，體重180～220g，由溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。溴化甲基東莨菪堿（S8502）、吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）（P8765）由美國(guó)Sigma公司提供，氯化鋰（K73036）、匹羅卡品（K80477）由美國(guó)Fluka公司提供。兔抗大鼠NF-κB/p65一抗（RAB-9034）為L(zhǎng)AB VISION公司產(chǎn)品，即用型免疫組化二抗試劑盒（KIT-5004）、DAB顯色劑（DAB-0031）由福建邁新公司提供。RT-PCR試劑盒（DRR023A）為日本TaKaRa公司產(chǎn)品，TRI Reagent總RNA提取試劑盒（TR-118）購(gòu)自美國(guó)MRI公司。TUNEL試劑盒（ZK-8005）由瑞士Roche公司提供。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組與模型制作 大鼠隨機(jī)分為0.9%氯化鈉組（A組，16只）、驚厥持續(xù)狀態(tài)組（B組）和PDTC組（C組，18只），其中B組根據(jù)大鼠驚厥后處死時(shí)間（4、24、48和72h）分為B1～B4組，每組18只，A組和C組于驚厥后72h處死。驚厥持續(xù)狀態(tài)模型制作方法如下：大鼠先予腹腔注射127mg/kg的氯化鋰，18h后予溴化甲基東莨菪堿1mg/kg，30min后予注射匹羅卡品45mg/ kg。大鼠驚厥程度按Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分為6級(jí)：0級(jí)，無(wú)驚厥發(fā)作；Ⅰ級(jí)，面部抽動(dòng)；Ⅱ級(jí)，節(jié)律性點(diǎn)頭；Ⅲ級(jí)，前肢陣攣抽搐；Ⅳ級(jí)，全身強(qiáng)直伴站立；Ⅴ級(jí)，全身強(qiáng)直陣攣。當(dāng)大鼠驚厥時(shí)間達(dá)30min時(shí)予阿托品1mg/kg、10%水合氯醛400mg/kg腹腔注射。驚厥程度達(dá)Ⅳ級(jí)以上、持續(xù)達(dá)30min的為合格驚厥持續(xù)狀態(tài)大鼠模型。A組以等量的0.9%氯化鈉代替匹羅卡品，其余用藥同B組。C組在大鼠驚厥停止后30min，給予每天腹腔注射1次100mg/kg的PDTC，連用3d。

1.2.2 電鏡標(biāo)本制作與觀察 每組中任選2只大鼠腦海馬組織，2.5%戊二醛前固定，1%鋨酸后固定，作海馬CA1區(qū)半薄切片，600A超薄切片，日立H600透射電鏡觀察神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化。

1.2.3 免疫組化法測(cè)定海馬NF-κB/p65的表達(dá) 每組隨機(jī)取10張大鼠海馬組織的石蠟切片，采用免疫組化法檢測(cè)NF-κB/p65表達(dá)。隨機(jī)取5個(gè)高倍視野（×400），測(cè)定陽(yáng)性部位的平均吸光度（A值），累積吸光度（IA值），同時(shí)測(cè)定NF-κB/p65的核陽(yáng)性細(xì)胞百分比。

1.2.4 RT-PCR檢測(cè)大鼠海馬TLR4、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）mRNA表達(dá) 每組隨機(jī)取6只海馬標(biāo)本，稱取50～100mg制作勻漿，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。用β-actin作為PCR反應(yīng)的內(nèi)參照，引物序列及反應(yīng)條件：（1）β-actin：5′-CTACAATGCTGCGT GTGG-3′，5′-ATGGCTACGTACATGGCTGG-3′，產(chǎn)物長(zhǎng)度138bp。（2）caspase-3：5′-CTGGACTGCGGTATTGAG-3′，5′-ACGG GATCTGTTTCTTTG-3′；94℃預(yù)變性3min后，94℃變性30s，59℃復(fù)性30s，72℃延伸1min，循環(huán)32次，72℃延伸5min終止，產(chǎn)物長(zhǎng)度289bp。（3）TLR4：5′-GCCGGAAAGTTATTGTGGTGGT-3′，5′-ATGGGTTTTAGGCGCAGAGTTT-3′；94℃預(yù)變性3min后，94℃變性30s，59℃復(fù)性30s，72℃延伸1min，循環(huán)32次，72℃延伸5min終止，產(chǎn)物長(zhǎng)度356bp。用SmartView分析產(chǎn)物光密度值。

1.2.5 TUNEL檢測(cè)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡 每組隨機(jī)取10只大鼠的切片，TUNEL法檢測(cè)海馬神經(jīng)元凋亡細(xì)胞的表達(dá)。隨機(jī)取5個(gè)高倍視野（×400），取其平均值，統(tǒng)計(jì)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，多組間比較用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。兩變量的相關(guān)性分析采用Pearson等級(jí)相關(guān)。

2 結(jié)果

2.1 電鏡觀察海馬CA1區(qū)超微結(jié)構(gòu) A組大鼠海馬CA1區(qū)核膜完整光滑，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)清楚，線粒體，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和游離核糖體豐富（圖1，見(jiàn)插頁(yè)）。B1組CA1區(qū)神經(jīng)纖維間隙水腫，少量連接模糊。B2組神經(jīng)元細(xì)胞間隙明顯擴(kuò)張，核致密度增加，核膜皺縮曲折，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張，線粒體明顯腫脹。B3和B4組，神經(jīng)元出現(xiàn)凋亡樣改變：表現(xiàn)為細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)固縮，結(jié)構(gòu)致密，但核膜完整，多數(shù)線粒體、高爾基體均出現(xiàn)擴(kuò)張、空泡樣改變，呈“暗神經(jīng)元樣”改變（圖2，見(jiàn)插頁(yè)）。C組與B4組相比，海馬水腫范圍減小，程度有所減輕；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體仍輕度擴(kuò)張；線粒體仍有腫脹，但空泡樣變性少見(jiàn)；神經(jīng)元細(xì)胞仍可見(jiàn)核固縮，但無(wú)“暗神經(jīng)元”改變（圖3，見(jiàn)插頁(yè)）。

2.2 各組大鼠海馬CA1區(qū)NF-κB/p65免疫組化結(jié)果及核陽(yáng)性細(xì)胞的比較 A組海馬中NF-кB/p65主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核無(wú)染色。B1～B4組與A組比較，均有不同程度的NF-κB核陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)于神經(jīng)元和少量膠質(zhì)細(xì)胞中，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；于驚厥4h后NF-κB/p65即出現(xiàn)核轉(zhuǎn)移，達(dá)峰于驚厥后72h（P＜0.01）；C組與B4組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），詳見(jiàn)表1、圖4-6（見(jiàn)插頁(yè)）。

表1 各組大鼠海馬CA1區(qū)NF-κB/p65免疫組化結(jié)果及核陽(yáng)性細(xì)胞的比較

2.3 各組大鼠海馬TLR4、caspase-3 mRNA表達(dá)的比較 A組大鼠海馬僅表達(dá)極少量的TLR4 mRNA；B組隨觀察時(shí)間的延長(zhǎng)，TLR4 mRNA的表達(dá)量逐漸增加，于驚厥后72h達(dá)到峰值，與A組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與B4組比較，C組的TLR4 mRNA表達(dá)量明顯降低（P＜0.05）。caspase-3 mRNA在A組海馬僅有少量表達(dá)，B組隨觀察時(shí)間的延長(zhǎng)caspase-3 mRNA的表達(dá)量進(jìn)行性增加，于驚厥后72h達(dá)到峰值，與A組比較，均有明顯升高（P＜0.05），與B4組相比，C組caspase-3 mRNA的表達(dá)量明顯降低（P＜0.05），詳見(jiàn)表2、圖7-8。

表2 各組大鼠海馬TLR4、caspase-3mRNA表達(dá)的比較

圖7 各組大鼠海馬TLR4mRNA表達(dá)電泳圖

圖8 各組大鼠海馬caspase-3mRNA表達(dá)電泳圖

2.4 大鼠海馬CA1區(qū)TUNEL檢測(cè)結(jié)果 A組少量TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)于大鼠海馬CA1區(qū)。B組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)逐漸增加，于72h達(dá)到峰值，相較A組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。與B4組相比，C組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯下降（P＜0.01），但仍較A組高（P＜0.01），詳見(jiàn)表3、圖9-11（見(jiàn)插頁(yè)）。

2.5 相關(guān)性分析 TLR4mRNA與NF-κB/p65、caspase-3mRNA的表達(dá)均呈正相關(guān)（r＝0.572、0.704，均P＜0.01）；TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與TLR4 mRNA、NF-κB/p65與caspase-3 mRNA的表達(dá)均呈正相關(guān)（r＝0.823、0.580、0.649，均P＜0.01）。

表3 各組大鼠海馬CA1區(qū)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的比較（個(gè)/HP）

3 討論

驚厥持續(xù)狀態(tài)易引起海馬區(qū)為主的選擇性腦損傷，這種損傷包括神經(jīng)細(xì)胞的壞死與凋亡，而細(xì)胞凋亡受到一系列程序性調(diào)控的影響，可通過(guò)早期加以干預(yù)而逆轉(zhuǎn)。因此，驚厥持續(xù)狀態(tài)后神經(jīng)元凋亡的預(yù)防，對(duì)于減輕驚厥性腦損傷具有重要意義。

筆者發(fā)現(xiàn)在驚厥持續(xù)狀態(tài)后，大鼠海馬CA1區(qū)出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)元凋亡樣改變，且在驚厥后早期（4h）即可見(jiàn)到早期凋亡細(xì)胞，隨后逐步出現(xiàn)凋亡晚期改變，其病變程度隨觀察時(shí)間延長(zhǎng)逐漸加重，至驚厥后72h可見(jiàn)“暗神經(jīng)元”樣改變，提示大鼠在驚厥持續(xù)狀態(tài)后，雖然沒(méi)有再次出現(xiàn)驚厥發(fā)作，但腦內(nèi)的神經(jīng)損傷在驚厥持續(xù)狀態(tài)后的3d內(nèi)仍呈現(xiàn)進(jìn)一步加重過(guò)程。PDTC干預(yù)后能減輕驚厥后海馬組織的病理?yè)p傷，減少凋亡細(xì)胞的產(chǎn)生，與文獻(xiàn)報(bào)道相符[4]。

caspase是直接導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的蛋白酶系統(tǒng)，位于細(xì)胞凋亡機(jī)制中的核心地位[5]。其中caspase-3為凋亡的最終執(zhí)行者，活化后可降解細(xì)胞核、細(xì)胞骨架及細(xì)胞質(zhì)中的重要蛋白質(zhì)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Sun等[6]在海人藻酸誘導(dǎo)的驚厥持續(xù)狀態(tài)大鼠模型中發(fā)現(xiàn)，免疫組化和western blot結(jié)果表明caspase-3顯著增加，RT-PCR提示大鼠海馬caspase-3 mRNA表達(dá)明顯增加，達(dá)峰于驚厥后72h。本研究結(jié)果顯示，caspase-3 mRNA的表達(dá)在驚厥后早期（4h）已有升高（P＜0.05），且隨觀察時(shí)間的延長(zhǎng)逐步升高，達(dá)峰于驚厥后72h，其動(dòng)態(tài)變化與TUNEL檢測(cè)的神經(jīng)元凋亡的規(guī)律一致，與文獻(xiàn)報(bào)道類似[6]。這一結(jié)果證實(shí)caspase-3的活化與驚厥發(fā)作后的神經(jīng)元凋亡密切相關(guān)。

TLR4是一種跨膜識(shí)別受體，分為細(xì)胞外、細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)3部分，在CNS可表達(dá)于神經(jīng)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞等[7]。TLR4活化后，主要通過(guò)TRIF和MyD88依賴的兩條信號(hào)通路激活NF-κB，活化的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核進(jìn)行轉(zhuǎn)錄調(diào)控，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的產(chǎn)生[8]。在小鼠癲癇模型中發(fā)現(xiàn)，在癲癇小鼠海馬神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞、星型膠質(zhì)細(xì)胞中均有大量TLR4的表達(dá)，抑制TLR4后癲癇發(fā)作程度減輕[9]。而敲除TLR4基因的C3H/HJ型小鼠能抑制癲癇的發(fā)作[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，TLR4 mRNA的表達(dá)在驚厥后4h已有所升高，且隨觀察時(shí)間的延長(zhǎng)進(jìn)一步增加，達(dá)峰于驚厥后72h，提示在驚厥性腦損傷大鼠海馬細(xì)胞中TLR4被活化，且NF-κB表達(dá)量的增加與TLR4的上調(diào)呈正相關(guān)，說(shuō)明TLR4活化的同時(shí)伴有細(xì)胞核內(nèi)NF-κB的激活。由此可見(jiàn)，驚厥發(fā)作可激活TLR4/NF-κB通路，活化后的TLR4的作為重要的炎性受體介導(dǎo)驚厥持續(xù)狀態(tài)的免疫損傷。

但TLR4/NF-κB通路的激活是否與驚厥持續(xù)狀態(tài)后神經(jīng)細(xì)胞凋亡密切關(guān)聯(lián)呢？在海人酸所致的癲癇小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，NF-κB的活化促進(jìn)了海馬神經(jīng)元凋亡的發(fā)生，而抑制NF-κB可顯著減少神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，表明NF-κB的激活與驚厥后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡密切相關(guān)[11]。研究小膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡機(jī)制后發(fā)現(xiàn)，活化的TLR4可以上調(diào)NF-κB的表達(dá)，NF-κB活化后進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)激活caspase-11，最終引起caspase-3的活化而促使細(xì)胞凋亡發(fā)生[12]。本研究結(jié)果表明，驚厥后大鼠海馬TLR4/NF-κB通路的激活與caspase-3的表達(dá)和凋亡細(xì)胞數(shù)有顯著相關(guān)，因此，筆者推測(cè)TLR4/NF-κB信號(hào)通路可能通過(guò)活化caspase-3參與了驚厥后海馬細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

PDTC是一種NF-κB活化的抑制劑，在多種細(xì)胞中可以抑制NF-κB的活性[13]。Pfeilschifter等[14]在小鼠中風(fēng)模型中發(fā)現(xiàn)，PDTC可以通過(guò)激活p38 MAPK信號(hào)途徑減少腦梗死面積及減輕腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。Wang等[15]研究新生大鼠缺血缺氧性腦病模型發(fā)現(xiàn)，PDTC可以下調(diào)caspase-3的表達(dá)，減少NF-κB的核易位和海馬神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，從而減輕缺血缺氧引起的腦損傷。本研究結(jié)果顯示，PDTC可以減輕驚厥持續(xù)狀態(tài)后大鼠海馬組織的病理?yè)p傷，其原因可能是由于PDTC抑制了NF-κB的活性，使caspase-3的表達(dá)下降，從而減輕了細(xì)胞凋亡的程度。從RT-PCR的結(jié)果看，PDTC也抑制了TLR4的表達(dá)，這可能與NF-κB的活性被PDTC阻斷了有關(guān)。TLR4的活化激活了NF-κB，而活化的NF-κB對(duì)TLR4也有反饋?zhàn)饔?。有研究發(fā)現(xiàn)，LPS、γ-干擾素（IFN-γ）、IL-1β等可以增加TLR4在內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)，PDTC可以抑制由它們活化的TLR4表達(dá)上調(diào)，同時(shí)正常細(xì)胞中TLR4的表達(dá)也受到PDTC的抑制，這一結(jié)果提示TLR4的表達(dá)依賴于NF-κB調(diào)節(jié)[16]。Zhao等[17]研究也提示，抑制NF-κB的活性可以下調(diào)TLR4在樹(shù)突狀細(xì)胞表面的表達(dá)。TLR4激活NF-κB的途徑至今研究較多，但NF-κB如何調(diào)控TLR4的機(jī)制目前還不明了。也許是NF-κB激活的細(xì)胞因子誘導(dǎo)了TLR4的表達(dá)，也可能是NF-κB的核轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)了TLR4基因的轉(zhuǎn)錄，這些都還需要深入的研究。

綜上所述，驚厥持續(xù)狀態(tài)后海馬中存在神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，TLR4/NF-κB信號(hào)通路可能通過(guò)caspase-3來(lái)介導(dǎo)這一細(xì)胞損傷。PDTC可能通過(guò)抑制TLR4/NF-κB通路來(lái)減輕驚厥后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，為驚厥后腦損傷的保護(hù)機(jī)制提供可能的依據(jù)。

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（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）

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本刊編輯部

Effects of PDTC on expression of Toll-like receptor 4,caspase-3 and neuron apoptosis in hippocampus of status convulsion rats

ZHOU Qin,ZHANG Qin，LI Guangqian,et al.Department of Pediatrics,Zhejiang Provincial People's Hospital,Hangzhou 310014,China

Convulsion Apoptosis Tolllike receptor 4 NF-κB Caspase-3 PDTC

2015-12-11）

浙江省中醫(yī)藥科學(xué)研究基金計(jì)劃（2011ZB014）

310014 杭州，浙江省人民醫(yī)院兒科（周琴、張勤）；杭州市兒童醫(yī)院神經(jīng)科（李光乾、周素芽）

周素芽，E-mail：suya.zhou@163.com